百合4.docx
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百合4
江西农业工程职业学院
毕业论文（设计）
百合鳞片的诱导培养技术
学生:
钟波
指导老师：
梁小敏（副教授）
专业：
中草药栽培技术
层次：
大学专科
班级：
2008届中草药班
学号：
A0813119
日期：
2011年4月
江西农业工程职业学院科研处制
原创性声明
本人声明所呈交的毕业论文（设计）是我个人进行的研究工作及取得的研究成果。
尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文（设计）中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。
对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，已在毕业论文（设计）中作了明确的说明并表示了谢意。
学生签名：
时间：
年月日
关于论文（设计）使用授权的说明
本人完全了解《江西农业工程职业学院本、专科毕业论文（设计）工作条例（暂行规定）》对：
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【保密的毕业论文（设计）在解密后遵守此协议】
学生签名：
时间：
年月日
密级：
摘要
本文以百合鳞片作外植体为例，讲述了使用植物组织培养的技术进行植株快繁的全过程，一是为了体现组培的技术特点及优越性；二是具体的介绍了从百合鳞片的诱导到幼苗移栽的技术过程；三是讲述了百合鳞片的诱导培养过程中出现的常见问题、解决方法及注意事项。
全文采用器官培养中的鳞茎培养方法对百合鳞片进行诱导快繁，从启动培养、增殖培养、生根培养及驯化移栽等方面具体讲述了其操作方法。
植物组织培养技术具有其优越性也有制约其发展的瓶颈：
一是污染问题，至今对污染问题都没有突破性的进展；二是驯化移栽阶段，移栽管理是整个培养过程成功的关键阶段所以技术要求含量高。
组培虽然在发展中有几大难题但植物组织培养正逐渐成为农业领域中种苗繁殖的重要方法之一，并得到了迅速的发展而且渗透到生物学科的各个领域，成为生物工程技术的一个重要组成部分和研究手段之一，为快速繁育优良种苗、培育无毒苗木、进行突变筛选培育等方面开辟了新途径。
并广泛应用于农业、林业等生产当中产生了巨大的经济效益和社会效益，尤其是快繁技术和无毒苗培养技术，在农业生产中有很大的实践意义。
由此可见植物组织培养无论在生产应用上还是理论研究上都是十分重要的。
【关键字】：
百合鳞片组织培养诱导技术
目录
1材料与方法…………………………………………………………………………5
1.1材料……………………………………………………………………………5
1.2方法……………………………………………………………………………5
2结果与分析…………………………………………………………………………5
2.1启动培养结果和分析…………………………………………………………5
2.2增殖培养结果和分析…………………………………………………………6
2.3生根培养结果和分析…………………………………………………………6
2.4驯化移栽结果和分析…………………………………………………………7
3结论与讨论…………………………………………………………………………9
3.1结论……………………………………………………………………………9
3.2讨论……………………………………………………………………………9
4参考文献…………………………………………………………………………10
5后记………………………………………………………………………………11
6毕业论文（设计）评定成绩表…………………………………………………12
百合为百合科百合属（LiliumbrownieF.E.Brownvar.viridulumBaker）为多年生草本植物，地下部分具扁球形工阔卵状球形的鳞茎，外无皮膜，由多数肥厚肉质鳞片重叠抱合而成；地上茎直立，圆柱形，不分枝或少数种类有分枝。
叶螺旋状散生，少有轮生，叶线形、披针形至椭圆形。
花单生、簇生或成总状花序工排成伞房状；花朵大形，直立可平伸或下垂；花被片6枚，基部具蜜腺，离生，排成2轮，常组合成漏斗形、喇叭形、钟形、碗形和杯形等各种花型。
有些种类的花被片向外反卷，有的在花被片中下部散生紫红色斑点。
花有白、黄、粉、紫、洋红、桔红、淡绿等色，常具芳香。
