检验科校准SOP_检验科SOP_03.docx

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检验科校准SOP手册目录

编号

名称

页面

SOP_03-1

血液分析仪校准的标准操作程序

3-7

SOP_03-2

凝血分析仪校准的标准操作程序

8-10

SOP_03-3

生化分析仪校准的标准操作程序

11-13

SOP_03-4

酶标分析仪校准的标准操作程序

14-15

SOP_03-5

移液器校准的标准操作程序

16-16

SOP_03-6

温、湿度计校准的标准操作程序

17-17

 文件审批者：

　　　　　　　　　　发布日期：

 操作者从事本项工作前，必须认真学习并掌握本手册的内容，严格按照操作规程操作！

学习者:

休订书册与增补程序内容与日期：

学习者：

休订书册与增补程序内容与日期：

学习者：

SOP_03-1血液分析仪校准的标准操作程序

一、目的：

确保仪器正常运转与结果的准确性，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。

二、适用范围：

血液常规与网织红细胞检验项目的校准。

三、操作人员：

检验科授权工作人员

四、操作步骤：

1 仪器性能评价：

1.1.精密度，即重复性。

一般仪器制造商要求产品的最大误差允许范围为定值，传递和漂移的最佳CV值的3倍，一般Hb 1.0 ％,WBC 3.0 ％，PLT 5.0 ％。

1.2.携带污染率，即标本间的相互干扰程度。

当然是越低越好，一般要求<2 ％。

1.3.线性范围，即仪器能保证正确检测的最低值到最高值的范围。

1.4.可比性，即和血细胞计数盘人工计数之间的比较。

要求两者计数结果在统计学上无显著性差异，如果用差值d进行统计学处理两种方法p>0.05。

白细胞分类计数也同样采取与涂片上人工分类计数相比较。

1.5.准确性．即与真值的一致性。

真值的检测必须使用决定性方法，至少是参考方法。

按照ICSH公布的评价方案，血红蛋白的参考方法是HiCN法，红细胞比积的参考方法是微量血细胞比容测定法。

可以将一定数量的标本同时用参考方法和仪器法进行配对检测，然后进行t检验来评价仪器在检测Hb，Hct时的准确性。

表1所示为血细胞计数所允许的最大偏倚。

表1血球计数总偏倚的最大允许界限（％）

检查项目

低值范围

中值范围

高值范围

WBC

±14.6

±14.6

±14.6

RBC

±6.10

±5.30

±5.O0

Hb

±6.40

±4.50

±5.40

MCV

±4.90

士4.20

±4.40

PLT

±22.0

±22.0

±22.0

2 仪器的校准：

2.1 校准是指在规定条件下，为确定测量仪器或测量系统所指示的量值，或实物量具或参考物质所代表的量值，与对应的由标准所复现的量值之间关系的一组操作。

也就是确定检测系统测量值和真值之间的关系，要保证测量值与真值尽可能一致或者建立一个固定的关系。

而上述检测系统在检测具有定值的校准品时必须能够满足溯源的要求。

2.2 校准的主要目的：

（1）确定示值（测定值）的误差，误差是否在允许范围内；

（2）得出标称值（定值）偏倚的报告值，并加以调整或修正；

（3）确定测量仪器和参考物的特性；

（4）实现溯源性。

校准必须使用标准物质，又称参考物质或校准品，它是一种充分均匀，并具有一个（或多个）确定的特性值的材料或物质。

一级标准物质稳定、均一，采用高度准确，可靠的若干方法定值，用于校准决定性方法及为二级标准物质定值。

由国家技术监督局批准，颁布并授权生产。

血细胞尚无此标准物质。

二级标准物质用一级标准物质校准，用于参考方法定值。

如红细胞微粒标准物质，氰化高铁血红蛋白溶液标准物质和纯化血红蛋白标准物质。

校准品用二级标准物质校准，用常规方法定值。

用以校准仪器设备，评价测量方法，或给予其他物质赋值。

标准物质的定值结果一般表示为：

标准值（总不确定度。

注意校准物（品）和质控物（品）是两种不同的物质。

校准物是指“一种用于校准，分度或修正测量值的物质或装置”。

这种物质或装置必须能溯源到国家的或国际的参考制剂或参考物。

溯源性是指一个测量结果或测量标准的值，都能够通过一条具有规定不确定度的连续比较链与测量基准（国际基准或国家基准）联系起来，从而使常规工作中测定结果的准确性和一致性得到技术保证。

