《饲料中乙酸异戊酯乙基麦芽酚肉桂醛大茴香脑γWord文档下载推荐.docx

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F。

溶于乙醇、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、碱液、大多数非挥发性油和矿物油，几乎不溶于甘油和水。

乙酸异戊酯（Isoamylacetate），无色中性液体。

有香蕉香味。

熔点-78℃，沸点143℃。

几乎不溶于水和甘油，可混溶于乙醇、乙醚、苯、乙酸乙酯、二硫化碳等多数有机溶剂。

γ—壬内酯（gamma-Nonanolactone），俗称十八醛、椰子醛，是一种淡黄色或无色油状液体。

具有强烈椰子香气。

沸点266.6℃，闪点98.8℃。

易溶于乙醇、乙醚及油类，不溶于水。

肉桂酸甲酯（methylcinnamate），白色至淡黄色结晶或无色至淡黄色液体。

熔点34~38℃，沸点260~262℃，闪点>

110℃。

溶于乙醇、乙醚、甘油、丙二醇、大多数非挥发性油和矿物油，不溶于水。

大茴香脑（anethole）无色或微黄色液体或结晶。

熔点20~21℃，沸点234~237℃，闪点195°

能与氯仿、醚混溶，溶于苯、乙酸乙酯、丙酮、二硫化碳、石油醚和醇，不溶于水。

带有甜味，具茴香的特殊香气。

乙基麦芽酚（ethylmaltol），为白色或微黄色晶体，遇碱呈黄色。

熔点89～92℃,易溶于热水、乙醇、氯仿与甘油,有焦糖香味和水果味。

乙基麦芽酚溶解度在15℃时65mL水中可溶解1g，25℃时55mL水可溶解1g。

3、主要作用和配方含量

有效刺激幼龄动物的嗅觉，吸引动物采食，有效掩盖饲料异味。

提高饲料适口性，诱食作用，提高采食量，加快动物生长速度。

掩盖饲料中异味，改善适口性。

使不同批次的饲料具有相同的香味，抵抗换料、高温、疾病等引起的应激反应。

使饲料更具商品性，提高质量档次。

【11】

常见饲用香味剂配方含量为1g/kg以上。

（二）方法的研制和试验条件的确定

1、色谱柱的选择

参照9种香料的相应的食品添加剂国标方法【2-10】，分别以DB-5（5%苯基甲基聚硅氧烷）长30米和60米的毛细管柱进行了试验，最终根据分离度和添加回收试验数据，选用了DB-5长60米的毛细管柱，其可以提供更好的分离和保留效果。

因此，该方法应用DB-5毛细管柱，长60m，内径0.25mm，膜厚0.25µ

m色谱柱进行本次检测方法研究。

2、色谱条件的选择

由于香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、γ—壬内酯、肉桂酸甲酯、大茴香脑、乙基麦芽酚的沸点及理化性质有很大差异，为了使这几种物质更好地分离，其他的物质不对其产生影响，在参照相应食品添加剂的国标方法（见表1）的基础上，本标准选用了程序升温的方式，并对不同的升温速率和温度进行了多次优化，以混合标准溶液多次进样，对色谱基线稳定性、保留时间、分离度等进行考察，最终确定的色谱条件为：

色谱柱：

DB-5毛细管柱，长60m，内径0.25mm，膜厚0.25µ

m，或性能类似的分析柱；

载气：

氮气，2.0mL/min；

分流比：

10：

1；

进样口温度：

270℃；

检测器温度：

290℃；

柱温箱温度：

起始温度90℃，保持2min，以15℃/min升至200℃，保持8min；

进样量：

1L。

试验结果表明该色谱条件均满足色谱分析的需要。

结果见图10。

图10香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、γ—壬内酯、肉桂酸甲酯、大茴香脑、乙基麦芽酚混合标样（20µ

