细胞实验讲义题库文档格式.docx

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8.已干燥的玻片用1:

10Giemsa染液扣染10min，自来水细流冲洗；

9.擦去玻片背面水渍，显微镜观察；

五、实验结果

青蛙染色体染为紫红色，26条，其中10条大染色体，16条小染色体，小染色体只有大染色体的1/2。

六、思考题

1.为什么小鼠的秋水仙素用量比青蛙的低？

2.小鼠的染色体有何特点？

实验二细胞膜的渗透性

2．了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度；

细胞膜是细胞与外界环境进行物质交换的结构。

可选择性地让某些物质进出细胞，各种物质出入细胞的方式是不同的，水是生物界最普遍的溶剂，水分子可以按照物质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗透压高的一侧扩散，以至于在高渗环境中，动物细胞会失水而收缩；

在低渗环境中，动物细胞会吸水膨胀直至破裂。

细胞膜具有对物质选择透过的生理功能。

脂溶性越高通透性越大，水溶性越高通透性越小；

非极性分子比极性容易透过，小分子比大分子容易透过。

水分子可通过由膜脂运动而产生的间隙。

非极性的小分子如O2、CO2、N2可以很快透过脂双层，不带电荷的极性小分子，如尿素、甘油等也可以透过人工脂双层，尽管速度较慢，分子量略大一点的葡萄糖、蔗糖则很难透过，而膜对带电荷的物质如：

H+、Na+、K+、Cl–、HCO3 

–是高度不通透的

本实验将红细胞分别放于各种等渗溶液中，由于红细胞膜对不同溶质的通透性不同，使得不同溶质透入细胞的速度相差很大，有些溶质甚至不能透入细胞。

当溶质分子进入细胞后可引起渗透压升高，水分子随即进入细胞，使细胞膨胀，当膨胀到一定程度时，红细胞膜会发生破裂，血红素溢出，此时，原来不透明的红细胞悬液突然变成红色透明的血红蛋白溶液，这种现象称为红细胞溶血。

由于各种溶质进入细胞的速度不同，所以不同的溶质诱导红细胞溶血的时间不同，相反可通过测量溶血时间来估计细胞膜对各种物质通透性的大小。

1.小鼠，或兔、羊、鸡等动物新鲜血液；

2.0.17mol／L氯化钠，0.17mol／L氯化铵，0.17mol／L醋酸铵，0.17mol／L硝酸钠，0.12mol／L草酸铵，0.12mol／L硫酸钠，0.32mol／L葡萄糖，0.32mol／L甘油，0.32mol／L乙醇，0.32mol／L丙酮，肝素；

3.显微镜，盖玻片，吸管，小烧杯，试管，秒表；

1.观察取一份经肝素抗凝的新鲜动物血液和十份0.17mol／L氯化钠溶液混合均匀即成10%的红细胞悬液，可见该悬液为一种不透明的红色液体；

2.观察溶血现象取一支试管，加入0.5ml红细胞悬液，再加入5ml蒸馏水，混匀后注意观察溶液颜色的变化，可见溶液由不透明的红色变成透明的红色液体。

3.观察红细胞对不同物质的通透性

（1）取一支试管，加入0.5ml兔红细胞悬液和0.17M的Nacl溶液5ml，轻轻摇匀，用上述方法观察是否出现溶血现象，如出现溶血，记下发生溶血所需要的时间（从加入5ml溶液算起）

（2）按上述方法分别加入下列9中溶液是否导致红细胞溶血并记录实验结果。

0.17mol／L氯化钠

0.12mol／L硫酸钠

0.17mol／L氯化铵⑦0.32mol／L葡萄糖

0.17mol／L醋酸铵⑧0.32mol／L甘油

0.17mol／L硝酸钠⑨0.32mol／L乙醇

0.12mol／L草酸铵⑩0.32mol／L丙酮

将实验情况填入下表，对实验结果进行比较分析

试管编号

所加试剂和浓度

是否溶血

时间

结果分析

1

2

3

4

5

6

1.溶液的渗透压主要与哪些因素有关?

