天津开发区职业技术学院.docx

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天津开发区职业技术学院

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2007——2008学年度第一学期

教案

（实践课）

工学院生物技术系（部）生物专业06年级

课程生物化学实验

班级生物061~2

姓名张冲

实践课教案首页

课题名称

生物化学实验

课程类型

实验课

课时（或单元）

4课时

实验课类型

生物化学

实践教材（名称、作者、出版社）

生物化学实验讲义（自编）

教学场所

生物实验室

接受实践教学单位性质与特色

教学目的

学习柱色谱的原理和操作方法

重点、难点分析

实验原理与操作技法

实践分组要求

3~4人一组，以个人为单位撰写实验报告

组长条件与职责

管理本组的实验器材和设备，组织组员进行实验

实践课所需仪器设备与条件

色谱柱（25毫升滴定管），分液漏斗（250毫升），烧杯，

滴管，中性氧化铝和碱性氧化铝（100—200目，干燥失重不大于1%）每组各15克，洗脱剂：

95%乙醇和蒸馏水，样品：

亚甲基蓝，荧光黄，1毫升每组，滤纸，玻璃棉或脱脂棉

实践报告（总结）要求

✓实验题目

✓日期

✓实验目的

✓基本原理

✓实验步骤

✓实验结果与分析

✓思考题

小结

学生对基本理论的理解一般，操作能力有待进一步提高。

说明：

由于该教案涵盖较广，因此不是各栏必须填写

教案纸

实验一柱色谱法分离物质原理

一、目的要求

学习柱色谱的原理和操作方法

二、基本原理

柱色谱法可看作是一种面—液色普法，它是通过色谱柱进行分离的。

色谱柱是一根长约20厘米，内径为2厘米，下端具有一个活塞或具有一橡皮管带有弹簧夹的玻璃管，管内装填活化的固体吸附剂（固定相）如氧化铝、硅胶等。

在柱子顶部装一分液漏斗，液体样品从柱顶加入，被吸附在柱的上端，然后从分液漏斗加入洗脱溶剂（流动相）如丙酮、石油醚等，由于吸附剂对各组分的吸附能力不同，被吸附较弱的组分随溶剂以较快的速率向下移动，各组分随溶剂以不同的时间从色谱柱下端流出，用容器收集。

如各组分为不同颜色的物质，则可以观察到谱带。

如为无色物质，则不可直接观察到谱带，有时有的物质在紫外光照射下发出荧光，有时也可以分段收集一定体积的流出液，再用薄层色谱或其他方法检定。

三、实验内容

柱色谱分离有色物质

四、仪器和试剂

色谱柱（25毫升滴定管），

分液漏斗（250毫升），

烧杯，

滴管，

中性氧化铝和碱性氧化铝（100—200目，干燥失重不大于1%）每组各15克，洗脱剂：

95%乙醇和蒸馏水，

样品：

亚甲基蓝，荧光黄，1毫升每组，

滤纸，玻璃棉或脱脂棉

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教案纸

五、实验步骤

1、装柱

将已经洗干净并烘干的色谱柱固定在铁架台上，在柱子的底部铺放一点玻璃棉或脱脂棉（不要赛得太紧），然后在柱中装溶剂至一半高，打开柱子下端的活塞，让液体向下流（控制流速每分钟两毫升），将氧化铝分次加入，直到固体离柱的顶部约3—4厘米即可。

然后在柱顶加入柱径大小的滤纸或加入5毫升的砂层。

不允许柱子的顶部变干（在柱顶必须要保留0.5—1.0厘米高的溶剂以免柱子干裂）。

如果不立即使用这个色谱柱，就关好下端的活塞或橡皮弹簧夹。

在本实验中在层析柱底端放一点棉花，加入0.5厘米的石英砂，关闭阀门加入10毫升95%乙醇，加入5克氧化铝，开塞保持流速为每秒一滴，使氧化铝均匀下沉（避免出现气泡和裂缝），待氧化铝沉积完成后，再加入1厘米石英砂。

2、上样

将色谱柱中的溶剂从下端放出，直到液面与石英砂表面一致时，停止放出。

用滴管或玻璃棒引流将样品缓慢的注入柱中。

注意不要把氧化铝冲浮起来。

待样品加完后，放开柱子的活塞使液体流出，直到液面与石英砂表面一致时，停止放出，用0.5毫升乙醇清洗壁上余样；放开柱子的活塞使液体流出，直到液面与石英砂表面一致时，停止放出，再用0.5毫升乙醇清洗壁上余样；放开柱子的活塞使液体流出，直到液面与石英砂表面一致时，停止放出。

