溶液各种配制.docx
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溶液各种配制
附录：
常用试剂配制及应用
一、常用缓冲液、试剂的配制
碳酸盐缓冲液（）
由于碳酸盐值偏碱，因此，常用于>9的缓冲液配制（附表1）。
附表1.0.2碳酸盐缓冲液（9.2～10.7）
0.223
（）
0.23（）
0.223
（）
0.23（）
9.2
4.0
46.0
10.0
27.5
22.5
9.3
7.5
42.5
10.1
30.0
20.0
9.4
9.5
40.5
10.2
33.0
17.0
9.5
13.0
37.0
10.3
35.5
14.5
9.6
16.0
34.0
10.4
38.5
11.5
9.7
19.5
30.5
10.5
40.5
9.5
9.8
22.0
28.0
10.6
42.5
7.5
9.9
25.0
25.0
10.7
45.0
5.0
磷酸缓冲液（，）
磷酸盐是使用最广泛的一种缓冲剂，由于它们是二级解离，有二个值，所以用它们配制的缓冲液，范围最宽。
24：
1＝2.12，2＝7.21；24：
1＝7.21，2＝12.32。
另外，磷酸盐还有钾盐分子形式，一般来说，低温时钠盐难溶，钾盐易溶，因此，配制细胞培养用试剂时常常添加钾盐试剂，但若配制十二烷基硫酸钠（）-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用钠盐而不能用钾盐，因为会与磷酸钾生成难溶的十二烷基硫酸钾。
磷酸缓冲液的优点为：
①可配制成不同离子强度的缓冲液；②适用缓冲范围较宽；③受温度影响缓冲液值变化较小；④离子强度对缓冲液影响较小，如0.1缓冲液稀释10倍其变化小于0.1。
磷酸缓冲液的缺点是：
①磷酸盐易与钙离子（2+）、镁离子（2+）及重金属离子结合生成不溶的沉淀物；②可能干扰某些生物化学反应过程，如对某些酶的催化活性具有一定程度的抑制作用。
24的值偏酸性，可用作<4的缓冲液。
24的值偏碱性，可用作>10的缓冲液。
而＝6～8的中性缓冲液是更常用的缓冲液，需要24与24两种磷酸盐混合配制（附表2）。
附表2.0.2磷酸盐缓冲液（5.7～8.2）
0.224
（）
0.22H4（）
0.224
（）
0.22H4（）
5.7
93.5
6.5
7.0
39.0
61.0
5.8
92.0
8.0
7.1
33.0
67.0
5.9
90.0
10.0
7.2
28.0
72.0
6.0
87.7
12.3
7.3
23.0
77.0
6.1
85.0
15.0
7.4
19.0
81.0
6.2
81.5
18.5
7.5
16.0
84.0
6.3
77.5
22.5
7.6
13.0
87.0
6.4
73.5
26.5
7.7
10.5
89.5
6.5
68.5
31.5
7.8
8.5
91.5
6.6
62.5
37.5
7.9
7.0
93.0
6.7
56.5
43.5
8.0
5.3
94.7
6.8
51.0
49.0
8.1
4.2
95.8
6.9
45.0
55.0
8.2
3.0
97.0
磷酸盐缓冲溶液（,）
磷酸盐缓冲液是在磷酸缓冲液基础上添加以维持溶液的渗透压，因此，适用于做细胞缓冲液，常用配制如下。
8g
0.2g
241.44g
240.24g
在800蒸馏水中溶解，用调节溶液的值至7.2～7.4加水定容至1L，15（1.052）高压灭菌20，室温保存备用。
缓冲液（,）
的值偏于碱性，因此，通过添加调节至所需值，缓冲液的离子强度（）是专指的浓度，如某一特定的0.05缓冲液的配制是将500.1碱溶液与附表3所示相应体积（）的0.1混合，加水至将体积100，即为0.05缓冲液。