花期从春至秋，而以夏季最盛【1】，其主要应用价值在于观赏也有药用价值，百合味甘、微苦、性平、具有补益心肺、清润脾胃、养阴止血等功效。
主产于湖南、四川、江苏、等地，全国各地均有种植【2】。
本文主要介绍百合鳞片的诱导技术以及在启动培养的过程中所出现的问题和注意事项等，百合的诱导快繁技术与传统的种子繁殖、分株繁殖相比具有繁殖率高、抗病性强、不受环境限制等优点。
1材料与方法：
1.1材料：
以百合的鳞片作为诱导材料的外植体。
1.2方法:
于3月23日天晴的上午9—10时在园林基地傍边的百合种植区挖取其下鳞茎作为培养材料，取回材料后先用软毛刷刷去灰尘、杂质。
然后用洗衣粉浸泡1分钟最后用流水冲洗3—4小时。
接下来把冲洗好的材料放在培养皿中沥干水分，然后用75%酒精浸泡30秒，再用0.1%升汞溶液加2滴吐温80浸泡8分钟再用无菌水漂洗5—6次每次1—2分钟，至无泡沫为止。
最后进行外植体的切割，把材料切割成正方形块状，伤口越多则愈伤组织越容易形成【3】。
接下来，把切好的材料接种到装有培养基的试管中，然后把试管捆绑好放入培养箱中进行培养观察。
2．结果与分析
2.1启动培养结果与分析
启动培养基是：
MS+BA1.0+NAA0.1+糖30g|L+琼脂6g/L【4】。
经过一周的培养箱培养后我们于3月30日进行了第一次观察发现45支试管中的2支试管内的材料出现了污染，不规则的菌落呈现出绿、白色相间的绒毛状物体与培养基和培养物的界限分明，经过我们的判断及老师的鉴定后认定是真菌性污染。
次日我们进行了第二次的观察又发现1支试管内的材料被污染其症状与前两支一样均为真菌性污染，两周后我们于4月12日进行第三次观察发现有18支试管内的材料严重污染，其中有11支污染症状与前三支一样均为真菌性污染，有5支试管内的材料菌落呈现出白色粘液状且与培养基界限明显，通过参照资料和老师鉴定后我们确定为细菌性污染，还有2个材料呈现棕褐色、无光泽现象，我们确定为材料已死亡。
通过第一阶段的培养后我们得出真菌性污染率为31%、细菌性污染率为11%、死亡率为4%。
鉴于污染率高的情况下我们把材料从培养箱中移放到光照强度为2000lx、温度为25℃的培养室内进行培养。
通过以上结果观察我们从中可以看出在整个启动培养过程中污染是组培的一大难题，而且如此之高，我认为主要有以下几个原因：
对材料外植体的灭菌不彻底以致外植体带菌培养；操作人员技术不熟练导致在材料切割、接种时人为地把菌带入；培养基及接种工具灭菌不彻底。
针对以上几个原因的出现我们提出了以下几个防治措施用以参考：
首先做好外植体的室外采集工作最好是晴天上午采集；其次是对外植体进行严格的灭菌必要时进行灭菌效果试验摸索出最佳灭菌方法以达到最好的灭菌效果【5】；再次是接种人员必须严守无菌操作规程戴好口罩洗手后进入接种室；最后是对培养基及接种工具进行严格的灭菌操作。
培养中出现死亡的现象，我们根据褐化的定义并没有发现培养基变褐现象，所以我们认定为灭菌时间过长而导致了材料的死亡。
2.2增殖培养结果与分析
增殖培养基是：
MS+BA0.5+NAA0.5+糖30g|L+琼脂6g|L。
转入增殖培养阶段后我们把剩下的24支试管内的材料于4月14日进行了转接，把材料转接到培养瓶中并放到培养架上进行增殖培养。
在转接时发现了1支试管内的材料出现了真菌性污染。
4月21日有发现一瓶材料为真菌性污染，有10瓶材料开始出现了芽并进行了第一次的继代增殖，其余未发芽的材料继续培养。
5月5日发现其余的9瓶材料萌发了芽，并进行了继代增殖但在操作时有2个材料被浪费，经过一个月的增殖培养到6月7日时有17瓶的材料已长至3—4cm高植株粗壮、新芽丛生时我们进行了第二次的增殖，其增殖倍数为4。
我们将其余4瓶无反应且无任何污染迹象的材料确认为材料已死亡。
通过第二阶段的培养我们得出其污染率为8%、损伤率为8%、死亡率为16%。
在第二阶段的培养中我们知道污染仍然存在，但是其污染率并不高，我认为这只是在操作过程中的正常损耗是实际生产过程中所出现的正常现象。
至于出现死亡率高的情况主要是由于外植体灭菌时间过长所导致的，其在培养前期表现不明显到后期就明显的表现出死亡的现象。
此外光照强度、光照时间和温度等环境条件也会对材料的增殖生长情况造成很大的影响，所以在继代培养过程中其光照强度应控制在2000—3000lx之间、光照时间应保证14—16h|d、温度应控制在20—25℃之间以满足材料的正常生长【6】。
2.3生根培养结果与分析
培养基为：