3、洗脱分离

先用95%的乙醇进行洗脱，流速控制在每秒一滴，待接收亚甲基蓝后，将乙醇界面放至石英砂表面，关闭活塞。

在用蒸馏水进行洗脱，流速控制在每秒一滴，待接收荧光黄（注意：

在更换洗脱液的过程中柱面不能干。

）

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教案纸

六、实验结果

测量回收组分的体积，并计算组分的稀释倍数

七、思考题

1、洗脱液的流速过快或太慢时，对分离效果有什么影响？

2、为什么极性大的组分要用极性大的洗脱剂来洗脱？

板书设计：

生物化学实验

一、实验室规则

二、试验报告要求

三、考核办法

四、考勤办法

实验一柱色谱法分离物质原理

一、目的要求

二、基本原理

三、实验内容

四、仪器和试剂

五、实验步骤

1、装柱

2、上样

3、洗脱分离

六、实验结果

七、思考题

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实践课教案首页

课题名称

氨基酸的纸层析

课程类型

实验课

课时（或单元）

4课时

实验课类型

生物化学

实践教材（名称、作者、出版社）

生物化学实验讲义（自编）

教学场所

生物实验室

接受实践教学单位性质与特色

教学目的

学习氨基酸的提取和分离方法

重点、难点分析

实验原理与操作技法

实践分组要求

3~4人一组，以个人为单位撰写实验报告

组长条件与职责

管理本组的实验器材和设备，组织组员进行实验

实践课所需仪器设备与条件

层析用滤纸——国产新华1号中速滤纸，层析器，毛细管，剪刀，研钵，漏斗，漏斗架，小烧杯，移液管，喷雾器。

80%乙醇；氨基酸显色剂（0.1%茚三酮—丙酮溶液）；标准氨基酸混合液（分别将甘氨酸、丝氨酸、亮氨酸各1毫克溶于5毫升80%乙醇中）；氨基酸纸层析溶剂（正丁醇：

乙醇：

水=4：

1：

5）

实践报告（总结）要求

✓实验题目

✓日期

✓实验目的

✓基本原理

✓实验步骤

✓实验结果与分析

✓思考题

小结

学生操作的规范性有待提高

说明：

由于该教案涵盖较广，因此不是各栏必须填写

教案纸

实验二氨基酸的纸层析

一、目的要求

色谱法是现代一种新的分析分离技术，除纸色谱法外，还发展有气相色谱法，液相色谱法，离子交换色谱法，以及薄层色谱法等，已成为现代生物化学研究中的重要工具。

纸色谱法具有操作简便，分离效率高，不需要复杂设备的特点，能对氨基酸、肽、糖类、脂肪酸、维生素等多种物质进行分离鉴定，是生化研究中的重要手段之一。

二、基本原理

纸色谱法是以滤纸为支持剂的一种层析方法。

是根据各种溶质在两种不相混溶的溶剂中的分配系数不同而将不同物质分离开来，它属于分配色谱分离的范畴。

由于滤纸是由纤维素组成的，具有亲水性，能吸附一层水膜，这层固定在滤纸上的水膜称为固定相，用做推动（或冲洗）样品的试剂称为流动相。

将待分离的样品溶于适当的溶剂，点样于滤纸的一端，在层析时借毛细作用使作为流动相的溶剂，从滤纸一端推向另一端，样品中的各个组分由于分配系数不同，而表现在溶剂中的移动速度（Rf值）不同，从而在滤纸上集中在不同的部位，用测量Rf值的显色定性，洗脱定量，达到分离的目的。

