蛋白激酶B的特性及其生物学功能Word格式.docx

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Ptdlns-3，4-P2磷酸酞肌醇2磷酸）等结合时，这种抑制作用则丧失[6]。

二、PKB/Akt的活化一、PKB/Akt的结构已发现PKB/Akt有三种亚型，即PKBa（C-Aktl）,PK印（GAkt2）和PKBy（GAkt3），它们之间的同源性高达82%，在人体组织中广泛表达。

与PKBa和PKBp相比，PKBy在C端缺少23个氨基酸，具有组织特异性。

在这三种亚型中，对PKBa的研究较多，编码人PKBa基因位于染色体14够2上〔4]。

PKB/Akt家族蛋白分子为单链结构，由3个结构域组成:

第1一147氨基酸构成N端调节区（AHdomain），其中1一106氨基酸组成PH区（pleckstrinhomologousdomain），主要功能是将PKB/Akt定位在细胞膜;

第148一411氨基酸构成中间的激酶区，其内包含一个保守的苏氨酸位点（1hr308/1'

hr309/Thr305），该位点的磷酸化是PKB/Akt活化所必需的;

第412一480氨基酸构成C末端调节区，富含疏水氨基酸和脯氨酸，可以和SH3（sr。

同源序列3）区结合，除PKBy外，Pr-115a和PK印在这个区域均有PKB/Akt可以被许多生长因子如PDGF,EGF,IGF-1和bFGF等和细胞因子如TNF,IL-1等激活，主要是通过PI3K（phosphatidylinositol3-kinase，磷脂酞肌醇三磷酸激酶）途径。

PKB/Akt是P13K下游的一个靶位点，经P13K磷酸化后具有活性，PKB/Akt的活化过程可以被P13K抑制剂如wort-mannin和LY294002特异性地抑制[7,810RTK（receptortyrosinekinase）自体磷酸化后，PI3K通过P85亚单位的SH2（sr。

同源序列2）和磷酸化的酪氨酸残基相互作用，引起自身P110亚单位活性的变构调节而被激活〔，此时P110可以催化膜上的磷脂酸肌醇4,5一双磷酸D3位点磷酸化，产生PIP31"

l，再通过5一磷酸化酶水解将部分PIPS脱磷酸化为PIP2aPIP3和PIP2均为细胞内的第二信使，正常情况下在细胞内含量较少，但在生长因子刺激下含量剧增，并为具有PH区的脂类结合蛋白激酶结合到膜上提供必要的位点。

PKB/Akt通过PIPS和PIP2的介导转移到膜上，并改变结构以暴露T-Loop区内的Thr308位点[PDK1（3-phosphoinositide-dependentproteinki-nase，也称PDK或PKBK）为脂类结合蛋白激酶，具有PH区，也由PIP3和PIP2介导而结合到细胞膜上[l3l。

当PKB/Akt的Thr308位点被PDK1磷酸化和c末端调节区的Ser473位点被PDK2磷酸化后，PKB/Akt则具有活性。

最近发现PDK1和‘教育部访问学者专项基金（2001年度）资助。

*长怪补联系人。

细胞生物学杂志2002年PDK2两种酶之间是相互关联的。

PDKI通过和来源于PRK2（proteinkinaseGrelatedkinase-2）C末端的PIF（PDKl-internactingfragment）相互作用，激活其特异性底物，继而转化为能在PKB/Akt的Ser473位点上磷酸化PKB/Akt的PDK2，因此PDK2实质上是PDK1和PIF的复合物，PRK2则可能是PDK1的底物〔，‘〕。

IP3（inositoltrisphosphate）在细胞膜上将含有PH区的蛋白卸载，使PKB/Akt活化并从细胞膜上脱离，后者再磷酸化其下游靶位点。

活化的PKB/Akt在蛋白磷酸酶2A（PP2A）的去磷酸化作用下则失活[[31。

另外，已活化的R-Ras和Ras突变体也可以通过PI3K途径激活PKB/Akt，例如，Ha-Ras介导的小肠上皮细胞转化就是通过P13K途径激活PKB/Akt'

151。

三、PKB/Akt的生物学功能

1.参与糖元和蛋白合成等代谢过程众所周知，胰岛素能够引发一系列生物学反应，现已证实许多反应均是通过PI3K调节的，其中包括葡萄糖运输，糖原合成和蛋白质合成，而PKB/Akt则作为关键激酶起着重要作用。

PKB/Akt磷酸化的作用底物是糖原合成激酶3（glycogensyn-theseskinase3,GSK3），该酶可以磷酸化糖原合成酶使其失活，从而抑制糖原合成。

而当GSK3的Ser位点被PKB/Akt磷酸化后，GSK3失活，由此不能磷酸化糖原合成酶，使得糖原合成酶依旧保持活性而刺激糖原的合成，这也是胰岛素作用机制之一[[161。