另外，按附表3制备的缓冲液，由于试剂来源的不同，缓冲液可能与所需略有差异，此时可通过稍许减少或增加用量，精细调节至所需值。
附表4.0.05缓冲液
需0.1（）
需0.1（）
7.1
45.7
8.1
26.2
7.2
44.7
8.2
22.9
7.3
43.4
8.3
19.1
7.4
42.0
8.4
17.2
7.5
40.3
8.5
14.7
7.6
38.5
8.6
12.4
7.7
36.6
8.7
10.3
7.8
34.5
8.8
8.5
7.9
32.0
8.9
7.0
8.0
29.2
盐缓冲液（）：
盐缓冲液是在缓冲液基础上添加以维持溶液的渗透压，因此，也适用于做细胞缓冲液，常用配制如下。
8g、0.2g以及3g溶解于800蒸馏水中，加入0.015g酚红并用调至7.4用蒸馏水定容至1L，分装后在15（1.052）高压灭菌20，室温保存。
现在常用盐缓冲液通常不加指示剂，而且该溶液如果不用于细胞培养，通常不加及酚红。
’s液（’s）
’s液是一种平衡盐溶液，主要用于细胞培养取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗等。
贮存液A液：
（I）80g
4g
4·7H2O1g
2·6H2O1g
用双蒸馏水定容至450。
（）21.4g（或2·2H2O1.85g）
用双蒸馏水定容至50。
将I和液混合，即成A液。
贮存液B液：
24·12H2O1.52g，
240.6g,
酚红0.2g,
葡萄糖10.0g,
酚红应先置研钵内磨细，然后按配方顺序一一溶解，用双蒸馏水定容至500。
（3）应用液：
A、B储存液分别经112.6℃湿热灭菌20，取A和B液各25，加无菌双蒸馏水至450，使用前用无菌的3.5%或5.6%3调至所需。
注意：
药品必须全部用试剂，并按配方顺序加入，用适量双蒸水溶解，待前一种药品完全溶解后再加入后一种药品，最后补足水到总量。
无2+、2+’s液（’s,）
80g,
4g,
24·12H2O1.52g，
240.6g,
葡萄糖10g,
用双蒸馏水溶解后，加入0.4％酚红溶液50，再加入双蒸水至1000，112.6℃湿热灭菌20，4℃冰箱保存。
临用前将原液用无菌双蒸水作1：
10倍稀释，用无菌的3.5%或5.6%3调至所需。
7.2柠檬酸盐缓冲液（）
柠檬酸0.327g
柠檬酸钠2.63g
磷酸氢钠0.222
葡萄糖0.00255
蒸馏水加至100。
3.3枸橼酸-磷酸盐缓冲液（）
0.131，0.06624，等量混合，调节至3.3。
0.5,8.0
·2H2O186.1g
～20g
将·2H2O加入800水中，在磁力搅拌器上剧烈搅拌。
用调节至8.0，直到接近8.0才完全溶解，定容至1L。
分装后高压蒸汽灭菌。
0.4%酚红溶液
取酚红0.4g置于研钵中逐滴加入1溶液11.28，边研磨边使酚红转变为钠盐溶于水中，加双蒸水至100，过滤后，4℃冰箱保存。
醋酸钾（）
在605醋酸钾溶液中，加入11.5冰醋酸和28.5水。
该溶液用于碱性裂解。
3醋酸钠（），5.2和7.0
在800水中溶解408.1g三水醋酸钠，用冰乙酸调至5.2或用稀释乙酸调至7.0，加双蒸水至1L。
分装后高压灭菌。
柠檬酸钠缓冲液（）
柠檬酸钠1.8g
（1）4
无水乙醇95
先用100去离子水溶解柠檬酸钠，然后加入和无水乙醇，再补充去离子水至总量200。
饱合硫酸铵溶液（）
取500双蒸馏水，加入约400克硫酸铵，水浴加热至70℃，磁力搅拌器充分搅拌，直到加入的硫酸铵不再溶解，以氨水（也可用）调7.2，室温保存。
二、酶免疫检测常用试剂配制
包被液（）（9.5碳酸盐缓冲液）
23·10H2O8.58g
35.8g
溶于双蒸水至1000。
封闭液（）（5%脱脂乳溶液，7.4）
脱脂乳50g
加0.027.4磷酸盐缓冲液（）至1000溶解。
洗液（）
氯化钠8.0g