对简单盐溶液如何粗略计算出其渗透压？

2.从实验中可以推出细胞膜对物质通透的哪些规律？

实验三细胞通讯连接的观察

1．通过实验观察植物细胞的胞间连丝；

2．理解不同的制片方法对形态的影响；

胞间连丝是植物细胞间的通讯连接，光学显微镜下可见相邻的活细胞细胞壁上有缺口，此即胞间连丝，切片上可见相邻的细胞细胞壁上有丝状结构，这是染料堆积在胞间连丝孔道形成的赝像；

电镜下胞间连丝是贯穿细胞壁的孔道，中间有光面内质网形成的连丝小管。

1.红椒，柿胚乳切片；

2.显微镜，镊子，刀片，载玻片，盖玻片；

1.观察柿胚乳切片，绘图；

2.红椒用刀片切开一个小口，用镊子撕下外表皮，光面向上置于载玻片，滴一滴水小心盖上盖玻片，观察并绘图；

柿胚乳切片可见柿胚乳细胞多为多角形，细胞壁较厚，黄色，细胞壁上有棕黑色胞间连丝；

红椒表皮细胞装片上可见相邻细胞细胞壁上有缺口，上下调节显微镜微调可以判断缺口基本是圆形的；

为什么柿胚乳切片与红椒表皮细胞装片的胞间连丝看起来大不相同？

实验四DNA的Feulgen染色法

2．学习并掌握Feulgen染色法；

稀HCl水解DNA，破坏嘌呤和脱氧核糖间的配糖键，并在脱氧核糖C1端形成游离的醛基，醛基和Schiff试剂结合，形成紫红色的化合物。

因此在有DNA的部位，就会呈现除紫红色阳性反应。

1.洋葱根尖或蚕豆根尖；

2.显微镜，剪刀、载玻片、盖玻片、吸管、甲醇、1mol/L盐酸、Schiff试剂、亚硫酸盐溶液、1%亮绿水溶液；

1.固定的根尖材料蒸馏水过一下；

对照一用5%三氯乙酸90℃处理15min；

2.1mol/L盐酸（室温）1min；

3.预热的1mol/L盐酸（60℃）水解8～10min；

对照二不经水解；

4.蒸馏水稍洗；

5.置Schiff试剂中室温染色0.5小时左右；

6.亚硫酸盐溶液洗3次，总时间为6min；

7.自来水流水冲洗5min，蒸馏水过一下；

8.用1%亮绿水溶液复染5～10秒（本步骤可省略）；

9.自来水流水冲洗2min；

10.蒸馏水稍洗；

11.压片，显微镜观察。

细胞核有紫红色阳性反应，细胞质无色或绿色；

做Feulgen反应时，应注意的几个问题

（1）水解时间：

水解时间一定要合适，不宜过长或不足，否则会影响实验结果。

如用Carnoy固定液固定的材料，水解时间一般在8－15分钟之间。

水解时间的长短要随不同的材料及不同的固定剂而定。

（2）Schiff试剂的质量：

在做Feulgen反应时，一个重要的成功因素就是Schiff试剂的质量问题。

实验时，要注意试剂颜色是否正常、有无SO2的气味。

（3）洗涤剂的重要性：

漂洗时，所用的亚硫酸水，最好在每次实验前临时配制，以便保持较浓的SO2。

（4）实验对照组：

一定要做对照片，以便说明实验结果的真实性。

（5）操作过程中，用镊子镊取根尖的生长区部位，切勿夹取根冠部位。

压片过程中尽量使根尖分生组织细胞保持原来的分布状态。

1.简述Feulgen反应的原理，并分析实验的关键步骤。

2.Schiff试剂的主要作用是什么?

实验五叶绿体的分离与观察

1．通过实验学习并掌握分离细胞器的原理和方法；

2．观察叶绿体的形态及自发荧光；

叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器，能发生特有的能量转换。

利用低速离心机可以分离叶绿体，其分离在等渗溶液（0.35mol/L氯化钠或0.4mol/L蔗糖溶液）中进行，目的是为了防止渗透压的改变引起叶绿体的损伤。

将匀浆液在1000r/min离心，去除其中的组织残渣和一些未被破碎的完整细胞，然后，3000r/min离心，可获得沉淀的叶绿体（混有部分细胞核）。

在室温下进行分离要迅速。

某些物质在一定短波长的光（如紫外光）的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光（如可见光），这种光就称为荧光。

若停止供能，荧光现象立即停止。

有些生物体内的物质受激发光照射后，可直接发出荧光（称为自发荧光），如叶绿素的火红色荧光。

有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光（称为间接荧光），如叶绿体吸附吖啶橙后可发橘红色荧光。

