外周血中PBMC分离.docx
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外周血中PBMC分离
原理
外周血各种血细胞的密度不尽相同,利用淋巴细胞分层液(Ficoll)作密度梯度离心,使一定比重的细胞群按相应密度梯度分布,从而将各种血细胞加以分离。
实验步骤:
1.采血,稀释(外周血:
稀释液=1:
2)
2.在离心管中加入Ficoll,沿倾斜的管壁缓缓加入稀释的外周血(Ficoll:
稀释血=1:
2)
3.18℃,1500r/min,离心30min
4.轻轻吸取PBMC层移入另一试管中
5.加足量稀释液充分洗涤,1800r/min离心5min,弃上清。
分离全血中的PBMC注意事项:
1每毫升外周血液大约可获1×106单个核细胞
2Ficoll应适量,外周血应充分稀释,温度直接影响到Ficoll的比重和分离效果
3在Ficoll上加入稀释外周血时,应缓慢加,以免冲散界面
4吸取单个核细胞层时,应避免吸出过多的上清液或分层液而导致血小板污染