《饲料中乙酸异戊酯乙基麦芽酚肉桂醛大茴香脑γWord文档下载推荐.docx

1、F。溶于乙醇、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、碱液、大多数非挥发性油和矿物油，几乎不溶于甘油和水。乙酸异戊酯（Isoamyl acetate），无色中性液体。有香蕉香味。熔点-78，沸点143。几乎不溶于水和甘油，可混溶于乙醇、乙醚、苯、乙酸乙酯、二硫化碳等多数有机溶剂。壬内酯（gamma-Nonanolactone），俗称十八醛、椰子醛，是一种淡黄色或无色油状液体。具有强烈椰子香气。沸点266.6，闪点98.8。易溶于乙醇、乙醚及油类，不溶于水。肉桂酸甲酯（methyl cinnamate），白色至淡黄色结晶或无色至淡黄色液体。熔点3438，沸点260262，闪点110。溶于乙醇、乙醚、甘油、丙二

2、醇、大多数非挥发性油和矿物油，不溶于水。大茴香脑（anethole）无色或微黄色液体或结晶。熔点2021，沸点234237，闪点195能与氯仿、醚混溶，溶于苯、乙酸乙酯、丙酮、二硫化碳、石油醚和醇，不溶于水。带有甜味，具茴香的特殊香气。乙基麦芽酚（ethylmaltol），为白色或微黄色晶体，遇碱呈黄色。熔点8992 ,易溶于热水、乙醇、氯仿与甘油,有焦糖香味和水果味。乙基麦芽酚溶解度在15时65mL水中可溶解1g，25时55mL水可溶解1g。3、主要作用和配方含量有效刺激幼龄动物的嗅觉，吸引动物采食，有效掩盖饲料异味。提高饲料适口性，诱食作用，提高采食量，加快动物生长速度。掩盖饲料中异味，改

3、善适口性。使不同批次的饲料具有相同的香味，抵抗换料、高温、疾病等引起的应激反应。使饲料更具商品性，提高质量档次。【11】 常见饲用香味剂配方含量为1g/kg以上。（二）方法的研制和试验条件的确定1、色谱柱的选择参照9种香料的相应的食品添加剂国标方法【2-10】，分别以DB-5（5%苯基甲基聚硅氧烷）长30米和60米的毛细管柱进行了试验，最终根据分离度和添加回收试验数据，选用了DB-5长60米的毛细管柱，其可以提供更好的分离和保留效果。因此，该方法应用DB-5毛细管柱，长60 m，内径0.25 mm，膜厚0.25 m色谱柱进行本次检测方法研究。2、色谱条件的选择由于香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃

4、醛、乙酸异戊酯、壬内酯、肉桂酸甲酯、大茴香脑、乙基麦芽酚的沸点及理化性质有很大差异，为了使这几种物质更好地分离，其他的物质不对其产生影响，在参照相应食品添加剂的国标方法（见表1）的基础上，本标准选用了程序升温的方式，并对不同的升温速率和温度进行了多次优化，以混合标准溶液多次进样，对色谱基线稳定性、保留时间、分离度等进行考察，最终确定的色谱条件为：色谱柱： DB-5毛细管柱，长60 m，内径0.25 mm，膜厚0.25 m，或性能类似的分析柱；载气：氮气，2.0mL/min；分流比：10：1；进样口温度： 270；检测器温度：290；柱温箱温度：起始温度90，保持2min，以15/min升至20

5、0，保持8min；进样量：1 L。试验结果表明该色谱条件均满足色谱分析的需要。结果见图10。图 10 香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、壬内酯、肉桂酸甲酯、大茴香脑、乙基麦芽酚混合标样（20g/mL）色谱图物质名称颁布的标准编号使用仪器设备/检测器使用色谱柱固定相备注香兰素GB 3861-2008气相/FIDSE-30乙基香兰素QB/T 1791-20065%-10%PEG-20M肉桂醛GB 28346-2012（5苯基）甲基聚硅氧烷。桃醛QB/T 1784-2007HP-5,5%苯基甲基聚硅氧烷乙酸异戊酯GB 6776-2006PEG-20M壬内酯QB/T 1121-2007肉桂