磷酸二氢钾0.2g
磷酸氢二钠（12H2O）2.9g
吐温-200.5
加去离子水至1000溶解即可。
终止液（）（2H24）：
21.7H24加去离子水至200。
缓冲甘油（）
甘油9份
（8.0）1份
将9份甘油与1份合并，充分混匀。
0.52O2-甲醇液（）（总体积120）
32O220
甲醇100
2O2底物缓冲液（H2O2）
取6二氨基联苯胺（33’）溶解于100.057.6。
使用前取0.32O20.1加入到溶液中（H2O2的终浓度为0.003%）。
如有沉淀生成，则用滤纸过滤。
5-溴-4-氯-3吲哚磷酸/四唑氮蓝底物显色液（）
贮存液配制：
：
在1070%的乙醇中溶解0.5g。
：
在10100%二甲基甲酰胺中溶解0.5g。
贮存液4℃保存，可稳定一年。
底物显色液：
取66μl贮液与33μl加入到10碱性磷酸酶缓冲液中，充分混匀，底物显色液应在用前1小时内配制。
三、细胞相关试剂配制
谷氨酰胺（）溶液（）（0.2）
称2.9g谷氨酰胺（分子量为146.15）用去离子水溶解至100，过滤除菌，分装小瓶，4～5瓶，-20℃冻存。
100x青-链霉素（双抗）溶液（）
取青霉素G（钠盐）100万单位和链霉素（硫酸盐）1g，溶于100去离子水中，分装小瓶，4～5瓶，-20℃冻存。
7.5%3溶液（3）
称分析纯37.5g，用去离子水溶解至l00，过滤除菌，分装小瓶，4～5m1/瓶，盖紧瓶塞，4℃保存。
溶液（）
（1）
称23.83g（2'-2，2-羟乙基呱嗪'-2-乙基磺酸，分子量为238.3），用去离子水溶解至100，过滤除菌，分装小瓶，4～5m1/瓶，4℃保存。
氨基喋呤（A）贮存液（）（100×,4×10-5）
称1.76氨基喋呤（,分子量440.4），溶于90m1去离子水中，滴加l0.5m1，并不断搅动，待氨基喋呤完全溶解后，加1的0.5m1中和，再补加去离子水至100m1。
过滤除菌，分装小瓶，2瓶，-20℃冻存。
次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷贮存液（）（100×:
10-2;T:
1.6×10-3）
称取136次黄嘌呤（，分子量136.1）和38.8胸腺嘧啶核苷（，分子量242.2），加去离子水至l00，置45～50℃水浴中使完全溶解，过滤除菌，分装小瓶，2m1/瓶，-20℃冻存。
用前可置37℃加温助溶。
培养液
培养液98，A贮存液1m1，贮存液l。
秋水仙素溶液（）
称取10秋水仙素，溶于100m1生理盐水中（即为100μ），过滤除菌后，分装小瓶，－20℃冻存备用。
’s血细胞保存液（’s）
葡萄糖2.05g,
柠橡酸钠0.8g,
0.42g，
蒸馏水l00。
以上成分混匀后，微加温使其溶解后，用柠檬酸调节6.1，分装于三角瓶中（30～50瓶）,113℃湿热灭菌15，4℃保存备用。
细胞冻存液（）
50%小牛血清；40%不完全培养液；10（二甲基亚砜）。
0.025%胰蛋白酶－0.2细胞消化液（）
A:
2.5%胰蛋白酶:
胰蛋白酶2.5g
磷酸缓冲盐溶液100
过滤除菌保存。
B:
0.2%二乙胺四乙酸二钠（）
0.2g
双蒸馏水100
高压灭菌保存。
取A液1份，加B液99份，混匀，分装-20℃保存。
0.83%4溶液（）
40.83g
30.1g
·20.0037g
蒸馏水加至100。
4溶液（）
43.735g/450双蒸水1.3g/50双蒸水（7.65）。
细胞裂解液（）
20（7.5）
150
1
10μ
1
1%100
0.5%（）
0.1%
组织匀浆缓冲液（）
50（7.5）
150
1%40
1
4μ
1μ
细胞核裂解液（）
10（8.0）
150
10
蛋白酶K100µ
0.4（最后加）
10苯甲基磺酰氟（）