Rf值=某物质移动的距离/溶剂移动的距离

物质结构，溶剂的酸碱性，滤纸质量，层析温度等均能对Rf值产生影响。

本实验进行的是上行纸层析法，除此之外，还有下行纸层析法，双向纸层析法，连续纸层析法等，可参阅有关资料介绍。

三、材料与设备

层析用滤纸——国产新华1号中速滤纸，层析器，毛细管，剪刀，研钵，漏斗，漏斗架，小烧杯，移液管，喷雾器。

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教案纸

80%乙醇；氨基酸显色剂（0.1%茚三酮—丙酮溶液）；标准氨基酸混合液（分别将甘氨酸、丝氨酸、亮氨酸各1毫克溶于5毫升80%乙醇中）；氨基酸纸层析溶剂（正丁醇：

乙醇：

水=4：

1：

5）

四、实验步骤

1、取材

称取不同的萌发时间的种子（或其他植物材料）2—4克，每组作一种材料，研碎，加入10毫升80%乙醇，在沸水浴中提取5分钟，冷却过滤，收集滤液（可反复过滤三次，收集滤液），将滤液在80℃水浴上浓缩至约为2毫升左右，放入冰箱中备用。

2、滤纸准备

将层析用滤纸裁成5×15平方厘米的长条（注意：

保持滤纸洁净，汗手、唾沫切勿沾上），在距滤纸边2厘米处用铅笔轻划一条线，线上距左右侧1厘米处各点一点，为点样处。

3、点样

将层析用滤纸用干净纸夹于其中（露出点样处），分别用毛细管吸取提取液和标准氨基酸溶液，分别点样于点样处，注意使毛细管口与滤纸垂直，轻轻碰触点中心，此时，样品就能自动流出，控制样品滴直径在0.5厘米以内（点样量以各种氨基酸含5—20微克为宜）。

点样过程中必须在第一滴样品干后再点第二次。

本实验中提取液点样5—10次。

标准氨基酸点样2次。

4、展层

准备洁净、干燥的标本筒（或大口瓶等），将氨基酸层析溶剂15毫升注入底部，盖盖备用。

将已点样的滤纸靠近上沿1厘米处打眼穿线后，将此滤纸条悬挂于已准备好的层析器中，饱和一小时后，迅速将层析纸垂直浸入溶剂中，盖紧盖子，放于恒温处进行层析，待流动相的溶剂已达到滤纸上沿1.5厘米处，开盖，小心取出滤纸，用铅笔在溶剂前沿轻划一线，后悬挂于凉处，使溶剂挥发，滤纸干燥，准备显色。

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教案纸

5、显色

将0.1%茚三酮—丙酮溶液装在喷雾器中，将滤纸条喷湿后，静置挥发丙酮，待丙酮挥发后放在65℃烘箱（或使用吹风机的暖风）内保温显色，滤纸上有氨基酸的地方显现紫红色。