6、酸甲酯GB 28348-2012二甲基聚硅氧烷大茴香脑（天然）GB 23489-2009极性柱天然大茴香脑（包含大茴香脑）乙基麦芽酚GB 12487-2010（5苯基）甲基聚硅氧烷表1 相应食品添加剂的国标方法3、提取液和提取方式的选择根据香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、壬内酯、肉桂酸甲酯、大茴香脑、乙基麦芽酚的理化性质，以上9种香味剂均易溶于乙醇或氯仿中溶解，在水中几乎不溶，结合实验室常用试剂及其毒性的大小，选择了无水乙醇进行试验。试验结果表明，用无水乙醇作为提取液时，其回收率高，因此选择无水乙醇为提取液。用无水乙醇为提取液，用涡旋振荡、摇床震荡和手摇动、超声分别提取5min、

7、10min、20min、30min进行了比较。试验结果表明：超声提取20min的回收率较高且用时比30min短，故选取选用超声提取20min。4、样品前处理和色谱条件的确定综上所述，样品前处理过程确定为：称取试样1 g（精确至0.1 mg），置于10mL棕色容量瓶中，加5mL无水乙醇，手动振摇混匀，超声20min后，用无水乙醇定容至刻度。手动振摇5min，混匀后静置。取上清溶液，溶液过0.45 m的微孔滤膜，供上机测定。气相色谱参考条件：DB-5毛细管柱，长60 m，内径0.25 mm，膜厚0.25 柱流量：2.0mL/min。290。270。柱箱温度：起始温度90，恒温2min。以15/速率

8、升温到200，恒温8min。（三）方法性能试验1、标准品的定位及标准工作溶液的方法线性试验用浓度为20 g/ mL的香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、壬内酯、肉桂酸甲酯、大茴香脑、乙基麦芽酚标准工作液测定，得出九种标准品的出峰时间，结果见表2。香味剂名称大茴香脑出峰时间（min）5.3979.95310.91111.02011.80112.09112.22812.86314.310表2：九种香味剂出峰时间用浓度分别为5.00 g/ mL、10.00 g/ mL、20.0 g/ mL、50.0 g/ mL、100.0 g/ mL、200 g/ mL和500 g/ mL的混合标准工作溶

9、液，每个浓度连续进样3次，按平均值,以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，计算标准曲线线性。 试验结果表明各种香味剂的浓度范围在5.00 g/ mL-500 g/ mL时，标准曲线的R2均0.999，有很好的线性，结果见图11-19。图11：乙酸异戊酯的标准工作液的线性图12：乙基麦芽酚的标准工作液的线性图13：肉桂醛的标准工作液的线性图14：大茴香脑的标准工作液的线性图15：壬内酯的标准工作液的线性图16:肉桂酸甲酯的标准工作液的线性图17：香兰素的标准工作液的线性图18：乙基香兰素的标准工作液的线性图19：桃醛的标准工作液的线性2、方法检出限和定量限5g/mL标准溶液的色谱图见图20，可见浓度

10、为5g/mL的9种香味剂混标溶液的色谱图分离度很好。在空白载体中分别添加香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、壬内酯、肉桂酸甲酯、大茴香脑、乙基麦芽酚各20mg/kg，色谱图见图20，空白饲料色谱图见由图22，添加回收试验结果见表3。根据结果显示图谱中信噪比达到3:1，将所以，将该方法的最低检出限定为20mg/kg。图 9种香味剂5g/mL混标色谱图图 空白饲料中分别添加9种香味剂各20mg/kg色谱图图 空白饲料色谱图在空白饲料中分别添加香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、壬内酯、肉桂酸甲酯、大茴香脑、乙基麦芽酚各50mg/kg，结果见图23 和表2 。通过添加回收试验表明