在异丙醇中溶解至1.74，即10，分装后保存于-20℃，如果需要的话，可将储存液制备至17.4，即100的高浓度。
闪烁液（）
（2,5-二苯基）5.0g、（1,4-双－5－苯基）0.5g溶于1000二甲苯中。
也可将加入二甲苯，在37℃水浴上溶解后，再加，然后补足二甲苯。
3工作液（）
按1:
20的比例将浓度为1的3H－用无血清的培养液稀释，终浓度为50µ。
肝素溶液的配制：
含有肝素的培养液可以使内皮细胞纯度提高，肝素加入全培养液中最终浓度为50。
因为现在市售的多为肝素钠，包装为约为0.56克/瓶，配制时，可将其溶于100三蒸水中，定容，过夜，然后过滤除菌，分装小瓶，保存温度为4℃。
使用时，向100培养液中加入1（精确可加入0.9）即可。
Ⅰ型胶原酶：
0.1％Ⅰ型胶原酶溶液同胰蛋白酶一样配制和消毒灭菌。
注意：
因为Ⅰ型胶原酶分子颗粒比胰酶大，不容易过滤，因此可以用蔡式滤器过滤除菌。
分装入10小瓶-20℃保存。
用时提前一小时37℃复温即可.0.1%的I型胶原酶的配置，100的粉末状的I型胶原酶可以溶于100的12，0.22微米滤器过滤0.1%的I型胶原酶的配置，100的粉末状的I型胶原酶可以溶于100的12，0.22微米滤器过滤.
四、染色液配制（）
苏木素液（）：
苏木素2.5g，乙醇25.0，钾明矾2.5g，氧化汞1.25g，冰乙酸20.0，蒸馏水500.0。
配制方法是先将苏木素溶于乙醇中（稍加热）。
将预先已溶解明矾的蒸馏水加入苏木素乙醇液中，使溶液尽快沸腾后，将火焰熄灭，慢慢加入氧化汞，防止溶液油溅出，再煮沸2。
将烧瓶立即浸入冷水中，当染液冷却后，加入醋酸，室温保存，用前过滤。
伊红Y染色液（Y）
伊红Y0.5～1.0g，蒸馏水75，95%乙醇25，冰乙酸1～2滴。
先取少许蒸馏水加入伊红，用玻棒将伊红研碎，再加入全部蒸馏水，溶解后加入乙醇。
甲基绿染色液（）
新购买的甲基绿需用氯仿处理去除甲基紫。
方法是将2%甲基绿水溶液20倾入洁净分液漏斗，移去慢慢下沉带紫红色的氯仿，再加入新的氯仿10，如此反复更换氯仿，到无紫红色为止。
该液作为贮存液，4℃保存。
染色液：
甲基绿贮存液5，5%派诺宁水溶液1，蒸馏水12，0.2乙酸钠（4.8）18（临用前配制，滤纸过滤）。
吖啶橙贮存液（）
10吖啶橙溶解于100中，4.8～6.0滤过，4℃避光保存。
吉姆萨贮存液（）
吉姆萨染色粉1g先溶于少量甘油，在研钵内研磨30以上，至看不见颗粒为止，再将全部（66）剩余甘油倒入，于56℃温箱内保温2h。
然后再加入甲醇（66），搅匀后保存于棕色瓶中。
母液配制后放入冰箱可长期保存，一般刚配制的母液染色效果欠佳，保存时间越长越好。
临用时用7.4磷酸缓冲液稀释10倍，随配随用。
瑞氏染色液（’s）
瑞氏染色粉0.3g
甘油3
甲醇97
将瑞氏染色粉放干燥研钵内磨细，加入甘油继续研磨，不断滴加甲醇并继续研磨，将上层溶解的染料倒入棕色瓶中，直至染料全溶后加甲醇至所需量。
混匀后置棕色瓶中保存，用前过滤。
一般配制后置室温一周便可使用，保存时间愈入，则染色效果愈佳。
吉姆萨-瑞氏染色液（’s）
瑞氏染色粉0.3g
吉姆萨染色粉0.03g
甲醇100
将二种粉末置于研钵中磨细，再逐滴加入甲醇混匀后倒入棕色瓶中，塞紧瓶口并充分振荡。
置室温溶解后使用。
噻唑兰（）
称取250，加50（0.01，7.4）在磁力搅拌器上搅拌30，用0.22μm的微孔滤膜过滤除菌，分装，4℃保存。
两周内有效。
台酚蓝染色液（）
A：
台酚蓝染料1g
蒸馏水100
将染料置于研钵中边研磨边加入蒸馏水溶解。
B：
1.7g
蒸馏水100
临用前A、B液1：
1混合，离心沉淀，取上清供染色用。
混合后的染液存放过久，易形成沉淀，故应新鲜配制。
染色时，取细胞悬液0.1加入新鲜配制的染色液一滴，室温下染5～10分钟，取一滴悬液于载波片上，加盖玻片，高倍镜下检查。