五、实验结果

根据显色情况计算Rf值，判断提取液中氨基酸数量，并与标准氨基酸比较。

六、思考题

试比较不同萌发时期种子氨基酸有何不同？

板书设计：

实验二氨基酸的纸层析

一、目的要求

二、基本原理：

分配色谱

三、材料与设备

四、实验步骤

1、取材

2、滤纸准备

3、点样

4、展层

5、显色

五、实验结果

六、思考题

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实践课教案首页

课题名称

斐林试剂比色法测定还原糖

课程类型

实验课

课时（或单元）

4课时

实验课类型

生物化学

实践教材（名称、作者、出版社）

生物化学实验讲义（自编）

教学场所

生物实验室

接受实践教学单位性质与特色

教学目的

Ø学习721型分光光度计的使用方法

Ø学习低速离心机的使用方法

Ø掌握实验原理和方法

重点、难点分析

721型分光光度计的使用方法

实践分组要求

3~4人一组，以个人为单位撰写实验报告

组长条件与职责

管理本组的实验器材和设备，组织组员进行实验

实践课所需仪器设备与条件

1.斐林试剂A液：

40gCuSO4.5H2O溶解于蒸馏水定容至1L。

    2.斐林试剂B液：

200g酒石酸钾钠（KNaC4H4O6.5H2O）与150gNaOH溶于蒸馏水中，并定容至1升。

A、B两液分别贮存，使用前等体积混合。

    3.0.1％葡萄糖标准液：

取80℃下烘至恒重的葡萄糖0.1000g，加蒸馏水溶解，定容至100ml。

实践报告（总结）要求

✓实验题目

✓日期

✓实验目的

✓基本原理

✓实验步骤

✓实验结果与分析

✓思考题

小结

实验结果的准确度不够

说明：

由于该教案涵盖较广，因此不是各栏必须填写

教案纸

实验三斐林试剂比色法测定还原糖

一、实验原理

    植物组织中的可溶性糖可分为还原糖（主要是葡萄糖和果糖）和非还原糖（主要是蔗糖）两类。

还原糖具有醛基和酮基，在碱性溶液中煮沸，能把斐林试剂中的Cu2+还原成Cu+，使蓝色的斐林试剂脱色，脱色的程度与溶液中含糖量成正比。

 二、材料、仪器设备及试剂

（一）材料：

新鲜植物样品或烘干粉碎过的植物样品。

（二）仪器设备：

1.分光光度计；2.分析天平（感量1／10000）；3.水浴锅；4.具塞刻度试管；5.刻度吸管；6.容量瓶；7.研钵；8.离心机。

（三）试剂：

1.斐林试剂A液：

40gCuSO4.5H2O溶解于蒸馏水定容至1L。

    2.斐林试剂B液：

200g酒石酸钾钠（KNaC4H4O6.5H2O）与150gNaOH溶于蒸馏水中，并定容至1升。

A、B两液分别贮存，使用前等体积混合。

    3.0.1％葡萄糖标准液：

取80℃下烘至恒重的葡萄糖0.1000g，加蒸馏水溶解，定容至100ml。

    4.0.1NNaOH。

    5.甲基红指示剂：

0.1g甲基红溶于250ml60％乙醇中。

    6.10％Pb（Ac）2。

    7.饱和Na2SO4。

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教案纸

三、实验步骤

    1.标准曲线的绘制：

各管混合后加塞，于沸水浴中加热15min。

取出后自来水冷却，1500rpm离心15min。

取上清液，用分光光度计在590nm波长下比色，以蒸馏水作对照，读取吸光度用空白管的吸光度与不同浓度糖的各管的吸光度之差为横坐标，对应的糖含量为纵坐标，绘制标准曲线。

  2.样品中还原糖的提取：

取新鲜的植物样品洗净、擦干、剪碎，称取10.00g，放入研钵中研磨至糊状，用水洗入250ml容量瓶中。

当体积近150ml左右时，加2～3滴甲基红指示剂，如呈红色，可用0.1mol/L的NaOH中和至微黄色。

若用风干样品，可称取干粉3.00g，先在烧杯中用少量水湿润，然后用水洗入250ml容量瓶中，如显酸性，可用上法中和。

将容量瓶置于80℃的恒温水浴中保温30min，其间摇动数次，以便将还原糖充分提取出来。

对含蛋白质较多的样品，此间可加10％Pb（Ac）2，除去蛋白质，至不再产生白色絮状沉淀时，加饱和Na2SO4除去多余的铅离子。

30min后取出冷却，定容至刻度，摇匀后过滤待测。

    3.样品测定：

吸取6ml待测液，加4ml斐林试剂，其它操作与标准曲线相同，在590nm波长下读取吸光度。

以不含样品的空白管的吸光度减去样品管的吸光度，在标准曲线上查出糖含量.

