常用培养基配方Word下载.docx

常用培养基配方Word下载.docx

《常用培养基配方Word下载.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《常用培养基配方Word下载.docx（65页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

41GN增菌液

42肠道菌增菌肉汤

43亚硫酸铋琼脂（BS）

44DHL琼脂

45HE琼脂

46SS琼脂

47WS琼脂

48麦康凯琼脂

49伊红美蓝琼脂（EMB）

50三糖铁琼脂（TSI）

51三糖铁琼脂（换用方法）

52克氏双糖铁琼脂（KI）

53克氏双糖铁琼脂（换用方法）

54葡萄糖半固体发酵管

555%乳糖发酵管

56CAYE培养基

57Honda氏产毒肉汤

58Elek氏培养基（毒素测定用）

59氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基

60胰蛋白胨水

61Rustigian氏尿素培养液

62氯化钠结晶紫增菌液

63氯化钠蔗糖琼脂

64嗜盐菌选择性琼脂

653.5%氯化钠三糖铁琼脂

66氯化钠血琼脂

673.5%氯化钠生化试验培养基

68改良磷酸盐缓冲液（小肠结肠炎耶尔森氏菌专用）

69CIN－1培养基

70嗜盐性试验培养基

71改良Y培养基

72改良克氏双糖

73快速硫化氢（H2S）试验琼脂

74DNA酶甲基绿琼脂（DTA）

75Cary－Blair氏运送培养基

76Skirrow氏培养基

77TTC琼脂

78甘氨酸培养基

79改良磷酸盐缓冲液

80氯化镁孔雀绿肉汤

81胰酪胨大豆肉汤

82Baird－Parker氏培养基

837.5%氯化钠肉汤

84匹克氏肉汤

85甘露醇卵黄多粘菌素琼脂

863.8%柠檬酸钠溶液

87酪蛋白琼脂

88木糖－明胶培养基

89庖肉培养基

90卵黄琼脂培养基

91亚硫酸盐－多粘菌素－磺胺嘧啶琼脂（SPS）

92液体硫乙醇酸盐培养基（FT）

93含铁牛奶培养基

94动力-硝酸盐培养基（A法）

95动力－硝酸盐培养基（B法）

96血清肉汤

97马丁氏肉汤

98明胶培养基

99察氏培养基

100高盐察氏培养基

101马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）

102马铃薯琼脂

103孟加拉红培养基

104玉米粉琼脂

105大米粉培养基

106亚硒酸盐煌绿增菌液

107煌绿肉汤增菌液

108肠毒素产毒培养基

1090.1%蛋白胨水稀释剂

110半固体琼脂

01糖发酵管

成分：

　牛肉膏　　　　　　5g

　　蛋白胨　　　　　　10g

　　氯化钠　　　　　　3g

　　磷酸氢二钠（Na2HPO4·

12H2O）　　2g

　　0.2%滇麝香草酚蓝溶液　12mL

　　蒸馏水　　　　　　1000mL

　　pH7.4

制法：

　1葡萄糖发酵管按上述成分配好后，按0.5%加入葡萄糖，分装于有一个倒置小管的小试管内，121℃高压灭菌15min。

　　2其他各种糖发酵管可按上述成分配好后，分装每瓶100mL，121℃高压灭菌15min。

另将各种糖类分别配好10%溶液，同时高压灭菌。

将5mL糖溶液加入于100mL培养基内，以无菌操作分装小试管。

注：

蔗糖不纯，加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。

试验方法：

从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于36℃±

1℃培养，一般观察2～3d。

迟缓反应需观察14～30d。

　　邻硝基酚β－D-半乳糖昔（ONPG）　　　　　　　60mg

　　（O－Nitrophenyl－β－D－galactopyranoside）

　　0.01mol/L磷酸钠缓冲液（pH7.5）　　　　　　　10mL

　　1%蛋白胨水（PH7.5）　　　　　　　　　　　　　30mL

将ONPG溶于缓冲液内，加入蛋白胨水，以过滤法除菌，分装于10mm×

75mm试管，每管0.5mL，用橡皮塞塞紧。

自琼脂斜面上挑取培养物1满环接种，于36±

1℃培养1～3h和24h观察结果。

如果β－半乳糖苷酶产生，则于1～3h变黄色，如无此酶则24h不变色。

03西蒙氏柠檬酸盐培养基

　　氯化钠　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　5g　

