羟乙基淀粉欧洲药典Word格式.docx
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取经干燥的本品5.0g，加新沸放冷的水溶解并稀释至100ml，即得。
溶液颜色：
溶液S与Ⅱ号标准液比较，不得更浓。
pH值：
取溶液S加饱和氯化钾溶液0.2ml，进行测定。
应为4.5～7.0
吸光度：
取溶液S经0.2μm滤膜滤过，在400nm处的吸光度，不得过0.025。
分子量（Mw）及分子量分布（分子筛色谱）
缓冲液配制：
取醋酸钠54.34g加冰醋酸100ml，用水稀释至1000ml，即得。
供试品储备液制备：
取本品2.0g，加水溶解并加水至50ml，加入上述缓冲液10ml，加水至100ml，即得。
对照溶液（a）制备：
如果分子量名义值在300000以下，用中等分子量的羟乙基淀粉对照品；
如果分子量名义值在300000以上，用高分子量的羟乙基淀粉对照品。
取羟乙基淀粉对照品0.4g，加水10ml溶解，加上述缓冲液2.0ml，用水稀释至20ml。
对照溶液（b）制备：
取对照溶液（a）10.0ml，用流动相稀释至20ml，即得。
对照溶液（c）制备：
取对照溶液（b）10.0ml，用流动相稀释至20ml，即得。
对照溶液（d）制备：
取对照溶液（c）10.0ml，用流动相稀释至20ml，即得。
色谱柱：
固定相：
羟基化聚甲基丙烯酸酯凝胶
分离系统用到4根色谱柱
柱长
内径
粒度
孔径
0.30
7.5
17
10
>
100
20
12.5
流动相：
取上述缓冲液加水稀释至1000ml，即得。
流速：
0.5～1.0ml/min
检测器：
连接有恒温折光仪的倍角激光散射检测器
进样量：
50μl
如何选择合适的供试品浓度：
取对照品溶液（a）和（b）进样，如果通过对照品溶液（b）测得的平均分子量不超过经对照品溶液（a）测得的平均分子量的3.%，就选择对照品溶液（a）进行系统适用性试验。
如果超过3.0%，取对照品溶液（c）进样，如果通过对照品溶液（c）测得的平均分子量不超过经对照品溶液（b）测得的平均分子量的3.%，就选择对照品溶液（b）进行系统适用性试验。
如果超过3.0%，取对照品溶液（d）进样，如果通过对照品溶液（d）测得的平均分子量不超过经对照品溶液（c）测得的平均分子量的3.%，就选择对照品溶液（c）进行系统适用性试验。
系统适用性试验
平均分子量：
不超过羟乙基淀粉对照品标示量的5%
如有需要，可稀释供试品储备液，使浓度与系统适应性试验所用的对照品溶液的浓度相近。
选择合适的积分方法计算平均分子量，及10%最低值和10%最大值的质量分率。
低分子量（2000～100000）
中分子量（100000～300000）
高分子量（300000～900000）
测得的分子量=分子量名义值±
15%
10%最低分率>
10%分子量名义值
15000
10%最高分率<
300%分子量名义值
500%分子量名义值
C2/C6比率（气相色谱法）
溶液A：
取等体积的稀硫酸与水混合均匀，即得。
供试品溶液制备：
取本品0.18g，置5ml量瓶中，加溶液A3.0ml，闭塞，密封，振摇使溶解，100℃加热4小时，并时时振摇，冷却至室温，加碳酸钡0.9g，轻轻振摇，9000g离心15分钟，用pH试纸检查上清液pH值，如溶液仍显酸性，再取碳酸钡0.2g，分次加入，直至溶液显中性，用0.45μm滤膜滤过，取滤液0.5ml置自动进样瓶中，40℃蒸干，残渣加嘧啶0.5ml，N,O-2（三甲基硅烷基）乙酰胺0.25ml，和三甲基氯硅烷25μl，密封，40℃加热1小时，并时时振摇。
冷却至室温，每瓶进样3次。
同时制备双份样品。
对照品溶液制备：
取中分子量的羟乙基淀粉对照品，同法制备，即得。
规格：
长15m直径0.32mm
聚（乙烷）硅氧烷（膜厚0.25μm）