g/mL）色谱图

物质名称

颁布的标准编号

使用仪器设备/检测器

使用色谱柱固定相

备注

香兰素

GB3861-2008

气相/FID

SE-30

乙基香兰素

QB/T1791-2006

5%-10%PEG-20M

肉桂醛

GB28346-2012

（5％苯基）甲基聚硅氧烷。

桃醛

QB/T1784-2007

HP-5,5%苯基甲基聚硅氧烷

乙酸异戊酯

GB6776-2006

PEG-20M

γ—壬内酯

QB/T1121-2007

肉桂酸甲酯

GB28348-2012

二甲基聚硅氧烷

大茴香脑（天然）

GB23489-2009

极性柱

天然大茴香脑（包含大茴香脑）

乙基麦芽酚

GB12487-2010

（5％苯基）甲基聚硅氧烷

表1相应食品添加剂的国标方法

3、提取液和提取方式的选择

根据香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、γ—壬内酯、肉桂酸甲酯、大茴香脑、乙基麦芽酚的理化性质，以上9种香味剂均易溶于乙醇或氯仿中溶解，在水中几乎不溶，结合实验室常用试剂及其毒性的大小，选择了无水乙醇进行试验。

试验结果表明，用无水乙醇作为提取液时，其回收率高，因此选择无水乙醇为提取液。

用无水乙醇为提取液，用涡旋振荡、摇床震荡和手摇动、超声分别提取5min、10min、20min、30min进行了比较。

试验结果表明：

超声提取20min的回收率较高且用时比30min短，故选取选用超声提取20min。

4、样品前处理和色谱条件的确定

综上所述，样品前处理过程确定为：

称取试样1g（精确至0.1mg），置于10mL棕色容量瓶中，加5mL无水乙醇，手动振摇混匀，超声20min后，用无水乙醇定容至刻度。

手动振摇5min，混匀后静置。

取上清溶液，溶液过0.45µ

m的微孔滤膜，供上机测定。

气相色谱参考条件：

DB-5毛细管柱，长60m，内径0.25mm，膜厚0.25µ

柱流量：

2.0mL/min。

290℃。

270℃。

柱箱温度：

起始温度90℃，恒温2min。

以15℃/℃速率升温到200℃，恒温8min。

（三）方法性能试验

1、标准品的定位及标准工作溶液的方法线性试验

用浓度为20g/mL的香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、γ—壬内酯、肉桂酸甲酯、大茴香脑、乙基麦芽酚标准工作液测定，得出九种标准品的出峰时间，结果见表2。

香味剂名称

大茴香脑

出峰时间（min）

5.397

9.953

10.911

11.020

11.801

12.091

12.228

12.863

14.310

表2：

九种香味剂出峰时间

用浓度分别为5.00g/mL、10.00g/mL、20.0g/mL、50.0g/mL、100.0g/mL、200g/mL和500g/mL的混合标准工作溶液，每个浓度连续进样3次，按平均值,以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，计算标准曲线线性。

试验结果表明各种香味剂的浓度范围在5.00g/mL-500g/mL时，标准曲线的R2均≥0.999，有很好的线性，结果见图11-19。

图11：

乙酸异戊酯的标准工作液的线性

图12：

乙基麦芽酚的标准工作液的线性

图13：

肉桂醛的标准工作液的线性

图14：

大茴香脑的标准工作液的线性

图15：

γ—壬内酯的标准工作液的线性

图16:

肉桂酸甲酯的标准工作液的线性

图17：

香兰素的标准工作液的线性

图18：

乙基香兰素的标准工作液的线性

图19：

桃醛的标准工作液的线性

2、方法检出限和定量限

5µ

g/mL标准溶液的色谱图见图20，可见浓度为5µ

g/mL的9种香味剂混标溶液的色谱图分离度很好。

在空白载体中分别添加香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、γ—壬内酯、肉桂酸甲酯、大茴香脑、乙基麦芽酚各20mg/kg，色谱图见图20，空白饲料色谱图见由图22，添加回收试验结果见表3。

根据结果显示图谱中信噪比达到3:

1，将所以，将该方法的最低检出限定为20mg/kg。

图9种香味剂5µ

g/mL混标色谱图

图空白饲料中分别添加9种香味剂各20mg/kg色谱图

图空白饲料色谱图

在空白饲料中分别添加香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、γ—壬内酯、肉桂酸甲酯、大茴香脑、乙基麦芽酚各50mg/kg，结果见图23和表2。

通过添加回收试验表明，在添加浓度为50mg/kg时，信噪比达到10:

1且样品的回收率均在70%以上，且平行样品的重复性均小于10%。

因此，该方法的定量限为50mg/kg。

根据饲料中香味剂常用的使用量，该方法确定的最低检出限20mg/kg和定量限50mg/kg能满足各种饲用调味剂的检测。

图空白饲料中添加9种香味剂各50mg/kg色谱图

添加浓度（mg/kg）

回收率（%）

RSD

%

20

78.5

74.2

71.0

77.5

70.2

78.6

5.0

70.4

71.5

76.3

77.4

75.8

71.2

4.1

82.1

80.4

78.9

75.3

3.8

73.2

70.5

77.8

4.3

75.6

74.3

72.3

79.5

80.2

4.8

75.5

77.1

83.5

88.4

6.8

77.2

72.9

79.1

3.3

78.3

74.5

4.4

72.2

75.2

74.1

3.0

50

85.3

82.6

84.2

87.5

3.1

78.4

80.5

79.3

2.9

78.2

70.1

80.3

81.4

5.2

74.6

82.3

83.4

5.5

81.2

79.6

84.1

82.0

86.1

88.2

85.2

80.1

77.6

83.2

2.5

85.7

89.6

81.1

表3方法最低检出限和定量限添加回收结果

4、准确度、重现性和方法的适用性

选择空白饲料为测试对象，进行加标回收率试验。

在1g空白饲料中分别加入适宜体积的香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、γ—壬内酯、肉桂酸甲酯、乙基麦芽酚、大茴香脑混合标准工作溶液，使其添加浓度为20mg/kg、50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg、500mg/kg、1000mg/kg，进行加标回收试验，同一浓度做6次平行试验。

结果见表4～表12。

在添加上述6个不同浓度，其回收率为70.1-117.5%，重复性RSD最大的为11.4%。

说明该方法有较高的准确性和重现性。

为考察本方法的适用性，我们从市场上收集了5生产厂家的5种代表性饲料样品，添加20mg/kg、50mg/kg，平行测定6次，回收率均在70.6%-99.6%之间，结果见表13,。

从结果可以看出，不同的生产厂家、不同成分的饲料均可用该方法检测其香味剂含量。

通过以上试验，也表明了该方法适用的范围为饲料。

5方法重复性

根据添加回收试验表3～表10的结果，不同的饲料样品，在同一添加浓度时，6次检测结果的RSD%均小于20%；

不同实验室间的方法重复性应小于20%。

6稳定性试验

为了考察香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、γ—壬内酯、肉桂酸甲酯、乙基麦芽酚、大茴香脑标准储备溶液和标准中间溶液的稳定性，在首次配制好储备溶液和中间溶液后放置于2℃～8℃冷藏密封保存，每隔一个月测定一次，对比其相同浓度峰面积的大小。

试验表明：

储备溶液的峰面积基本无变化，中间溶液在1个月以后有所降低。

因此，将贮备溶液的保存期定为2℃～8℃冷藏密封保存，有效期为3个月；

中间溶液2℃～8℃冷藏密封保存，有效期为1个月。

添加浓度20mg/kg

添加浓度50mg/kg

添加浓度100mg/kg

添加浓度200mg/kg

添加浓度500mg/kg

添加浓度1000mg/kg

回收率

平均值

76.8

83.8

89.2

88.7

85.5

90.5

91.7

92.5

89.7

2.8

89.5

93.2

95.6

6.5

98.7

100.3

93.5

93.4

85.6

6.3.

93.6

97.3

98.2

99.6

90.1

99.4

91

96.4

3.9

表4香兰素添加回收试验结果

添加浓度50mg/kg

添加浓度100mg/kg

添加浓度200mg/kg

添加浓度500mg/kg

添加浓度1000mg/kg

88.5

84.0

4.6

88.9

90.4

91.3

95.2

97.5

93.8

98.9

103.2

101.2

87.6

99.5

96.8

105.5

104.5

110.5

109.6

100.2

104.0

6.1

表5乙基香兰素添加回收试验结果

78.1

81.5

78.8

85.4

82.5

81.0

85.1

3.4

90.3

97.0

4.5

105.3

107.5

105.4

104.8

4.0

表6肉桂醛添加回收试验结果

84.4

84.7

84.8

3.6

92.3

96.5

97.4

87.2

91.4

5.4

98.3

99.8

100.5

95.8

102.5

117.5

108.9

115.4

108.2

6.4

表7桃醛添加回收试验结果

75.0

83.6

84.3

96.9

7.4

96.3

85.9

105.2

11.4

105.6

110.4

102.6

111.0

108.6

109．8

112.4

112.0

103．8

113．0

115．0

3.5

表8乙酸异戊酯添加回收试验结果

添加浓度200mg/kg