　　硫酸镁（MgSO4·

7H2O）　　　　　　　　　　　　　　　　　0.2g

　　磷酸二氢铵　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　1g

　　磷酸氢二钾　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　1g

　　柠檬酸钠　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　5g

　　琼脂　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　20g

　　蒸馏水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　1000mL

　　0.2%溴麝香草酚蓝溶液　　　　　　　　　　　　　　　　　40mL

　　pH6.8

先将盐类溶解于水内，校正pH，再加琼脂，加热溶化。

然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，121℃高压灭菌15min。

放成斜面。

挑取少量琼脂培养物接种，于36±

1℃培养4d，每天观察结果。

阳性者斜面上有菌落生长，培养基从绿色转为蓝色。

04缓冲葡萄糖蛋白胨水（MR和VP试验用）

　　磷酸氢二钾　　5g

　　多胨　　　　　7g

　　葡萄糖　　　　　5g

　　蒸馏水　　　　　1000mL

　　pH7.0

溶化后校正pH，分装试管，每管1mL，121℃高压灭菌15min。

甲基红（MR）试验：

自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中，于36±

1℃培养2～5d，哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养。

滴加甲基红试剂一滴，立即观察结果。

鲜红色为阳性，黄色为阴性。

甲基红试剂配法：

10mg甲基红溶于30mL95%乙醇中，然后加入20mL蒸馏水。

V－P试验：

用琼脂培养物接种本培养基中，于36±

1℃培养2～4d。

哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养。

加入6%α－萘酚－乙醇溶液0.5mL和40%氢氧化钾溶液0.2mL，充分振摇试管，观察结果。

阳性反应立刻或于数分钟内出现红色，如为阴性，应放在36±

1℃下培养4h再进行观察。

　05克氏柠檬酸盐培养基

　　柠檬酸钠　　　　　　　　　　　3g

　　葡萄糖　　　　　　　　　　　　0.2g

　　酵母浸膏　　　　　　　　　　　0.5g

　　单盐酸半胱氨酸　　　　　　　　0.1g

　　磷酸二氢钾　　　　　　　　　　1g

　　氯化钠　　　　　　　　　　　　5g

　　0.2%酚红溶液　　　　　　　　　6mL

　　琼脂　　　　　　　　　　　　　15g

　　蒸馏水　　　　　　　　　　　　1000mL

加热溶解，分装试管，121℃高压灭菌15min。

用琼脂培养物接种整个斜面，在36±

1℃培养7d，每天观察结果。

阳性者培养基变为红色。

06丙二酸钠培养基

　　酵母浸膏　　　　　　　　　1g

　　硫酸铵　　　　　　　　　　2g

　　磷酸氢二钾　　　　　　　　0.6g

　　磷酸二氢钾　　　　　　　　0.4g

　　氯化钠　　　　　　　　　　2g

　　丙二酸钠　　　　　　　　　3g

　　0.2%溴麝香草酚蓝溶液　　　12mL

　　蒸馏水　　　　　　　　　　1000mL

先将酵母浸膏和盐类溶解于水，校正pH后再加入指示剂，分装试管，121℃高压灭菌15min。

用新鲜的琼脂培养物接种，于36±

1℃培养48h，观察结果。

阳性者由绿色变为蓝色。

07葡葡糖铵培养基

　　氯化钠　　　　　　　　　　　　　　5g

7H2O）　　　　　　　0.2g

　　磷酸二氢铵　　　　　　　　　　　　1g

　　磷酸氢二钾　　　　　　　　　　　　1g

　　葡萄糖　　　　　　　　　　　　　　2g

　　琼脂　　　　　　　　　　　　　　　20g

　　蒸馏水　　　　　　　　　　　　　　1000mL

　　0.2%溴麝香草酚蓝溶液　　　　　　　40mL

先将盐类和糖溶解于水内，校正pH，再加琼脂，加热溶化，然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，121℃高压灭菌15min，放成斜面。

