不同碳氮浓度对苏云金芽胞杆菌的影响.docx
《不同碳氮浓度对苏云金芽胞杆菌的影响.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《不同碳氮浓度对苏云金芽胞杆菌的影响.docx（10页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。
不同碳氮浓度对苏云金芽胞杆菌的影响
不同碳氮浓度对苏云金芽胞杆菌的影响
毕艳梅陈忆
摘要：
确定不同浓度培养基成分对苏云金芽孢杆菌发酵的影响。
实验结果表明，不同浓度培养基成分配比对苏云金芽孢杆菌生长影响差别很大，2%的碳浓度对苏云金芽孢杆菌生长较好，不同的豆饼粉对苏云摘要：
研究不同碳氮浓度对苏云金芽孢杆菌生长情况的影响，对苏云金芽孢杆菌液态发酵培养基进行优化，将发酵产品干燥粉碎后制成菌悬液，通过测量其吸光度来金芽孢生长影响不大。
利用蒽酮硫酸法测定培养基中糖的含量，分光光度计测定吸光值，在一定范围内吸光度与糖浓度呈线性比例
Outline:
Suresomemediumcomponentswithdifferentconcentrationsoftheinfluenceofbacillusfermentation.Experimentalresultsshowthatdifferentconcentrationdistributionmediumintosomebacillusthan2%growthinfluenceddifferenceisverybig,thecarbonconcentrationonsomebacillusgrewmoregood,differentDouBingpowderonSuYunthecarbonandnitrogen:
differentconcentrationofsomebacillus,theinfluenceofthegrowthofsomebacillusliquidfermentation,willoptimizedryfermentationproductsmadeaftersmashingsuspensionliquid,asmeasuredbybacteriaitsabsorbencytogoldsporeslittleeffectsongrowth.Usingthedeterminationofanthraquinoneketonesulfuricacidmediumsugarcontent,absorbthelightspectrophotometertomeasurevalues,withinthescopeofcertainandabsorbencyandsugarconcentrationlinearproportion。
关键字：
苏云金芽孢杆菌芽孢率蒽酮硫酸法分光光度计
Keywords:
somebacillussporesrateanthraceneketonehydrate-sulfurics
前言：
苏云金芽孢杆菌（简称Bt）是目前世界上生产和使用量最大的生物杀虫剂，属革兰氏阳性菌。
在稳定生长期可形成半胞晶体，又称杀虫晶体蛋白。
与化学杀虫剂相比，苏云金芽孢杆菌对营养物质的要求不高，0．075％～OI225％、含糖0．1～1．5和糖氮比0．44～2O．0的环境下就能很好地生长，但是选合适的碳源、氮源和无机盐以及它们之间的比例直接影响到目标产物伴孢晶体的产生。
目前BT发酵培养基配方主要有玉米粉，酵母粉，豆饼粉，面粉，鱼粉以及其他一些因素，但由于配比的不合适，使得Bt伴胞晶体含量不高调整培养基中各种物质的配比，可以改善细菌生长条件，提高BT伴胞晶体含量。
1材料与方法
苏云金芽孢杆菌：
由合肥工业大学生物与食品工程实验室提供。
1.1.碳源单因子发酵培养基：
面粉（0.5%，1%，2%）豆饼粉0.5%硫酸二氢铵0.04%磷酸二氢钾0.04%硫酸镁0.01%酵母粉1.6%
1.2.氮源单因子发酵培养基豆饼粉（0.3%，0.5%，0.7%）面粉1%硫酸二氢铵0.02%磷酸二氢钾0.04%硫酸镁0.01%酵母粉1%
1.3.液体种子培养基牛肉膏蛋白冻培养基
1.4.发酵条件250ml三脚瓶装30ml培养基,初始pH7～8高压灭菌121℃20min.以体积分数为1%接种量转接液体菌种,置于28℃,200r/min的摇床内进行发酵培养;92h后对发酵液中的芽孢含量进行测定.
1.5.培养基的优化通过单因子实验确定苏云金芽孢杆菌培养基的最适碳氮源浓度,影响芽孢产量的重要因子,再通过梯度实验法和平板涂布法分析对重要因子的水平进行优化
1.6.水平设计不同浓度的培养基共六个锥形瓶实验中要有无菌意识，无菌做的好坏是影响实验质量的重要因素分别取10-810-910-10三个浓度测定发酵液芽孢量变化趋势.