死亡细胞膨大并染成浅蓝色，活细胞不着色，大小正常。
五、固定剂（）
大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。
但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不同。
某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。
因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽类）的化学性质，并根据需要来选择适宜的固定剂（或固定方法）以及改进固定条件。
目前，免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂，其中以甲醛类和戊二醛最为常用。
4%多聚甲醛-0.1磷酸缓冲液,7.3（）
多聚甲醛 40g
0.1磷酸缓冲液 至1000
配制方法：
称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500～8000.1磷酸缓冲液（以下简称），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）至完全溶解，通常需滴加少许1N才能使溶液清亮，最后补足0.1的于1000，充分混匀。
该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究，最好是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定2～24h。
另外，该固定剂较为温和，适于组织标本的较长期保存。
4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠（）
A液：
多聚甲醛 40g
蒸馏水 400
B液：
24·2H2O 16.88g
蒸馏水 300
C液：
3.86g
蒸馏水 200
配制方法：
A液最好在500的三角烧瓶中配制（方法同前），至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。
注意，在溶解多聚甲醛时，要尽量避免吸入气体或溅入眼内。
B液和C液配制好后，将B液倒入C液中，混合后再加入A液，以1N或1N将调至7.2～7.4，最后，补充双蒸水至1000充分混合，4℃冰箱保存备用。
该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，最好加入少量新鲜配制的戊二醛，使其终浓度为0.5%～1%。
该固定剂较温和，适于组织的长期保存。
组织标本于该固定液中，4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。
六、蛋白电泳相关试剂
30％丙烯酰胺（）
丙烯酰胺29g
N,N’-亚甲双丙烯酰胺1g
溶于60水中，加热至37℃溶解，补加水至终体积100。
0.45µM滤器过滤除杂质，置深色瓶中室温保存。
考马斯亮蓝250染色液（）
1.称取1g考马斯亮蓝250，置于1L烧杯中。
2.量取250的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解。
3.加入100的冰醋酸，搅拌均匀。
4.加入650的去离子水，搅拌均匀。
5.用滤纸除去颗粒物质后，室温保存。
考马斯亮蓝脱色液（）
量取下列溶液，置于1L烧杯中，充分混合后使用。
醋酸100
乙醇50
2O850
1二硫苏糖醇贮存液（）
用200.01乙酸钠溶液（5.2）溶解3.09，过滤除菌后分装成1小份贮存于－20℃保存。
或含有的溶液不能进行高压处理。
0.12.4甘氨酸缓冲液（）