载气：
氢气（69kPa）分流比：
1:
20
温度：
时间（min）
温度（℃）
柱
进样口
检测器
0～1
1～25
25～28
150
150→270
270
250
300
FID进样量：
1μl
峰检出：
通过对照品溶液色谱图检出以下物质：
衍生物1、衍生物2、衍生物3、2-O-羟乙基-α-D-葡萄糖、6-O-羟乙基-α-D-葡萄糖、2-O-羟乙基-β-D-葡萄糖和6-O-羟乙基-β-D-葡萄糖。
系统适用性试验：
对照品溶液进样
分离度：
2-O-羟乙基-β-D-葡萄糖和6-O-羟乙基-β-D-葡萄糖分离度应不小于1.5。
对称因子：
衍生物1峰的对称因子应为0.6～1.5
重复性：
衍生物1连续进样3次，峰面积RSD不得过5.0%
C2/C6比率计算公式：
A1=衍生物1峰面积A2=衍生物2峰面积A3=衍生物3峰面积
A4=2-O-羟乙基-α-D-葡萄糖峰面积A5=2-O-羟乙基-β-D-葡萄糖峰面积
A6=6-O-羟乙基-α-D-葡萄糖峰面积A7=6-O-羟乙基-β-D-葡萄糖峰面积
测定两个供试品，求其平均值。
（两个供试品求出的比率值相对平均偏差不得过5.0%）
限度：
不得过名义值的20%
取代基摩尔数（MS）（气相色谱法）
羟乙基取代基的含量应在氢碘酸水解和碘乙烷羟乙基化完成后测定。
内标溶液制备：
取甲苯1.0ml，加二甲苯稀释至200ml，即得。
供试品溶液：
取本品50.0mg，置5ml量瓶中，加入己二酸0.10～0.15g，加入内标溶液1.0ml，氢碘酸2.0ml，闭塞，用开有圆孔的铝盖密封，同时制备5个样品。
取5ml量瓶7个，各加入己二酸0.10～0.15g，加入内标溶液1.0ml，氢碘酸2.0ml，闭塞，用开有圆孔的铝盖密封，用感量为0.01mg的天平称定重量。
用100μl注射器，刺破瓶塞，分别加入碘乙烷10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、60mg和70mg，再称定重量，计算出加入碘乙烷的量。
150℃加热10小时，放冷，称定重量，精确到1mg，去除减失重量超过5mg的样品，取供试品4瓶，对照品5瓶分别量取溶液上层各100μl，置自动进样瓶中，加二甲苯1.0ml稀释，立即密封，轻轻振摇。
材质：
熔融石英
规格：
长30m直径：
0.53mm
聚[（键和硅胶）（苯基）][乙烷]硅氧烷（膜厚3μm）
氦气流速：
8ml/min分流比：
0～4
4～16
16～20
50
50→230
230
200
280
FID
1μl；
每个样品进样2次
出峰顺序：
碘乙烷、甲苯
碘乙烷和甲苯应不小于1.5
计算每张色谱图中，碘乙烷和内标的峰面积的比值。
求出对照品溶液碘甲烷加入量（mg）和峰面积的线性回归方程，相关系数不得低于0.990。
通过如下公式计算供试品中碘乙烷的含量（mg）：
A=供试品溶液中碘甲烷和内标的峰面积的比值
B=回归曲线的y轴截距M=回归曲线的斜率
通过下面公式计算环氧乙烷的百分含量：
m=供试品取样量（mg）44.05=环氧乙烷分子量155.97=碘乙烷分子量
通过下面公式计算取代基摩尔数（MS）：
162.14=无水葡萄糖分子量44.05=环氧乙烷分子量
通过4个供试品样品计算取代基摩尔数（MS）的平均值
应为0.05～2.4，且小于名义值的8.0%
乙二醇（液相色谱法）
取经干燥后的本品1.0g，加水溶解并稀释至50ml，即得。
取乙二醇0.800g，加水稀释至100ml，精密量取2.0ml稀释至200ml，混匀，精密量取2.0ml稀释至200ml，即得。
预柱：
长0.01m直径4.0mm
十八烷基键合硅胶（5μm）
长0.25m直径：
4.6mm
柱温：
30℃流动相：
水流速：
1.0ml/min
洗柱溶液：
取2mol/L氢氧化钠溶液750ml加水稀释至1000ml。