2.3 校准的方法：

2.3.1 决定性方法：

指详尽研究尚未发现不确定度或不确定原因的方法；

2.3.2 参考方法：

指详尽研究证实其不确定度与不精密度可以忽略的方法；

2.3.3 常规方法：

可满足临床或其他目的需要的日常使用方法。

2.4 质控品：

不同于校准物，它是“一种用于常规工作中核查分析过程（或者仪器）准确性的物质。

该物质在性质上类似于被分析的标本并随病人样本一起进行分析”。

校准物仅用在仪器有变动时，校准物有准确的定值；而质控品与临床化学中应用的质控品及质控方法基本相似，有定值和非定值之分。

校准品可做质控品使用，但质控品决不能做校准品使用。

不同的血液分析仪有自己专用的校准品，MAXM 所用的是 Coulter 5C质控品、Coulter 配套试剂和 S-CAL、乳胶颗粒校准品。

千万注意：

（1）不能使用某一种仪器的校准品去校准其它型号的血液分析仪。

（2）即使相同型号的仪器，但是分散在不同的实验室，使用相同的校准品也会存在一定的不精确性或偏离真值的危险。

3 校准计划：

血液分析仪校准计划同其它检验仪器相似，在以下情况下必须进行校准：

（1）仪器安装，调试，评价以及正式投入临床使用前；

（2）仪器厂家规定的校准时间；

（3）仪器出现故障，工程师或技术人员进行检修后；

（4）更换不同试剂或不同批号的同一种试剂时；

（5）室内质控出现失控时，在找到原因重新进行质控及工作前；

（6）检验结果出现严重误差或发生重大差错；

（7）不同型号仪器之间参数调整，统一或比对。

注意：

以下情况均不属于校准：

（1）仪器的正常保养，维修；

（2）仪器开机后的自检过程和空白校正；

（3）室内质控和室间质评。

4 校准分类：

仪器的校准应包括仪器性能校准（产品校准）和检测系统校准（功能校准）两部分。

第一部分由仪器工程师在仪器出厂和安装调试后以及使用后定期或按计划进行，主要校准仪器的光路、电路及样品针位置等光、机、电三部分的技术参数。

第二部分由检验技术人员在发生“校准计划”中所出现的情况下使用校准物或标准品进行的分析校准。

血液分析仪的性能校准主要有

（1）电压；

（2）孔电流强度；（3）脉冲增益；（4）真空泵或蠕动泵的工作状态。

5 校准品：

对于血细胞分析仪来说，校准品有两种，一种是标准的仪器；另一种是经用参考方法准确定值的血液或其他人工微粒制品。

前者可用ICSH 推荐方法定值新鲜血液后进行仪器的校准。

通常也可使用人工微粒的校准品。

新鲜血校准品不稳定，定值后必须在数小时内使用。

储存血和人工制品（如胶乳颗粒）不能用血液学参考方法定值，只能间接定值。

首先用参考方法对新鲜血定值，然后再用定值的新鲜血校准血液分析仪，再用校准后的仪器对储存血或人工制品进行定值。

6 校准程序：

一般由以下几个主要步骤：

（1）仪器的清洗，自检，调试；

（2）校准品的准备；

（3）严格的上机操作；

（4）校准数据的收集和整理；

（5）校准结果的评价和校准验证；

（6）是否需要重新校准。

血液分析仪校准可使用新鲜血液的定值（国际血液学标准化委员会推荐）或者商品化的全血校准品，也可以采用目测法计数血细胞定值。

6.1 校准前准备：

（1）认真冲洗管道30分钟；

（2）检测稀释液本底，要求 Hb0-1，RBC0-0.4，WBC0-0.4，PLT1-3；

（3）测定10份新鲜血标本，每份标本测定10次，要求其重复性（CV）在仪器规定的范围内：

Hb±1.33％，RBC±1.13％，MCV±1.0％，WBC±2.83％，PLT±3.50％。

（以低范围测定允许值为标准）

6.2 校准品准备：

（1）是否在有效期内，有无变质或被污染；

（2）从冰箱中取出，放置室温15分钟；

（3）轻轻将校准品作“三八式”混匀，使校准品完全混匀；

（4）打开瓶塞时，应垫上纱布或软纸，使外溢的血液被吸收；

（5）将两瓶校准品混合，混匀，再分装在两个瓶内。

6.3 校准过程：

6.3.1 使用仪器厂商提供的校准物：

（1）先取两瓶中一瓶中的校准物，连续测定11次。

（2）取2-11次检测结果，计算均值；均值应比日常报告时保留的小数点后再多一位。

（3）取另一瓶中的校准物，轻轻混匀后，在仪器上重复测定11次，取2-11次结果计算均值。

按照表2中的规定进行检验校准结果的判断。

6.3.2 采用正常人新鲜血作为定值校准品：

（1）使用EDTA-K2为抗凝剂，取血后抗凝剂浓度为 1.85-0.35mg／ml 的真空采血管，采集1份健康人的新鲜血10ml（要求Hb，WBC，RBC，Hct，PLT的检测结果在参考范围内），混匀后再分装于3个管内，每管的血量为3ml。