1.菠菜叶片；

2.蒸馏水，0.35mol/L氯化钠溶液；

3.普通离心机，组织捣碎机，天平，显微镜，载玻片，盖玻片，镊子，目镜测微尺，物镜测微尺，培养皿，滤纸，试管，试管架，移液管，滴管，烧杯，离心管；

1.选取新鲜的菠菜嫩叶，洗净擦干后去除叶梗及粗脉，称3g于0.35mol/L氯化钠溶液15ml中置组织捣碎机或研钵中；

2.利用组织捣碎机低速（5000r/min）匀浆，3～5min，或研磨成匀浆；

3.用6层纱布过滤，滤液盛于烧杯中；

4.取滤液4mL在1000r/min下离心2min，弃去沉淀；

5.将上清液在3000r/min下离心5min，弃去上清液，沉淀即为叶绿体（混有部分细胞核）；

6.沉淀用0.35mol/L氯化钠溶液悬浮；

7.取叶绿体悬液1滴置于载玻片上，加盖玻片后用普通光学显微镜观察；

8.观察叶绿体的形态结构、测量5～10个叶绿体的长轴和短轴；

观察叶绿体的形态结构,测量5～10个叶绿体的长轴和短轴求其平均值。

六、思考题分离

叶绿体实验的原理是什么？

操作过程中应注意什么？

实验六细胞的凝集反应

一、实验目的：

学习研究细胞凝集反应的方法，了解细胞发生凝集反应的原因

二、实验原理：

凝集素是一类含糖、并能与糖专一结合的蛋白质，被认为与糖的运输、储存物质的积累、细胞间的互作以及细胞分裂的调控有关。

凝集素使细胞凝集是因为它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞发生凝集。

大多数凝集素存在于储藏器官中，作为一种氮源；

对某些植物而言，受到危害时，凝集素作为一种防御蛋白发挥作用。

凝集素与糖结合的活性及专一性决定其功能。

三、实验成材料，用品

材料：

马铃薯块茎，韭菜叶片

试剂：

（1）磷酸缓冲液：

分别称取氯化钠7.2g和磷酸氢二钠1.48g用蒸馏水溶解，混合后用蒸馏水定容至1000ml，调pH值至7.2。

（2）2%兔血细胞：

以无菌方法抽取兔的静脉血液（加肝素抗凝剂）用生理盐水洗5次，每次2000r/min离心5min，最后按红细胞体积加生理盐水配成2%兔血细胞液。

（3）生理盐水。

捣碎机，离心管，离心机，载玻片，光学显微镜。

四、实验步骤：

1.马铃薯块茎：

（1）提取凝集素：

称取马铃薯去皮块茎4g，加少许磷酸缓冲液研磨成匀浆，最终加到30ml磷酸缓冲液，浸泡2h，浸出的粗提液中含有可溶性马铃薯凝集素。

（2）测定血凝活性：

用滴管吸取马铃薯凝集素粗提液和2%兔血细胞液各一滴，置载玻片上，充分混匀，静置10min后于低倍显微镜下观察细胞凝集现象。

2.韭菜叶片：

（1）取韭菜叶片3~5g用蒸馏水洗净剪碎，按1：

1（W/V）加入生理盐水，用捣碎机或研磨成匀浆，过滤，滤液在5000r/min下离心20min，弃沉淀,留上清液。

（2）上清液加硫酸胺（约1.8g）至60%饱和度沉淀（不同饱和度硫酸胺沉淀蛋白质表）,5000r/min下离心20min，沉淀用1ml磷酸缓冲液溶解。

（3）用滴管吸取韭菜凝集素提取液和2%兔血细胞液各一滴,置载玻片上，充分混匀，静置10min后于光学显微镜下观察细胞凝集现象。

用一滴磷酸缓冲液和一滴2%兔血细胞液混合作为对照观察。

五、作业

1.绘图表示血细胞凝集现象，并说明原因。

2.比较马铃薯和韭菜凝集素的凝集效果。

（可用凝集率、细胞产生凝集所需时间作为比较依据）3.植物细胞凝集素在兔红细胞液凝集过程中起的作用？

4.哪些因素影响细胞凝集反应？

实验七线粒体和液泡系的超活染与观察

1．通过实验掌握基本的细胞活染方法；

2．观察动植物活细胞内的线粒体、液泡系的形态、数量与分布；

活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。

它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。

超活染是对离体的组织器官进行活染。

线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随物种、组织器官和生理状态的不同而发生变化。

詹纳斯绿B可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；

而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。

中性红为弱碱性染料，对液泡系的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。

1.小麦根；

2.显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、载玻片、凹面载玻片、盖玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。

3.Ringer溶液、1%中性红溶液、1%詹纳斯绿B溶液

（一）线粒体的超活染色

1.取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液。

2.实验者用牙签宽头在自己口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的粘液状物放大载玻片的染液滴中，染色10～l5min（注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液），盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。

3.在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高倍镜或油镜进行观察。

可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中，分布着一些被染或蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构，即是线粒体。