用接种针轻轻触及培养物的表面，在盐水管内做成极稀的悬液，肉眼观察不见混浊，以每一接种环内含菌数在20～100之间为宜。

将接种环灭菌后挑取菌液接种，同时再以同法接种普通斜面一支作为对照。

于36±

1℃培养24h。

阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长；

阴性者不生长，但在对照培养基上生长良好。

如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果。

容器使用前应用清洁液浸泡。

再用清水、蒸馏水冲洗干净，并用新棉花做成棉塞，干热灭菌后使用。

如果操作时不注意，有杂质污染时，易造成假阳性的结果。

　　08Hugh－Leifson培养基（O/F试验用）

　　蛋白胨　　　　　　　　　　　　　　2g

　　氯化钠　　　　　　　　　　　　　　5g

　　磷酸氢二钾　　　　　　　　　　　　0.3g

　　琼脂　　　　　　　　　　　　　　　4g

　　葡萄糖　　　　　　　　　　　　　　10g

　　0.2%溴麝香草酚蓝溶液　　　　　　　12mL

　　蒸馏水　　　　　　　　　　　　　　1000mL

　　pH7.2

将蛋白胨和盐类加水溶解后，校正pH至7.2。

加入葡萄糖、琼脂煮沸，溶化琼脂，然后加入指示剂。

混匀后，分装试管，121℃高压灭菌15min，直立凝固备用。

从斜面上挑取小量培养物作穿刺接种，同时接种两支培养基，其中一支于接种后滴加溶化的1%琼脂液于表面，高度约1cm，于36±

1℃培养。

　　马尿酸钠　　1g

　　肉浸液　　　100mL

将马尿酸钠溶解于肉浸液内，分装于小试管内，并于管壁画一横线。

以标志管内液面高度，高压灭菌121℃20min。

试剂：

三氯化铁（FeCl3·

6H2O）12g，溶于2%盐酸溶液100mL中即成。

用纯培养物接种，于42℃培养48h，观察培养液是否到达试管壁上记号处，如不足时，用蒸馏水补足至原量。

经离心沉淀，吸取上清液0.8mL，加入三氯化铁试剂0.2mL，立即混合均匀，经10～15min，观察结果。

结果：

出现恒久之沉淀物为阳性。

　　蛋白胨　　　　　5g

　　牛肉膏　　　　　3g

　　明胶　　　　　　120g

　　pH6.8～7.0

加热溶解、校正至pH7.4～7.6，分装小管，121℃高压灭菌10min，取出后迅速冷却，使其凝固。

复查最终pH应为6.8～7.0。

用琼脂培养物穿刺接种，放在22～25℃培养，每天观察结果，记录液化时间。

或放在36士1℃培养，每天取出，放冰箱内30min后再观察结果。

　　酵母浸膏　　　　　　　　　　　　　　　3g

　　DI－苯丙氨酸（或L－苯丙氨酸1g）　　　　2g

　　磷酸氢二钠　　　　　　　　　　　　　　1g

　　氯化钠　　　　　　　　　　　　　　　　5g

　　琼脂　　　　　　　　　　　　　　　　　12g

　　蒸馏水　　　　　　　　　　　　　　　　1000mL

加热溶解后分装试管，121℃高压灭菌15min，使成斜面。

自琼脂斜面上挑取大量培养物，移种于苯丙氨酸琼脂，在36±

1℃培养4h或18～24h。

滴加10%三氯化铁溶液2～3滴，自斜面培养物上流下，苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色。

　　蛋白胨　　　　　　　　　　5g

　　酵母浸膏　　　　　　　　　3g

　　葡萄糖　　　　　　　　　　1g

　　蒸馏水　　　　　　　　　　1000mL

　　1.6%滇甲酚紫－乙醇溶液　　1mL

　　L－氨基酸或DL－氨基酸　　0.5或1g/100mL

除氨基酸以外的成分加热溶解后，分装每瓶100mL，分别加入各种氨基酸：

赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸。

L－氨基酸按0.5%加入，DL－氨基酸按1%加入。

再行校正pH至6.8。

对照培养基不加氨基酸。

分装于灭菌的小试管内，每管0.5mL，上面滴加一层液体石蜡，115℃高压灭菌10min。

从琼脂斜面上挑取培养物接种，于36±

1℃培养18～24h，观察结果。

氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱，培养基应呈紫色。

阴性者无碱性产物，但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色。

对照管应为黄色。

　　蛋白胨（或胰蛋白胨）　20g

　　氯化钠　　　　　　　5g

　　蒸馏水　　　　　　　1000mL

按上述成分配制，分装小试管，121℃高压灭菌15min。

靛基质试剂

柯凡克试剂：

将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中。

然后缓慢加入浓盐酸25mL。

欧－波试剂：

将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇内。

然后缓慢加入浓盐酸20mL。

挑取小量培养物接种，在36±

1℃培养1～2d，必要时可培养4～5d。

加入柯凡克试剂约0.5mL，轻摇试管，阳性者于试剂层呈深红色；

或加入欧－波试剂约0.5mL，沿管壁流下，覆盖于培养液表面，阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。