（2）取其中1管，用二级校准检测系统或规范操作的检测系统连续检测11次，计算2-11次检测结果的均值，并以此值为新鲜血的定值。

（3）取其他2管新鲜血中任何一管在仪器上重复测定11次，取2-11次结果计算均值。

6.4 校准评价：

按照表2中的规定进行检验校准结果的判断

表2 血液分析仪校准标准表

绝对值差异

相对差异％

检测项目

一列

二列

一列

二列

WBC×109／L

0.10

0.40

1.25

5.0

RBC×1012／L

0.03

0.09

0.7

2.0

Hbg／L

1.0

4.0

0.78

2.0

Hct ％

0.80

1.7

2.0

4.5

MCVfl

1.0

2.0

1.18

2.5

PLT×109／L

6.0

20.0

2.7

9.0

MPVfl

0.5

2.0

5.0

20.0

（1）.如果结果差异小于或等于第一列数值，仪器校准初步合格。

（2） 如果结果差异大于第二列数值，表明校准不合格，则请仪器工程师对仪器进行检修。

（3） 如果结果介于第一列和第二列数值之间，应重新校准或请仪器工程师帮助再校准。

还可以使用上述校准方式去评价仪器和评价试剂。

6.5 校准验证和校准记录：

校准初步合格后，应将校准物再重新测定11次，取2-11次的均值与校准物的定值进行比较，其各参数应等于或小于第一列数值，证明校准完全合格。

每次校准都要做好记录，包括时间、原因、操作过程、原始数据、结果和结果评价。

并有校准者签字。

6.6 校正系数（CalibrationFactor）

是调整仪器准确性的一种方法。

一般血球分析仪软件程序中都有自动校准程序，当进行仪器校准时可自动生成一个校正系数，而将原来的校正系数调到1.000。

新的校正系数由标准品每个参数测定均值和其参考值比较而得出。

各仪器测定均值-总均值

偏倚（％）= ————————————————— ×100 ％

总均值

最大值-最小值

极差（％）= ——————————————— ×100％

最大值

偏倚和极差越小越好。

在仪器各自校准后，不同仪器间的极差在红细胞仅为0.74 ％，血红蛋白为1.65 ％，血球比积为5.45 ％，而白细胞为7.06 ％，血小板为18.55 ％。

参考资料：

1 王毓三主编．医院检验科建设管理规范［Ｍ］．南京.东南大学出版社，2003：

1~168

2 卫生部临床检验中心．临床实验室质量管理［Ｍ］．北京：

2000：

1~231

SOP_03-2 凝血分析仪校准的标准操作程序

一、目的：

确保仪器正常运转与结果的准确性，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。

二、适用范围：

血液出血/止血检验项目的校准。

三、操作人员：

检验科授权工作人员。

四、操作步骤：

1 仪器性能评价：

1.1.精密度，即重复性。

一般仪器制造商要求产品的最大误差允许范围为定值，传递和漂移的最佳CV值的3倍。

1.2.携带污染率，即标本间的相互干扰程度。

当然是越低越好，一般要求<2％。

1.3.线性范围，即仪器能保证正确检测的最低值到最高值的范围。

1.4.准确性．即与真值的一致性。

真值的检测必须使用决定性方法，至少是参考方法。

2 仪器的校准：

校准是指在规定条件下，为确定测量仪器或测量系统所指示的量值，或实物量具或参考物质所代表的量值，与对应的由标准所复现的量值之间关系的一组操作。