另外，PKB/Akt引起的GSK3失活也参与了蛋白合成，并具有加强作用。

Tor（rapamycin靶位点）可能是PKB/Akt下游作用位点，它可以磷酸化转录起始因子4E（elf-4E）一结合蛋白（4E-BPI），使其从eIF4E上分离下来，从而增强mRNA转录，促进蛋白合成[17,18）0原来认为p70`6'

（p70ribosomalproteinS6ki-ruses）也是PKB/Akt下游的作用位点之一，可以磷酸化线粒体蛋白S6,PKB/Akt通过加强p70S6k表达水平促进蛋白合成〔’”〕。

然而，最新研究否认了这一观点，而是将p70'

“和PKB/Akt并列为III-）A的作用底物，但其磷酸化机制比PKB/Akt更为复杂，涉及到许多磷酸化位点[20l0

2。

促进细胞存活、抑制细胞凋亡

（1）促进细胞存活，尤其是神经元一些生长因子通过PI3K/Akt途径阻止神经元进人死亡进程，从而促进神经元的存活〔i7,201。

例如在海马神经元中，PKB/Akt通过PI3K途径被激活后，抑制转录因子P53的活性，进而抑制海马神经元在缺氧和一氧化氮条件下发生的细胞死亡，由此促进神经元的存活[（211。

在小脑神经元发生过程中，通过P13K途径激活的PKB/Akt在介导IGF-1作用于小脑神经元存活时也发挥了关键作用〔227。

因此PKB/Akt在介导各种生长因子促进神经元存活、抑制神经元溃变过程中具有重要的媒介作用。

（2）参与细胞凋亡调控近年来的研究表明PI3K-PKB/Akt参与一些细胞的凋亡调节，主要是抑制细胞凋亡活动。

PKB/Akt主要通过作用于下列几种底物而抑制细胞凋亡，这些底物包括Bad,caspase9,FKHR（transcriptionfactorsoftheforkheadfamily）和IKK激酶等。

Bad是Bcl-2家族成员之一，正常状态下被磷酸化并与Bcl-XL结合，使Bcl-XL去磷酸化而失活，由此导致细胞凋亡。

当生长因子作用于细胞后，导致Bad两个位点（Ser-112和Ser-136）中的任何一个位点磷酸化，由此促使Bad从Bcl-XL脱离，而与细胞质内14一3一3蛋白（一种调节器蛋白，以磷酸化形式和许多信号分子相互作用）结合，结合后的Bad去磷酸化作用被抑制或者从线粒体上的靶位点分开，从而抑制细胞凋亡，促进细胞生长。

PKB/Akt则主要作用于Bad的Ser-136位点上[24,25]0恍冬肤酶（caspase）是一类细胞内蛋白酶，作为细胞凋亡的启动者和效应器起作用。

许多刺激细胞凋亡的信号可以诱导细胞色素C从线粒体释放到细胞质中，继而激活Apaf-1和胧冬肤酶9（caspase-9）。

活化的胧冬肤酶（caspase-9）直接和胧冬肤酶3（caspase-3）结合，激活后者引发其他一系列的胧冬肤酶（caspases）级联反应。

PKB/Akt则磷酸化。

as-pase-9而导致其失活，从而抑制细胞凋亡、促进细胞生长[26]0Forkhead家族成员（如FKHR,FKHRI_和AFX）在正常情况下从细胞质进人到细胞核，并且和细胞内特定的DNA元件结合，启动基因表达。

PKB/Akt磷酸化Forkhead家族成员，使其被阻止在细胞质中，无法进人细胞核，不能启动凋亡基因，从而抑制细胞凋亡、促进细胞生长〔27]0INF-ICB转录因子可以诱导细胞核内一些促进生长的基因活化，这些基因包括bcl-2家族中的Bfl-1/Al,胧冬肤酶（Caspase）家族成员等。

正常状态下，NF-KB转录因子被NF-KB抑制酶（IB家族）阻断第24卷第4期细胞生物学杂志在核外而不能作用于核内的相关基因位点。

PKB/Akt就是通过和IicK（一种磷酸化NF-icB抑制酶的激酶）的直接作用而磷酸化NF-icB抑制酶，使其降解失去活性，从而有利NF-icB转录因子的释放并进人核内作用于相关的生长基因，促进细胞生长。

现已发现PKB/Akt磷酸化IrcK的位点是Thr23[171oPKB/Akt是细胞存活信号通路中的关键调节者，通过调节FKHR家族和NF-icB阻断细胞凋亡，通过磷酸化Bad和caspase-9使其失活而阻断细胞凋亡。