1.7.涂抹平板计数法先在每一灭菌平皿中倾注15ml左右的固体培养基，制成平板，做好标记，每个稀释度三个平行，然后用无菌吸管吸取0.1ml样品稀释液对号接种在不同稀释度的培养皿中的琼脂平板上，然后分别用无菌玻璃涂抹棒将稀释液涂布均匀，平放桌上约20～30分钟，使稀释液渗透于培养基中，然后将培养皿倒置，37℃培养，至长出菌落即可计数。
1.8.芽孢量测定用孔雀绿将菌液进行染色,在用番红复染芽孢被染成绿色，营养体是红色的色,在显微镜下观察计数。
1.9.蒽酮硫酸法测定糖的浓度根据比例计算取76.74ml硫酸，31.8ml水2g蒽酮配制0.2%蒽酮硫酸溶液测定吸光度
2 结果与分析
2.1 不同碳浓度对苏云金芽孢杆菌芽孢产量的影响，用培养基1进行实验
对苏云金芽孢杆菌进行发酵培养,三种浓度的培养皿标号为A1，B1,C1结果表明3种碳浓度都能促进该菌的生长并产生芽孢.其中以面粉质量为0.6g时面粉培养基芽孢产量最多,结果见图1.
图1
A1
B1C1
2.2不同氮源对苏云金芽孢杆菌芽孢产量的影响
以面粉作为碳源,分别以0.09g0.15g0.21g的豆饼粉为氮源,标号为A2，B2，C2进行单因子实验.在培养过程中苏云金芽孢杆菌生长良好,各种培养基组合都有芽孢产生,但在芽孢产量0.15g豆饼粉中生长最好大,结果如下图2所示.
图2
A2
B2C2
本次实验中遇到了好多问题，碳组实验基本成功菌数生长清晰，氮组实验失败了，做了10-610-710-8三个梯度的平板培养，培养出来的菌数生长太旺盛，几乎布满了培养皿表面，菌数那么多的原因是我们在做试管梯度的时候，每次往试管中加1ml的菌液后摇匀不充分;另一原因是酵母粉的加入也起了氮浓度的作用，氮浓度增大了，菌落数目增多；实验的精密度也不高，我们的实验技能不够熟练。
第一次配蒽酮硫酸溶液，由于硫酸的质量百分数搞错了，取了98%，配出来的溶液颜色不对，无法测定吸光值。
总的来说第一次实验基本失败。
周五晚上六点我们小组决定重做实验，周五晚上把我们一个大组的两百多支试管，几十个培养皿，和若干移液管洗净，包扎，消毒，周六上午开始做梯度实验，24小时以后去看菌落生长情况，测吸光度，制片。
周一下午再测一次吸光度。
吸光度如下表格，实验过程中能够曾把辛辛苦苦制好的片随便放以致被同学的衣袖扫到地上去了，好心疼，但是晚了。
这件事告诉我，做事不要那么马虎，不然会给自己带来很多麻烦。
周一下午实验基本结束了，第二次实验生长的菌数还是较多，但是比第一次好一点，重做实验测出来的吸光度就比较合理
2.3
表1吸光度测定结果
项目
实验
次数
面粉不同含量（g）
豆饼粉不同含量（g）
0.15
0.3
0.6
0.09
0.15
0.21
第一次
0.034
0.056
0.126
0.098
0.064
0.074
第二次
0.017
0.030
0.075
0.074
0.038
0.034
差值
0.017
0.026
0.051
0.024
0.026
0.043
从吸光度的差值可以看出糖的利用率情况。
取10-2浓度的菌液制玻片，
芽孢的生长情况如图所示
A1
A2
A3
B1
B2
B3
苏云金芽孢杆菌被革兰氏碘液染成蓝色属阳性菌
苏云金芽孢染色结果
致谢：
感谢杨老师的悉心指导和合理的实验策划。
感谢老师们给我们做好实验的所有准备、提供了许多方便，也感谢跟我一起进行实验的陈忆同学。
在你们的竭诚帮助下，使我的实验能够顺利完成，对于你们为我所做的一切，我深表感谢！
参考文献：
[1]杨梅,张峰,苏新华等.苏云金芽孢杆菌LLB19发酵培养基的优化.福建师范大学学报。
2009,3:
75-81[2]SchnepfE,CrickmoreN.Bacillusthuringiensisanditspesticidalcrystalproteins[J].MicrobiologyandMolecularBiologyReviews,1998,62（3）:
775-806.[3]朱玮,赵兵,王晓东等.生物农药苏云金芽孢杆菌的研究进展[J].过程工程学报,2004,4（3）:
282-288.[4]关雄.苏云金芽孢杆菌研究回顾与展望[J].中国农业科技导报,2006,8（6）:
5-11.[5]吴继星,谢天健,陈在佴,等.苏云金杆菌8521026（s）发酵培养基的筛选[J].微生物学通报,1988,15（6）:
254-256.[6]黄天培,邱思鑫,黄志鹏,等.苏云金杆菌摇瓶发酵培养基[J].福建农林大学学报:
自然科学版,2002,31（3）:
317-319.[7]常亚飞,陈守文,喻子牛.苏云金素发酵培养基的优化设计[J].中国生物防治,2006,22（3）:
190-194.[8]郑毅,周堍,黄勤清,等.产耐温蛋白酶苏云金芽孢杆菌FS140液体发酵条件优化[J].应用与环境生物学报,2007,13（5）:
708-
升级会员 