也就是确定检测系统测量值和真值之间的关系，要保证测量值与真值尽可能一致或者建立一个固定的关系。

而上述检测系统在检测具有定值的校准品时必须能够满足溯源的要求。

2.1 校准的主要目的：

（1）确定示值（测定值）的误差，误差是否在允许范围内；

（2）得出标称值（定值）偏倚的报告值，并加以调整或修正；

（3）确定测量仪器和参考物的特性；

（4）实现溯源性。

校准必须使用标准物质，又称参考物质或校准品，它是一种充分均匀，并具有一个（或多个）确定的特性值的材料或物质。

一级标准物质稳定、均一，采用高度准确，可靠的若干方法定值，用于校准决定性方法及为二级标准物质定值。

由国家技术监督局批准，颁布并授权生产。

2.2 校准计划：

凝血分析仪的校准计划同其它检验仪器相似，在以下情况下必须行校准：

（1）仪器安装，调试，评价以及正式投入临床使用前；

（2）仪器厂家规定的校准时间；

（3）仪器出现故障，工程师或技术人员进行检修后；

（4）更换不同试剂或不同批号的同一种试剂时；

（5）室内质控出现失控时，在找到原因重新进行质控及工作前；

（6）检验结果出现严重误差或发生重大差错；

（7）不同型号仪器之间参数调整，统一或比对。

注意：

以下情况均不属于校准：

（1）仪器的正常保养，维修；

（2）仪器开机后的自检过程和空白校正；（3）室内质控和室间质评。

2.3 校准分类：

仪器的校准应包括仪器性能校准（产品校准）和检测系统校准（功能校准）两个部分。

第一部分由仪器工程师在仪器出厂和安装调试后及使用后定期或按计划进行，主要校准仪器的光路、电路及样品针位置等光、机、电三部分的技术参数。

第二部分由检验技术人员在发生。

“校准计划”中所出现的情况下使用校准物或标准品进行的分析校准。

凝血仪的性能校准，主要包括：

（1）机械部分，样本针和试剂针的位置是否在标准的中央位置。

可通过标准模块作调试。

（2）光学系统，使用标准物质，它具有准确的反射率，校准光源强度。

（3）加样量和自动稀释量，一般主要检查管道是否通畅，有无堵孔，半堵孔和管道内壁是否清洁，压力是否正常，采量是否准确。

样品针探测和感应功能是否正常。

2.4 校准品：

对凝血仪来说，校准物就是我们定标所用的标准品。

定标的过程就是进行仪器的功能校准。

注意：

凝血项目，如PT，APTT，Fig，FDP和D-2聚体的标准品由各仪器或试剂生产厂家提供，不同的标准品有不同的储存要求，有效期和使用方法。

必须严格按照说明书使用，否则校准不会成功，即标准曲线做不出来。

2.5 校准程序：

一般由以下几个主要步骤：

（1）仪器的清洗，自检，调试；

（2）校准品的准备；

（3）严格的上机操作；

（4）校准数据的收集和整理；

（5）校准结果的评价和校准验证；

（6）是否需要重新校准。

2.6 凝血仪校准的基本过程：

就是制作标准曲线。

在使用前最好对PT 试剂的ISI重新标定，即所谓LocalISI。

WHO推荐的凝血活酶ISI标定是用手工法进行的，如果使用仪器法测定PT，试剂上标定的ISI值并不代表仪器检测时真正的ISI值。

研究表明，手工法标定的凝血活酶的ISI值不适合用于PT的自动化检测报告INR值；不同型号的凝血仪对同一种凝血活酶的ISI值影响也有差别。

为了保证仪器报告的INR值在不同实验室间有可比性，须用校正后系统独立的ISI值计算INR值，以克服仪器自身的误差对INR检测系统带来的干扰，因此，主张每个实验室在应用仪器检测PT时都应重新标定自己仪器的ISI值。