称取固体甘氨酸（75.07）15.01克，用蒸馏水溶解后，加入0.2648，然后定容成2000。
2×凝胶加样缓冲液（2×）
100（6.8）
200二硫苏糖醇（）
4（电泳级）
0.2%溴酚蓝
20%甘油
不含二硫苏糖醇的2×凝胶加样缓冲液可以保存于室温，临用前须从1二硫苏糖醇（）贮存液现用现加于上述缓冲液。
10%十二烷基硫酸钠（）
在900蒸馏水中溶解100g电泳级,加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的值至7.2，加水定容至1L，分装备用。
的微细晶粒易于扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的,10溶液无需灭菌。
电转印缓冲液为（）
3g
14.4g
0.185g
加入甲醇200，用去离子水调至1000。
乙酸50×（）
碱242g
冰乙酸57.1
0.5（8.0）100
蒸馏水定容至1L。
硼酸5×（）
碱54g
硼酸27.5g
0.5（8.0）20
蒸馏水定容至1L。
缓冲液10×（7.4,7.6,8.0）
1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。
1（7.4,7.6,8.0）100
500（8.0）20
2.向烧杯中加入约800的去离子水，均匀混合。
3.将溶液定容至1L后，高温高压灭菌。
4.室温保存。
－甘氨酸缓冲液（5×）
15.1g
甘氨酸（电泳级）94g
10％（电泳级）50
蒸馏水定容至1L。
七、淋巴细胞分离液
聚蔗糖－泛影葡胺分层液（）
90g聚蔗糖15，加500g泛影葡胺10（比重1.14）。
90g聚蔗糖17.5，加500g泛影葡胺10（比重1.13）。
90g聚蔗糖20，加500g泛影葡胺10（比重1.12）。
90g聚蔗糖24，加500g泛影葡胺10（比重1.08）。
配制（）
将一份10×与9份贮存液混合，制成等渗悬液，此悬液被认为是100，其密度为1.1294。
利用1×或细胞培养液稀释100%，可获得适宜密度的细胞分层液，用于各种细胞的分离，其浓度与密度的关系如下：
70%比重1.090g
60%比重1.077g
50%比重1.067g
40%比重1.056g
30%比重1.043g
20%比重1.037g
人外周血单个核细胞（）分离分层液配制
9％聚蔗糖（） 24份
34％泛影葡胺（） 10％
混合，测比重为1.077～1.078，G5玻璃滤器过滤除菌。
4℃冰箱保存备用。
八、其它试剂
佐剂（）
动物实验常用弗氏佐剂（），其成分通常是羊毛脂1份、液体石腊油5份，羊毛脂与石腊油的比例，视需要可调整为1：
2～9（），充分混合后即是不完全福氏佐剂，如果在每毫升不完全佐剂加入1～20卡介苗就成为完全弗氏佐剂。
配制方法：
将羊毛脂与石蜡油按比例置于容器内，超声波混匀，高压灭菌，4℃保存备用。
免疫前取等容积完全或不完全佐剂与免疫原溶液混合，用振荡器混匀成乳状，也可以在免疫前取需要量佐剂置乳钵中研磨，均匀后再边磨边滴加入等容积抗原液（其中加卡介苗3～4或不加），加完后再继续研磨成乳剂，滴于冰水上5～10内完全不扩散为止。
为避免损失抗原，亦可用一注射器装抗原液，另一注射器装佐剂，二者以聚乙烯塑料管连接，然后二者来回反复抽吸，约数十分钟后即能完全乳化。
检查合格后即以其中一注射器作注射用。
清洁液（）
配方1：
重铬酸钾100g
蒸馏水200
浓硫酸800
将重铬酸钾加入蒸馏水中，使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大坩埚中加热溶解，然后慢慢加入浓硫酸，边加边搅拌，见发热过
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