蛋白胨中应含有丰富的色氨酸。

每批蛋白胨买来后，应先用已知菌种鉴定后方可使用。

　　牛肉膏　　　　　　3g

　　酵母浸膏　　　　　3g

　　蛋白胨　　　　　　10g

　　硫酸亚铁　　　　　0.2g

　　硫代硫酸钠　　　　0.3g

　　氯化钠　　　　　　5g

　　琼脂　　　　　　　12g

　　蒸馏水　　　　　　1000mL

加热溶解，校正pH，分装试管，115℃高压灭菌15min，取出直立候其凝固。

挑取琼脂培养物，沿管壁穿刺，于36±

1℃培养1～2d，观察结果。

产硫化氢者使培养基变为黑色。

肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生，应采用三糖铁琼脂或本培养基。

　　蛋白胨　　　　　　1g

　　氯化钠　　　　　　5g

　　葡萄糖　　　　　　1g

　　磷酸二氢钾　　　　2g

　　0.4%酚红溶液　　　3mL

　　琼脂　　　　　　　20g

　　20%尿素溶液　　　100mL

　　pH7.2±

0.1

将除尿素和琼脂以外的成分配好，并校正pH，加入琼脂，加热溶化并分装烧瓶。

121℃高压灭菌15min。

冷至50～55℃，加入经除菌过滤的尿素溶液。

尿素的最终浓度为2%，最终pH应为7.2±

0.1。

分装于灭菌试管内，放成斜面备用。

挑取琼脂培养物接种，在36±

1℃培养24h，观察结果。

尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色。

　　蛋白胨　　　　　10g

　　氯化钠　　　　　5g

　　磷酸二氢钾　　　0.225g

　　磷酸氢二钠　　　5.64g

　　蒸馏水　　　　　1000mL

　　0.5%氰化钾溶液　20mL

　　pH7.6

将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶，121℃高压灭菌15min。

放在冰箱内使其充分冷却。

每100mL培养基加入0.5%氰化钾溶液2.0mL（最后浓度为1∶10000），分装于12mm×

100mm灭菌试管，每管约4mL，立刻用灭菌橡皮塞塞紧，放在4℃冰箱内，至少可保存两个月。

同时，将不加氰化钾的培养基作为对照培养基，分装试管备用。

　　　1%盐酸二甲基对苯二胺溶液：

少量新鲜配制，干冰箱内避光保存。

　　　1%α-萘酚－乙醇溶液。

取白色洁净滤纸沾取菌落。

加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴，阳性者呈现粉红色，并逐渐加深；

再加α-萘酚溶液一滴，阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色。

阴性于两分钟内不变色。

以毛细吸管吸取试剂，直接滴加于菌落上，其显色反应与以上相同。

　　硝酸钾　　　　　　　　0.2g

　　蛋白　　　　　　　　　5g

　　蒸馏水　　　　　　　　1000mL

溶解，校正pH，分装试管，每管约5mL，121℃高压灭菌15min。

硝酸盐还原试剂：

　　甲液：

将对氨基苯磺酸0.8g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。

　　乙液：

将甲萘胺0.5g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。

接种后在36±

1℃培养1～4d，加入甲液和乙液各一滴，观察结果。

硝酸盐还原为亚硝酸盐时于立刻或数分钟内显红色。

本试验阴性的原因有三：

细菌不能还原硝酸盐；

亚硝酸盐继续分解，生成氨和氮；

培养基不适于细菌的生长。

如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解，可再加入锌粉少许，可使硝酸盐还原为亚硝酸盐而呈现红色。