具体做法：

（1）仪器为SYSMEX。

（2）试剂为SYSMEX公司标定的ISI值。

（3）所用血浆包括参比血浆，正常人血浆和口服抗凝剂患者的血浆。

（4）标本采集即抽取静脉血4.5ml，注入有0.5ml 拘橼酸钠抗凝剂的塑料试管中，2500g

离心10分钟，分离血浆，PT试验在4小时内完成。

（5）检测方法同用WHO推荐的用已知ISI的凝血活酶标定未知ISI的凝血活酶的方法，

将仪器测定PT时所用的凝血活酶视为ISI未知的凝血活酶，测定其ISI值并与厂家提供的ISI值进行比较。

实验在10天内完成。

操作步骤为：

分别用不同方法（手工挑丝法和仪器法）检测8个标本的PT时间，标本的顺序是2个参比血浆 1个正常人血浆 6个口服抗凝剂患者的血浆 1个正常人血浆。

分别计算每种凝血活酶各个检测方法的PTR，求出其对数值（logPTR），计算用仪器测定时各个凝血活酶的ISI值。

（6）仪器检测时凝血活酶的ISI值用仪器检测logPTR对手工检测同一标本的logPTR

进行描点。

通过线性回归，求得其斜率a，计算仪器测定时的凝血活酶ISI值，计算公式：

ISI（已知）

ISI（未知）=------------------

A

参考资料：

1 王毓三主编．医院检验科建设管理规范［Ｍ］．南京.东南大学出版社，2003：

1~168

2 卫生部临床检验中心．临床实验室质量管理［Ｍ］．北京：

2000：

1~231

SOP_03-3 生化分析仪校准的标准操作程序

一、目的：

确保仪器正常运转与结果的准确性，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。

二、适用范围：

生化检验项目的校准。

三、操作人员：

检验科授权工作人员

四、操作步骤：

一个实验室测定结果的可靠性是由其精密度、准确性及可比性所决定的，一般必需从下面几方面着手：

（1）选好测定方法；

（2）质量过硬的试剂盒；（3）质优的测试仪器；（4）进行正确的校准；

（5）规范化操作；（6）室内质量控制；（7）室间质评活动；（8）一支素质高的队伍。

1 校准：

1.1生化分析仪不论如何先进，它还是一个比较器，它测试出来的标本结果是随着标准限的设置不同而变化的。

所以，在卫生部临床检验中心拟定的“临床实验室（定量测定）室内质控工作指南”中明确指出“对测定标本的仪器一定要求进行校准，校准时要选择合适的（配套的）标准品／校准品；如有可能，校准品应能溯源到参考方法或／和参考物质；对不同的分析项目要根据其特性确立各自的校准频率。

”这说明校准仪器是室内质控的重要部分，强调了校准工作的必要性和重要性，同时指出了校准的方法和要求。

1.2 对于一个临床检测项目，如果所用方法的测定原理、试剂、仪器、校准品中任何一个不同，都可能得到不同的测定结果。

因此，想要得到准确可靠的测定结果，而该结果又具有与国际、国内其他实验室的可比性，应该建立一个标准测定系统。

在全自动生化分析仪上使用配套的试剂和标准品。

各仪器厂家均有自己的标准测定系统。

对于校准品不能乱用，如绝对不能用贝克曼的校准品校准日立生化仪，同样也不能用宝灵曼的校准品去校准贝克曼生化仪。

2 校准品（Calibrationmaterials）：

校准品含有已知量的欲测物，用以校准该测定方法的数值，它与该方法及试剂、仪器是相关联的。

校准品的作用是为了减少或消除仪器、试剂等造成的系统误差。

因此最好为人血清基质，以减少基质效应造成的误差。

3质控品（Controlmaterials）：

质控品只用于和待测标本同时测定的，为了控制标本的测定误差，因此要求保存时间十分稳定。

前者是校准其值而后者是控制误差用的。

4校准前准备：

4.1了解灯泡已使用多久?