另外，还存在其他PKB/Akt的靶位点，例如NOS（NO合成酶）、端粒酶telomerase等。

目前已知在一定条件下活化PKB/Akt是细胞存活所必需的，而且通过调节PKB/Akt，许多在其上游的原癌基因和肿瘤抑制基因也都会直接影响肿瘤发展进程。

3.在免疫细胞中的作用PI3K的活化和PIP3的产生是BCR（B细胞受体）介导信号途径的关键，而PKB/Akt位于PI3K的下游，因此反馈调节PI3K途径可认为是下调B细胞反应的一种机制〔291。

另一方面免疫细胞也部分调节PKB/Akt活性，如SHIP（SH2domain-con-taininginositolphosphatase）可以裂解PIP3产生PIP2，从而激活PKB/Akt途径，引发免疫反应;

但如果SHIP和FcRIIBl-Fc受体结合，就会导致PKB/Akt活性被抑制〔gal。

同时由于PKB/Akt基因位点与免疫球蛋白重链位点相接近，推测可能与白血病和淋巴肿瘤等的发生机制相关[1,41。

最近研究表明，Nur77是T细胞抗原受体介导细胞凋亡所必需的，PKB/Akt通过磷酸化Nur77的Ser350位点使其失活，从而抑制细胞凋亡。

所以PKB/Akt和PI3K在免疫系统中起着负调节作用[[2910四、PKB/Akt研究的主要方向1.PKB/Akt在正常细胞糖代谢中的作用机制尽管已经证实PKB/Akt能够促进葡萄糖吸收和蛋白合成，但并不是在所有细胞中PKB/Akt均能够诱导糖原合成。

现已发现在3T3L-1脂肪细胞中PKB/Akt不能诱导糖原合成[30J，因此有必要对PKB/Akt诱导细胞内糖代谢改变的机制进行深人研究。

2.PKB/Akt抗凋亡的作用机制尽管已经发现PKB/Akt抑制凋亡过程中的几种底物，但并不仅仅局限于此，还存在其他的PKB/AM抗凋亡作用位点[[3iJ。

另一方面，由于PKB/Akt具有促进生长因子诱导细胞存活和抑制细胞凋亡的作用，许多学者开始关注其在肿瘤治疗中所起的作用。

例如已发现在卵巢癌细胞中，PKB/Akt2表达水平较高〔32]，并且当PKB/Aktl基因过度表达或者PKB/Akt2基因表达增强时，其抑制抗化疗药物诱导的细胞凋亡能力比低水平表达PKB/Aktl或PKB/Akt2的肿瘤细胞更强[[33]oPTEN通过抑制P13K/Akt而抑制肿瘤形成〔341，有趣的是在PTEN十/杂合小鼠中又观察到上皮发育不良和直肠癌发生的比例较高，推测PKB/Akt活性在结肠直肠癌发生中可能起重要作用[[35,36]0

3.与其他信号通路的交联（cross-talk）PKB/Akt位于许多信号通路的交界处，通过生长因子受体激活的P13K起作用[f371。

现已发现PKB/Akt激活途径不仅与细胞因子、生长因子等刺激有关，还受Ras受体、cAMP等调节。

例如cAMP对PKB/Akt的调节作用主要是通过阻断PKB/Akt与其上游PDK（phosphoinositide-dependentkinase）连接而抑制PKB/Akt作用〔37]。

另外，cAMP有效地抑制PKB/Akt的Thr和Ser位点磷酸化而抑制PKB/Akt作用，通过抑制PDK转运到细胞膜上而负调控PDK活性，还可以抑制P13K活性，降低体内P13P活性等等，由此形成复杂的交联。

另一方面，PKB/Akt位于Ras下游，其通过直接磷酸化Ras途径中Raf的Ser259位点，为14一3一3蛋白提供结合位点，抑制Raf作用，从而在Raf-MEK-ERK和PI3K-PKB/Akt途径之间形成交联，而且已证明PI3K-PKB/Akt的活化在哺乳类细胞RAS介导的转化、猫附、细胞存活以及由RAS诱导的细胞骨架重新形成中起到至关重要的作用〔38]0

摘要PKB/Akt是一种作用特殊的蛋白激酶，在细胞因子、生长因子的作用下，通过PI3K途径被激活，在细胞代谢、生长调节和抑制细胞凋亡等生物活动过程中起着重要的调节作用，有效地将胞外存活因子与胞内生长、代谢和凋亡机制的相关性有机地联系起来，并且和Ras,G蛋白、PKA以及PKC等也有复杂的交联（cross-talk）。

因此，通过对PKB/Akt的深人研究，尤其在抑制细胞凋亡、促进细胞存活意义的阐明，对于应用PKB/Akt作用靶点治疗疾病将会有着长远的、广泛的前景。

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