四、结果计算

    按下式计算还原糖的百分含量：

    还原糖（％）＝查得的糖毫克数×样品总体积×稀释倍数/（测定时取用体积×样品重×1000）×100

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教案纸

板书设计

实验三斐林试剂比色法测定还原糖

一、实验原理

植物组织中的可溶性糖可分为还原糖（主要是葡萄糖和果糖）和非还原糖（主要是蔗糖）两类。

还原糖具有醛基和酮基，在碱性溶液中煮沸，能把斐林试剂中的Cu2+还原成Cu+，使蓝色的斐林试剂脱色，脱色的程度与溶液中含糖量成正比。

二、材料、仪器设备及试剂

1.分光光度计的工作原理

2.分光光度计的使用方法

3.台式低速离心机的工作原理

4.台式低速离心机的使用方法

三、实验步骤

1.标准曲线的绘制：

2.样品中还原糖的提取：

3.样品测定：

四、结果计算

  按下式计算还原糖的百分含量：

    还原糖（％）＝查得的糖毫克数×样品总体积×稀释倍数/（测定时取用体积×样品重×1000）×100

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实践课教案首页

课题名称

还原糖的测定

（3，5二硝基水杨酸比色法）

课程类型

实验课

课时（或单元）

4课时

实验课类型

生物化学

实践教材（名称、作者、出版社）

生物化学实验讲义（自编）

教学场所

生物实验室

接受实践教学单位性质与特色

教学目的

掌握3，5二硝基水杨酸比色法测定还原糖

重点、难点分析

实验原理与操作技法

实践分组要求

3~4人一组，以个人为单位撰写实验报告

组长条件与职责

管理本组的实验器材和设备，组织组员进行实验

实践课所需仪器设备与条件

仪器：

分光光度计、恒温水浴、沸水浴、分析天平、具塞刻度试管、刻度吸管、容量瓶、烧杯、研钵、漏斗

试剂：

Ø1毫克/毫升葡萄糖标准液

Ø3，5二硝基水杨酸溶液

实践报告（总结）要求

✓实验题目

✓日期

✓实验目的

✓基本原理

✓实验步骤

✓实验结果与分析

✓思考题

小结

对数据的分析能力需要提高

说明：

由于该教案涵盖较广，因此不是各栏必须填写

教案纸

实验四还原糖的测定（3，5二硝基水杨酸比色法）

一、目的要求

掌握还原糖测定方法测定的基本原理，学习比色法的基本操作；熟悉721分光光度计的使用方法。

二、基本原理

在植物体内含有多种还原糖。

利用还原糖的还原性，可用3，5二硝基水杨酸（黄色）来测定还原糖的含量，反应在碱性条件下进行，将还原糖与3，5二硝基水杨酸共热，3，5二硝基水杨酸被还原成3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖被氧化成糖酸及其它产物。

在一定范围内还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅的程度成一定的比例关系，在540nm下测定棕红色的消光值，查对标准曲线，便可求出样品中还原糖的含量。

三、实验内容

3，5二硝基水杨酸比色法测定苹果中的还原糖

四、仪器和试剂

仪器：

分光光度计、恒温水浴、沸水浴、分析天平、具塞刻度试管、刻度吸管、容量瓶、烧杯、研钵、漏斗

试剂：

1）1毫克/毫升葡萄糖标准液，称取在80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100毫克，溶解后定容到100毫升，冰箱中保存待用

2）3，5二硝基水杨酸溶液：

称取1克3，5二硝基水杨酸溶于20毫升1MnaOH溶液中，加入50毫升蒸馏水，再加入30克酒石酸钾钠，带溶解后，用蒸馏水稀释至100毫升，贮存于棕色瓶中密封保存备用，勿使二氧化碳进入。

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教案纸

五、实验步骤

1.标准曲线的制作

取15毫升具塞刻度试管7支，编号，分别加入葡萄糖标准液0，0.1，0.3，0.5，0.7，1.0毫升，然后用刻度吸管向各管加蒸馏水，时最后体积为1.0毫升，摇匀，再加入3，5二硝基水杨酸溶液1毫升，摇匀，在沸水浴中准确加热5分钟，取出冷却，用蒸馏水稀释至8毫升混匀，用分光光度计在540nm下测定消光值。

以消光值为纵坐标，以葡萄糖含量为横坐标，绘制标准曲线。

2.样品中还原糖的提取

将植物样品（苹果）洗净，吸干其表面水分，切碎混匀，称取1克放入研钵中，加少许石英砂，磨成匀浆，转移到100毫升容量瓶中，加水达70~80毫升，摇匀，置于80℃恒温水浴浸提半小时，其间摇动数次，使还原糖浸出。

3.还原糖含量的测定

待上述提取液冷却后，定容到100毫升（如果蛋白质含量过多时，需作沉淀蛋白质处理，方法见附注）。

取5毫升，再定容到100毫升（此步视样品的含糖量而定）过滤，取滤液1毫升放入15毫升具塞试管中，加入1毫升3，5二硝基水杨酸溶液，摇匀后在沸水浴中加热5分钟，取出冷却后稀释至15毫升。

测定OD540（作两个重复取平均值）

六、实验结果

从标准曲线上查出样品的OD540值对应的还原糖量A（毫克/毫升），然后按下式计算样品中还原糖的含量。

还原糖的含量=A*样品稀释总体积（毫升）/样品重*1000

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附注：

沉淀蛋白质的方法

方法一：

在提取液中加入5%硫酸锌5毫升，再慢慢加入0.3N,Ba（OH）2溶液5毫升，振荡后静置，至上层出现清液后再加一滴Ba（OH）2溶液，直至白色沉淀时，向容量瓶加水至刻度。