检查飘移是否合乎要求；

4.2检查比色杯的清洁及磨损情况?

必要时进行更换；

4.3用清洁剂泡洗管道；

4.4测定仪器的精密度及线性是否达到仪器性能要求。

4.5校准方法：

必须购买合格的试剂，并用其校准的说明书设置参数，用校准血清进行校准，即可获得各项目的校准K值，同时观察一下各项目测定时反应进程图，检查各项目参数设置是否在最佳位置，如不在最佳位置应予以重新设置并测定。

此时得到的K值即为准确的校准K值，然后测定待测的10至20份新鲜血清三次取其平均值，此结果是用生化分析仪1检测系统所获的测定值，然后用此血清值校准其它测定系统。

5酶活性测定校准：

酶活力计算公式如下：

酶活力（ L）=△A／min × V × 106／（ × v × 1）

令 k = V ×106／（ ×V）

则酶活力（ L）=△A／min × k

常用K值有以下几种：

a）理论K值：

根据理论摩尔消光系数（ ）来计算，如NADH为6.22 × 103

b）实测K值：

由于仪器波长的精密及半宽度不同，而应根据实测 值来设定K值

c）厂家给的K值：

厂家生产试剂盒说明书上提供的K值（如6.3 × 103）

d）校准K值：

通过校准物直接校准得到的K值

* 实测K值大于理论K值，说明生化分析仪的测光系统还存在着一定误差，如波长、半宽度及光径等偏差，使仪器达不到理论上的最佳状态；

* 校准K值与实测K值之间也存在一定的差距，即使指示物和仪器相同，其差异可能由试剂及校准品造成的；

最好使用校准K值，但必须由两个先决条件：

1 必须使用配套的试剂；2 必须使用配套的高质量的校准品，校准K值应有其溯源性。

关于酶活性标准品，欧洲标准局（BCR）和美国国家标准技术研究院（NIST）均发表了人血清基质的酶活性标准物，相信不久将会有公认的标准（校准）品问世。

关于生化分析仪上NADH摩尔消光系数的校正。

NADH的摩尔消光系数一般均选用6.22×103来计算，但由于生化分析上波长半宽度及比色杯的光径要求，是否达到标准摩尔消光系数的要求很成问题，因此必须重新测定NADH在该生化分析仪上NADH摩尔消光系数。

据文献介绍可利用测定葡萄糖（HK法）试剂盒，间接地测定NADH摩尔消光系数。

6 校准计划：

校准工作不是仅进行一次就可万事无忧，一劳永逸，而必须经常化。

按照“临床实验室质量控制（Q

（2）的要求（草案）”必须要求拟定校准计划，其内容包括：

① 建立校准方法：

（1）选择合适（配套）的校准品，包括校准品数目、类型和浓度；

（2）校准品应溯源到参考方法或参考物质；

（3）确定校准的频度。

每六个月进行一次校准；

（4）如有下列情况发生时，必须进行校准：

* 改变试剂的种类，或者批号更换了。

如果能说明改变试剂批号并不影响结果的范围，则可以不进行校准；

* 仪器或者检验系统进行一次大的预防性维护或者更换了重要部件，都有可能影响检验性能；

* 质控反映出异常的趋势或偏移，或者超出了实验室规定的接受限，采取一般性纠正措施后，不能识别和纠正问题时；

②每次校准必须有详情的记录和分析。

每次校准记录必须保存备查。

参考资料：

1 王毓三主编．医院检验科建设管理规范［Ｍ］．南京.东南大学出版社，2003：

1~168

2 卫生部临床检验中心．临床实验室质量管理［Ｍ］．北京：

2000：

1~231

SOP_03-4 酶标分析仪校准的标准操作程