1|2MS+IBA0.5mg|L+NAA0.5mg|L+琼脂30g|L+糖6g|L.为了达到合理分流与形成完整植株的最后阶段的目的，我们进行了第三阶段的生根培养，将生长健壮的幼苗按4倍的增殖系数将植株切割接种到生根培养基中，然后放到培养室内进行培养。
其光照强度为2000—3000LX、光照时间一直保持在14—16h|d、温度25℃左右、湿度控制在70%—80%之间。
经过30天的生根培养后我们发现污染的情况已明显减少，只有两瓶出现污染的现象，经过鉴定我们确定为真菌性污染，其症状与前两次的真菌性污染症状一样，除此之外我们还发现了有一瓶里的植株出现绿苗普遍变黄首先出现在基部叶片且生根少的现象。
通过这阶段的培养之后植株都长出了根，接下来我们选取了生长良好、植株粗壮、叶大深厚且根多的植株进行了驯化。
这阶段的污染率为5%、损伤率为3.5%、死亡率为4%，除去上述损耗最后得到320株苗成活并生根且每株苗用一个培养瓶生根。
在生根培养阶段中我们采用的生根方法是：
把植株进行切割后接种到生根培养基中培养30天直至生根。
此外我们还预留了一部分的植株继续增殖培养以备生产或实验需要。
通过对生根培养阶段的观察分析得出污染还是存在的，我认为应该把一定的污染率列为正常的损耗当中，因为污染是不可避免的。
至于植株叶片出现黄化现象，经过鉴定我们认定是由于培养室温度过高所致。
之所以出现温度过高是因为当时正值夏季室内升温快，没来得及通风散热降温导致植株黄化【7】。
之后我们及时调整了室内温度，降低了培养瓶的放置密度使其能够更好的通风散热，给植株创造适宜的环境，保证其生根正常。
2.4驯化移栽结果与分析
其目的是人为创造一种由试管苗生境逐渐向自然环境过渡的条件提高试管苗对外界的适应能力，促使试管苗在形态、结构、生理方面向正常苗转化，促其健壮生长更能适应外界环境，从而提高试管苗移栽的成活率【8】。
在生根培养中我们是按4倍的增殖系数接种生根，除去被污染和损耗的植株，我们得出在驯化这一阶段共有320株苗进行驯化。
在驯化过程中的第二步松开瓶盖与外界接触时有15株苗被外界杂菌污染，其症状是培养基表面长满绿白色相间的菌丝体呈绒毛状、植株基部呈黑色。
发现污染后我们及时清楚了被污染的植株以免其它植株被污染，引起污染的原因我们认为有以下两点：
一是注水后瓶盖没盖好或打开时间过长导致外界气流大量涌入瓶内引发污染；二是向瓶内注入了带有大量杂菌的水接触污染【9】。
经过总结得出这一阶段的污染率为5%，接下来我们将305株苗进行了移栽。
为了保证植株的成活率理论上应选择在百合的自然出苗季节进行移栽，但在实际中往往应根据市场与实验需要来进行生产，所以我们选择在大棚进行了反季节的移栽，通过调节温度、湿度来营造植株生长环境。
将培养瓶中的试管苗取出并洗净基部以下培养基。
接下来对洗干净的植株进行了修剪，剪除了基部老叶、黄化的叶片，每株的根只留下了3—4cm长，然后把修剪好的植株放入500-800倍液的多菌灵溶液中浸泡15min杀菌【10】。
最后一步进行移栽，把植株从多菌灵溶液中取出栽入育苗床中，栽好后喷水保湿，然后盖上拱膜保温并适当遮阴。
经过上述步骤后百合鳞片的诱导工作已到了最后的管理阶段，为了确保其较高的成活率，我们每天对其进行观察并记录生长情况，温度控制在20—30℃之间，湿度是前期一周营造密闭高湿条件保证成活，后期每周逐步降湿并且减少遮阴频率，增加光照时间促进生长。
苗床管理做到了保水保肥、及时清除杂草防止病虫害发生。
在这个过程中人工接触植株的时间长且又需要修剪所以植株也有一定的损伤，通过计算有30株苗是人工损伤其损伤率是10%是驯化污染率的两倍，我想这是由于人员操作不熟练所致，在以后的实际生产中应尽力减少这种非污染死亡现象。
在栽后管理阶段的前期有50株苗没有成活其死亡率为18%，后期有植株陆续死亡到最后统计时共死亡的有85株其死亡率为31%。
经计算得出总死亡率为44%，还有190株苗成活。
之所以出现如此高的死亡率我们认为有以下因素的影响：
一是季节因素，我们进行的是反季节移栽对植株生理生长有一定制约【11】；二是人为因素，由于是第一次进行移栽各方面的经验不足前期的高温高湿条件没有很好的控制引起烂苗和烂根，后期温度过低造成生长缓慢形成僵化苗。
在后期我们注意了温度、气候因素在苗床上增加了朔料拱棚提高了温度，保证了成活率。
3.结论与讨论：
3.1结论：
纵观百合鳞片诱导、增殖培养的整个过程可以发现污染这个难题始终困扰着整个培养过程，污染已成为制约组培技术发展的一个瓶颈，在百合鳞片诱导这个实验中其总污染率为46%、总死亡率为13%、损耗率为16%。