洗柱溶液流速：
0.2ml/min
脉冲电流计检测器
20μl
运行时间：
乙二醇保留时间的2.5倍保留时间：
乙二醇=约4分钟
信噪比：
以主峰计，不得小于10
连续6次进样的RSD不得大于10.0%
最多完成8次进样，用以下程序冲柱一次
冲洗液：
乙腈-水（20:
80V/V）
流动相（%）
冲洗液（%）
0～15
15～20
20～25
25～30
30～100
75
75→0
0→100
25
25→100
100→0
乙二醇：
不得大于对照品溶液中乙二醇的峰面积（40ppm）
2-氯乙醇（气相色谱法）
混合溶剂：
甲醇-乙腈（25:
75V/V）
取2,6-二甲基苯胺0.250g加混合溶剂溶解并稀释至50ml，取0.5ml加混合溶剂稀释至50ml，即得。
取本品1.0g，置20ml量瓶中，加混合溶剂10.0ml，超声处理3.5小时，冷却至室温，取1.0ml，加内标溶液0.8ml，即得。
取2-氯乙醇0.250g，加水稀释至50ml，取1.0ml加水稀释至100ml，再取1.0ml加水稀释至100ml，混匀，取1.0ml，加内标溶液0.8ml，即得。
长10ml直径0.53mm
活化聚乙二醇
长30m直径0.32mm
聚乙二醇20000（膜厚0.25μm）
氢气流速：
2.9ml/min
分流比：
执行以下程序
分流/不分流
分流比
初始
0.01
0.5
on
off
4～23.5
23.5～28.5
45
45→240
240
1μl
以2-氯乙醇峰计，不得小于10
2-氯乙醇：
供试品溶液中2-氯乙醇峰面积与内标峰面积的比值不得大于对照品溶液中2-氯乙醇峰面积与内标峰面积的比值。
（5ppm）
环氧乙烷（顶空-气相色谱法）
取本品1.0g置顶空瓶中，加水1.0ml溶解，密封，即得。
对照品储备液制备：
取水80ml，置100ml量瓶中，4℃放置至少30min。
加入环氧乙烷1.0g，精密称定加入环氧乙烷的量，加水至100ml，冰箱中储存，4周内可用。
对照品溶液（a）制备：
取对照品储备液1.0ml，加水稀释至100ml，摇匀，取1.0ml加水稀释至100ml，即得，24小时内可用。
对照品溶液（b）制备：
取本品1.0g，加对照品溶液（a）1.0ml，密封，即得。
石英规格：
聚（键合硅胶）（苯基）（二甲基）硅氧烷（膜厚1.5μm）
氦气（110.3kPa）分流比：
35
顶空条件：
平衡温度：
80℃平衡时间：
40min
传输线温度：
150℃充压时间：
2.0min进样时间：
3s
0～20
20～30
30～40
40
40→240
140
选择供试品和对照品溶液（b）合适的进样体积
以对照品溶液（b）中环氧乙烷峰计不得小于10
环氧乙烷：
供试品溶液中环氧乙烷峰面积不得大于对照品溶液（b）中环氧乙烷峰面积的0.5倍。
（1ppm）
氯化钠不得过0.1%
取本品10.0g置250ml锥形瓶中，加水100ml溶解，加稀硝酸2ml，9g/L氯化钠溶液5.0ml，混匀，即得。
在250ml锥形瓶中，加水100ml，加稀硝酸2ml，9g/L氯化钠溶液5.0ml，混匀，即得。
电位滴定：
0.1mol/L硝酸银滴定液
通过下面公式计算氯化钠百分含量：
n1=供试品溶液消耗0.1mol/L硝酸银滴定液的体积（ml）
n2=对照品溶液消耗0.1mol/L硝酸银滴定液的体积（ml）
m=供试品取样量
重金属不得过10ppm
取本品2g，加水溶解并稀释至20ml，取12ml进行试验。
取标准铅试液（1ppmPb）制备对照溶液。
干燥失重不得过15.0%
取本品1.000g，105℃下干燥。
细菌内毒素不得过2.5IU/g
微生物限度总需氧微生物数：
验收准则102CFU/g
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