方法二：

向提取液中滴入10%醋酸铅，至不再产生白色絮状沉淀为止。

过多的铅离子加饱和硫酸铵除去。

七、思考题

A）比色测定法的原理及特点是什么？

B）比色测定法中为什么要设空白？

设空白时要注意什么？

C）试分析一下样品的稀释倍数是如何确定的以及对测定结果的影响？

板书设计

实验四还原糖的测定（3，5二硝基水杨酸比色法）

一、基本原理

二、实验步骤

1.标准曲线的制作

2.样品中还原糖的提取

3.还原糖含量的测定

三、实验结果

还原糖的含量=A*样品稀释总体积（毫升）/样品重*1000

四、思考题

A）比色测定法的原理及特点是什么？

B）比色测定法中为什么要设空白？

设空白时要注意什么？

C）试分析一下样品的稀释倍数是如何确定的以及对测定结果的影响？

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实践课教案首页

课题名称

蛋白质的两性反应和等电点的测定

课程类型

实验课

课时（或单元）

4课时

实验课类型

生物化学

实践教材（名称、作者、出版社）

生物化学实验讲义（自编）

教学场所

生物实验室

接受实践教学单位性质与特色

教学目的

观察蛋白质的两性反应，掌握等电点的测定方法

重点、难点分析

✓蛋白质的结构和两性反应的关系

✓梯度缓冲溶液的配置

✓等电点的测定方法

实践分组要求

3~4人一组，以个人为单位撰写实验报告

组长条件与职责

管理本组的实验器材和设备，组织组员进行实验

实践课所需仪器设备与条件

材料：

酪蛋白

试剂：

0.5%酪蛋白液，0.01%溴甲酚绿指示剂（变色范围是PH3.8~5.4），0.02NHCl溶液，0.02NNaOH溶液，1.00N醋酸溶液

设备：

10毫升试管10支，5毫升移液管4支，2毫升移液管1支。

实践报告（总结）要求

✓实验题目

✓日期

✓实验目的

✓基本原理

✓实验步骤

✓实验结果与分析

✓思考题

小结

需要加深对基本理论的理解

说明：

由于该教案涵盖较广，因此不是各栏必须填写

教案纸

实验五蛋白质的两性反应和等电点的测定

一、目的要求

掌握蛋白质等电点的测定方法

二、基本原理

蛋白质由许多氨基酸组成，虽然绝大多数的氨基与羧基结合成肽键，但是总有一定数量自由的氨基与羧基以及酚基、巯基、胍基、咪唑基等酸碱基团，因此蛋白质和氨基酸一样具有两性电解质的性质。

调节溶液的酸碱度达到一定的离子浓度时，蛋白质分子所带的正电荷和负电荷相等，以兼性离子状态COO-—R—NH3+存在,在电场内该蛋白质分子既不向阴极移动，也不向阳极移动，这时溶液的PH值称为该蛋白质的等点点（PI）。

当溶液的PH值低于蛋白质等电点时，即在H+较多的条件下，蛋白质分子带正电荷成为阳离子，当溶液的PH大于等电点时，即在OH-较多的条件下，蛋白质分子带负电荷成为阴离子。

本实验采用蛋白质在不同PH溶液中的混浊度来确定其等电点，在等电点时蛋白质溶解度最小，最容易沉淀析出。

三、实验内容

蛋白质等电点的测定

四、仪器和试剂

材料：

酪蛋白

试剂：

0.5%酪蛋白液，0.01%溴甲酚绿指示剂（变色范围是PH3.8~5.4），0.02NHCl溶液，0.02NNaOH溶液，1.00N醋酸溶液

设备：

10毫升试管10支，5毫升移液管4支，2毫升移液管1支。

开发区职业技术学院

教案纸

五、实验步骤

一）蛋白质的两性反应

1.取1支试管，加入0.5%酪蛋白20滴和0.01%溴甲酚绿指示剂（变色范围是PH3.8~5.4。

在酸性溶液中为黄色，而在碱性溶液中为蓝色）5~7滴，混匀，观察溶液的颜色。

2.用滴管缓慢加入0.02NHCl溶液，随加随摇，直到有大量沉淀产生。

说明原因，并观察溶液颜色的变化。

3.继续滴入0.02NHCl溶液，观察沉淀和溶液颜色的变化，说明原因。

4.再滴入0.02NNaOH溶液，观察溶液沉淀和颜色的变化过程，说明原因。

二）酪蛋白等电点的测定

1.取9支试管编号后按下表顺序准确加入试剂，加入每种试剂后应混匀。

管号

1

2

3