有以上数据我们可得出污染问题是组培亟待解决的问题如果能克服或有效的降低污染的话，组织培养技术将在农业领域中获得广泛的发展；从死亡率上看其主要的解决方法就是要把握好灭菌时间和灭菌剂的选择探索出一套高效的灭菌流程；至于损耗率我认为只要控制在30%以下那么对生产就不会造成很大的影响，其解决的方法就是加强操作人员的培训使其能熟练操作；驯化移栽阶段是确保植株成活的关键阶段，在这时期温度、气候及光照是其主要的影响因素，我们应把这几种因素综合考虑增加栽培措施确保成活率。
通过这个实验介绍了百合鳞片诱导技术的整个环节充分展示了植物组织培养这门课程的科技性与实用性等特点。
3.2讨论：
针对污染这一大难题，我认为可以因地制宜地做若干组对照实验改变以往的培养模式，从外植体的选取、灭菌时间、灭菌剂浓度、灭菌剂的选择、培养基的含量以及培养条件等方面进行诱导培养效果对照实验摸索出最适合本植物、本外植体，本地环境条件的诱导培养方法。
为了提高培养苗的成活率我认为可以在培养基中进行深入的研究，优化各种营养元素使其合理搭配，配制出适合本植物、本季节、本外植体的培养基质。
另外我认为移栽是整个培养过程中最重要的一环，为了确保其成活率我认为可以在移栽时期做移栽效果对照试验，在移栽基质、移栽设施等方面进行对比栽培（如在温室进行无土移栽等）；对基质进行多种搭配混合能否配制出最适宜植株生长的基质。
植物组织培养技术虽然发展迅速但其在农业领域中普及范围小，应用不广泛，我个人认为其原因是技术含量要求高、基础设施昂贵，最主要的是缺乏技术人才和经营管理不善，目前急需培养这方面的高级技术应用人才和管理人才，这对组培这门学科在农业生产上的广泛普及具有重大意义。
参考文献要标注页码
「1」章承林胡孔峰.药用植物栽培技术.「M」.北京：
中国农业大学出版社，2009.8
「2」雷载权陈松育.中药学.「M」.上海:
上海科学技术出版社，2009.2
「3」谭文澄，戴策刚.观赏植物组织培养技术.「M」.北京:
中国林业出版社,2000.
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化学工业出版社，2006.
「5」王振龙石文山.植物组织培养.「M」.北京：
中国农业大学出版社，2007.6
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中国农业出版社,1995.
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上海科学技术出版社,1998.
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中国农业科学技术出版社,2003.
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「10」崔德才，徐培文.植物组织培养与工厂化育苗.「M」.北京：
北京化学工业出版
社,2003.
「11」韦三立.花卉组织培养.「M」.北京:
中国林业出版社,2001.
后记
到了写论文的时候，才发现大学三年悄然过去了。
三年来老师和亲人给了我太多帮助和鼓励，在此我要真诚感谢那些曾经给我鼓励和帮助的人！
首先要感谢我的指导老师梁小敏女士，本篇论文得到了梁老师的全力支持和精心指点。
谢谢梁老师从百忙之中给我修改论文并提出宝贵的意见。
三年来，梁老师的教育风格，为人，为学让我受益匪浅！
同时还要感谢三年来付出辛劳栽培我的所有老师，你们的教导对我的学习、论文写作给予了很大帮助，在此致上我最真诚的谢意！
祝您们身体健康，工作顺利，合家幸福！
毕业论文（设计）成绩评定表
学生姓名
钟波
专业
中草药栽培
班级
08中草药班
学号
A0813119
指导教师
梁小敏
毕业论文（设计）题目
百合鳞片的诱导培养技术
评价项目
评价指标
满
分
得分
1、选题质量
选题符合专业方向和培养目标，题目难易程度。
题目工作量（包括文献阅读的广泛性）大小
15
2、方案方法
研究方案、设计合理、具有可操作性；数据充分，结论合理
30
3、写作水平
结构严谨，层次清楚，论点明确，论据充分，结论合理
30
4、写作规范
书写格式规范，用语符合技术规范，图表清楚规范
20
5、成果价值
对前人工作有改进、突破，或有独特见解，或有理论意义、实际应用价值
5
评定
等级
□优秀□良好□中等□及格□不及格
良好
评
定
成
绩
评
定
组
评
定
意
见
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