（二）油镜的观察操作

1.把镜筒向上提升约1.5cm（有的是载物台向下降1.5cm），再把油镜转到工作位置。

2.在聚光器和盖玻片上所要观察的位置各滴一小滴香柏油或石蜡油，一边从侧面观察油镜头，一边细心拧动粗调焦螺旋，使油镜头的前端与油滴接触，再慢慢下降油镜，使其前端接近盖玻片为止，最后，一边观察视野中的图像，一边拧动细调焦螺旋，使镜筒稍为上下升降看清标本。

3.观察完毕后，提升物镜约lcm，把油镜转离光轴，及时做清洁工作。

油镜先用干的擦镜纸擦1～2次，把部分油去掉，再用清洁剂（70%乙醚＋30%无水乙醇）或二甲苯滴湿的擦镜纸擦2次，最后用于擦镜纸擦1次。

擦拭要小心，动作要轻，聚光器上的油也用同样方法处理。

（三）液泡系的超活染

1.小麦种子或黄豆培养在培养皿内潮湿的滤纸上，使其发芽，胚根伸长到1cm以上。

2.用双面刀片把初生的小麦或黄豆幼苗根尖（约1～2cm长）小心切一纵切面，放大载玻片中内的1/3000中性红染液滴中，染色5～10min。

3.吸去染液，滴一滴Ringer液，盖上盖玻片，并用镊子轻轻地下压盖玻片，使根尖压扁，利于观察。

4.进行镜检

在高倍镜下，先观察根尖部分的生长点的细胞，可见细胞质中散在很多大小不等的染成玫瑰红色的圆形小泡，这是初生的幼小液泡。

然后，由生长点向延长区观察，在一些已分化长大的细胞内，液泡的染色较浅，体积增大，数目变少。

在成熟区细胞中，一般只有一个淡红色的巨大液泡，占据细胞的绝大部分，将细胞核挤到细胞一侧贴近细胞壁处。

1.简述使用油镜前后的注意事项。

2.描绘描述线粒体的形态结构。

3.比较动物细胞与植物细胞的异同。

实验八、细胞骨架的观察

掌握用光学显微镜观察植物细胞骨架的原理及方法，观察光学显微镜下细胞骨架的网状结构。

植物细胞用适当浓度的TritonX—100处理后，可破坏细胞内蛋白质，但细胞骨架系统的蛋白质却保护完好。

考马斯亮蓝R250（CoomassiebrilliantblueR250）是一种蛋白质染料，处理后的材料用考马斯亮蓝R250（考马斯亮蓝R250）染色后，用光学显微镜观察，可以见到一种网状结构，即是细胞骨架结构。

三、实验材料、用品：

洋葱鳞叶

（1）2％考马斯亮蓝R250染色液：

称考马斯亮蓝R2501g，溶于250ml无水乙醇中，加冰醋酸35ml.再加蒸馏至500ml.

（2）磷酸缓冲液（pH6．8）：

6．0mmol／L磷酸缓冲液，调至pH6.8

（3）M缓冲液（pH7．2）50mmol／L咪唑，50mmol/L）氯化钾、0．5mmol／L氯化镁、　1mmol/L乙二醇（a-氨基乙基）醚四乙酸、0.1mmol/L乙二胺四乙酸；

1mmol／L巯基乙醇，调至pH7．2。

（4）1%TrionX-100：

用M缓冲液配制。

（5）3%戊二醛：

用磷酸缓冲液配制；

（6）中性树胶。

仪器：

显微镜，烧杯，镊子。

玻璃滴管，载玻片

1.用镊子撕取洋葱鳞叶内侧的表皮若干片约1cm2大小若干片），置于50mL烧杯中，加入pH6.8磷酸缓冲液，使其下沉；

2.吸去磷酸缓冲液，用1％TritonX—100处理20min。

3.吸去TritonX—100，用M缓冲液洗3次,每次5min。

4.用3％戊二醛固定30min。

5.磷酸缓冲液（pH6．8）洗3次，每次5min。

6.0.2%考马斯亮蓝R250染色10min。

7.蒸馏水洗2次，然后将样品置于载玻片上,加盖玻片，于普通光学显微镜下观察。

8.如果染色效果好，则可依次用50％乙醇、70%乙醇,95％乙醇、正丁醇、二甲苯处理样品,各5min,然后将样品平展于载玻片上，加一滴中性树胶，盖上盖玻片封片，制成永久切片。

五、作业：

1.描绘所观察到的洋葱鳞叶细胞骨架图。

2.如何分析细胞骨架的成分?