11、，在添加浓度为50mg/kg时，信噪比达到10:1且样品的回收率均在70%以上，且平行样品的重复性均小于10%。因此，该方法的定量限为50mg/kg。根据饲料中香味剂常用的使用量，该方法确定的最低检出限20mg/kg和定量限50mg/kg能满足各种饲用调味剂的检测。图 空白饲料中添加9种香味剂各50mg/kg色谱图添加浓度（mg/kg）回收率（%）RSD%2078.574.271.077.570.278.65.070.471.576.377.475.871.24.182.180.478.975.33.873.270.577.84.375.674.372.379.580.24.875.577.1

12、83.588.46.877.272.979.13.378.374.54.472.275.274.13.05085.382.684.287.53.178.480.579.32.978.270.180.381.45.274.682.383.45.581.279.684.182.086.188.285.280.177.683.22.585.789.681.1 表3方法最低检出限和定量限添加回收结果4、准确度、重现性和方法的适用性选择空白饲料为测试对象，进行加标回收率试验。在1 g空白饲料中分别加入适宜体积的香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、壬内酯、肉桂酸甲酯、乙基麦芽酚、大茴香脑混合标准

13、工作溶液，使其添加浓度为20 mg/kg、50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg 、500mg/kg、1000mg/kg，进行加标回收试验，同一浓度做6次平行试验。结果见表4表12。在添加上述6个不同浓度，其回收率为70.1- 117.5 % ，重复性RSD最大的为 11.4%。说明该方法有较高的准确性和重现性。为考察本方法的适用性，我们从市场上收集了5生产厂家的5种代表性饲料样品，添加20 mg/kg、50mg/kg，平行测定6次，回收率均在70.6%-99.6%之间，结果见表13,。从结果可以看出，不同的生产厂家、不同成分的饲料均可用该方法检测其香味剂含量。通过以上试验，也表明

14、了该方法适用的范围为饲料。5 方法重复性根据添加回收试验表3表10的结果，不同的饲料样品，在同一添加浓度时，6次检测结果的RSD%均小于20%；不同实验室间的方法重复性应小于20%。6稳定性试验为了考察香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、壬内酯、肉桂酸甲酯、乙基麦芽酚、大茴香脑标准储备溶液和标准中间溶液的稳定性，在首次配制好储备溶液和中间溶液后放置于28冷藏密封保存，每隔一个月测定一次，对比其相同浓度峰面积的大小。试验表明：储备溶液的峰面积基本无变化，中间溶液在1个月以后有所降低。因此，将贮备溶液的保存期定为28冷藏密封保存，有效期为3个月；中间溶液28冷藏密封保存，有效期为1个月。

15、添加浓度 20mg/kg添加浓度50 mg/kg添加浓度 100 mg/kg添加浓度 200mg/kg添加浓度 500 mg/kg添加浓度1000 mg/kg回收率平均值76.883.889.288.785.590.591.792.589.72.889.593.295.66.598.7100.393.593.485.66.3.93.697.398.299.690.199.49196.43.9表4香兰素添加回收试验结果添加浓度 50mg/kg添加浓度100 mg/kg添加浓度 200 mg/kg添加浓度 500mg/kg添加浓度 1000 mg/kg88.584.04.688.990.491.3

16、95.297.593.898.9103.2101.287.699.596.8105.5104.5110.5109.6100.2104.06.1表5乙基香兰素添加回收试验结果78.181.578.885.482.581.085.13.490.397.04.5105.3107.5105.4104.84.0表6 肉桂醛添加回收试验结果 84.484.784.83.692.396.597.487.291.45.498.399.8100.595.8102.5117.5108.9115.4108.26.4 表7桃醛添加回收试验结果75.083.684.396.97.496.385.9105.211.4105.6110.4102.6111.0108.61098112.4112.01038113011503.5表8 乙酸异戊酯添加回收试验结果添加浓度200 mg/kg