外周血中PBMC分离.docx

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外周血中PBMC分离

原理

  外周血各种血细胞的密度不尽相同，利用淋巴细胞分层液（Ficoll）作密度梯度离心，使一定比重的细胞群按相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。

实验步骤：

1.采血，稀释（外周血：

稀释液=1：

2）

2.在离心管中加入Ficoll，沿倾斜的管壁缓缓加入稀释的外周血（Ficoll：

稀释血=1：

2）

3.18℃，1500r/min，离心30min

4.轻轻吸取PBMC层移入另一试管中

5.加足量稀释液充分洗涤，1800r/min离心5min，弃上清。

分离全血中的PBMC注意事项：

1每毫升外周血液大约可获1×106单个核细胞

2Ficoll应适量，外周血应充分稀释，温度直接影响到Ficoll的比重和分离效果

3在Ficoll上加入稀释外周血时，应缓慢加，以免冲散界面

4吸取单个核细胞层时，应避免吸出过多的上清液或分层液而导致血小板污染