　　1%盐酸二甲基对苯二胺溶液。

　　1%α-萘酚－乙醇溶液。

取37℃（或低于37℃）培养20h的斜面培养物一支，将两种试剂各2～3滴，从斜面上端滴下，并将斜面略加倾斜，使试剂混合液流经斜面上的培养物。

如系平板培养物，则可用试剂混合液滴在菌落上。

于2min内呈现蓝色者为阳性。

阳性培养物大多数于半分钟内出现强阳性反应，2min以后出现微弱或可疑反应均作为阴性结果。

3%过氧化氢溶液：

临用时配制。

挑取固体培养基上菌落一接种环，置于洁净试管内，滴加3%过氧化氢溶液2mL，观察结果。

于半分钟内发生气泡者为阳性，不发生气泡者为阴性。

2%儿茶酚溶液。

　　3%过氧化氢溶液。

挑取固体培养基上菌落一接种环，置于洁净试管内，滴加2%儿茶酚溶液1mL及3%过氧化氢溶液1mL。

静置于室温（20℃）中30～60min，观察结果。

阳性反应，细菌变为黑褐色；

阴性反应，细菌不变色。

过氧化物酶的作用可受氰化钾的抑制。

储存液

　　磷酸二氢钾　　　　　　　　34g

　　1mol/L氢氧化钠溶液　　　　175mL

　　蒸馏水　　　　　　　　　　825mL

　　pH7.2　　

先将磷酸盐溶解于500mL蒸馏水中，用1mol/L氢氧化钠溶液校正pH后，再用蒸馏水稀释至1000mL。

稀释液：

取储存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL。

分装每瓶100mL或每管10mL，121℃高压灭菌15min。

　　明胶　　　　　　　　　2g

　　磷酸氢二钠　　　　　　4g

　　蒸馏水　　　　　　　　1000mL

　　pH6.2

加热溶解，校正pH，121℃高压灭菌15min。

　　苯酚　　　　　　　　　10g

　　乳酸（比重1.21）　　　　10g

　　甘油　　　　　　　　　20g

　　蒸馏水　　　　　　　　10mL

将苯酚在水中加热溶解，然后加入乳酸及甘油。

用途：

检验真菌形态时用。

　　绞碎牛肉　　　　　　　500g

　　氯化钠　　　　　　　　5g

　　蛋白胨　　　　　　　　10g

　　磷酸氢二钾　　　　　　2g

将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g加蒸馏水1000mL，混合后放冰箱过夜，除去液面之浮油，隔水煮沸半小时，使肉渣完全凝结成块，用绒布过滤，并挤压收集全部滤液，加水补足原量。

加入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐，溶解后校正pH7.4～7.6煮沸并过滤，分装烧瓶，121℃高压灭菌30min。

　　肉浸液肉汤（PH7.4）　　1000mL

　　琼脂　　　　　　　　　17～20g

加热溶化琼脂，分装烧瓶或试管，121℃高压灭菌30min。

根据需要，倾注平板或放成斜面。

　　绞碎牛肉（或牛心）　　　1000g

　　15%氢氧化钠溶液　　　27mL

　　胰蛋白酶　　　　　　　40mL

　　三氯甲烷　　　　　　　1mL

　　氯化钠　　　　　　　　10g

　　蒸馏水　　　　　　　　2000mL

　　1　称取碎牛肉，加蒸馏水，隔水加热到80℃，维持15min。

　　2　加氢氧化钠溶液，对pH试纸呈弱碱性，冷至40℃。

　　3　加胰蛋白酶、氯仿，在36±

1℃放置4～5h，每小时摇动一二次。

　　4　4h后，吸取上层液5mL于试管中，加5%硫酸铜溶液0.1mL、4%氢氧化钠溶液5mL，混合之。

若呈红色，则不须再消化，可由温箱取出。

　　5　加入15%乙酸溶液45mL，对pH试纸呈酸性。

　　6　煮沸15min，使胰蛋白酶破坏，冷后，放冰箱内一夜。

　　7　次日吸取上层清液，加氯化钠10g，并加水补足原量，煮沸。

　　8　校正pH7.4～7.6（加15%氢氧化钠溶液约10mL），加热，用滤纸过滤，分装烧瓶，121℃高压灭菌20min。

①此培养基可作为琼脂培养基的基础，不需加蛋白胨。

　　②胰蛋白酶之配制：

称取去脂绞碎的猪胰500g，加入乙醇500mL、蒸馏水1500mL，混合之，装人玻塞瓶内。

每日摇匀三次。

3d后，用绒布过滤挤出其汁，加盐酸至0.05%，放冰箱内保存备用。

　　绞碎猪胃　　　　　100g

　　绞碎猪血块　　　　100g

　　浓盐酸　　　　　　10mL

　　1　洗涤猪胃，除去油脂，保留胃粘膜，用绞肉机绞碎。

　　2　用绞肉机将猪血块绞碎。

　　3　将蒸馏水加热至55℃，加入猪胃、猪血块和盐酸，置55℃水浴中24h，时常加以摇动。

　　4　从水浴内取出，加入1moL/L碳酸钠溶液5mL，煮沸10min，置于冰箱内一夜。

　　5　吸取上层清液，加磷酸氢二钾1g，加热至75℃，加入1mol/L碳酸钠溶液45mL，煮沸，校正pH7.2～7.4。

　　6　用滤纸过滤，分装烧瓶，121℃高压灭菌20min。

　　牛心消化汤（PH7.4～7.6）