整理保健食品中大豆异黄酮的检验方法Word格式文档下载.docx
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名称次数
1
2
3
4
5
6
平均值
RSD（%）
大豆苷
13.377
13.350
13.332
13.374
13.373
13.300
13.35
0.23
黄豆苷
14.271
14.242
14.237
14.275
14.277
14.201
14.25
0.21
染料木苷
19.901
19.823
19.801
19.890
19.796
19.85
0.26
大豆黄素
32.021
31.951
31.932
32.072
32.082
31.022
31.85
1.28
黄豆黄素
33.336
33.303
33.292
33.362
33.382
33.275
33.33
0.13
染料木素
43.739
43.524
43.507
43.815
43.822
43.497
43.65
0.36
4.1.2检测波长的选择：
3）迁移。
对以大豆苷、黄豆苷、染料木苷、大豆黄素、黄豆黄素和染料木素进行波长扫描，波长范围：
220nm～450nm，光谱图见附页1。
5.建设项目环境影响评价文件的重新报批和重新审核通过光谱图比较，这六种物质在260nm有最大吸收，因此选定260nm作为检测波长。
规划编制单位对可能造成不良环境影响并直接涉及公众环境权益的专项规划，应当在规划草案报送审批前，采取调查问卷、座谈会、论证会、听证会等形式，公开征求有关单位、专家和公众对环境影响报告书的意见。
4.1.3标准工作曲线和线性范围
配制不同浓度的标准使用液在上述色谱条件下进行HPLC测定。
线性方程和相关系数
（3）总经济价值的组成。
我们可以用下式表示环境总经济价值的组成：
见表2和附页2。
规划环境影响的跟踪评价应当包括下列内容：
（1）资质等级。
评价机构的环评资质分为甲、乙两个等级。
环评证书在全国范围内使用，有效期为4年。
规划审批机关在审批专项规划草案时，应当将环境影响报告书结论以及审查意见作为决策的重要依据。
（4）环境保护验收。
表格2标准曲线数据列表
样品名称
（2）区域、流域、海域的建设、开发利用规划。
环境影响篇章或说明浓度（μg/mL）
（2）评价范围。
根据评价机构专业特长和工作能力，确定其相应的评价范围。
峰面积
线性方程
相关系数
0.2095
8.6
Y=38.20869X+4.01024
0.99999
2.0950
82.9
10.4750
408.0
41.9000
1619.7
83.8000
3192.0
125.7000
4810.9
0.1990
7.5
Y=34.74200X+2.31309
1.9900
72.9
9.9500
350.9
39.8000
1391.8
79.6000
2754.0
119.4000
4157.2
0.2075
12.2
Y=55.50528X+5.77594
2.0750
121.0
10.3750
589.4
41.5000
2323.6
83.0000
4595.3
124.5000
6922.3
0.2015
12.8
Y=59.71839X+6.17333
2.0150
123.4
10.0750
619.6
40.3000
2428.5
80.6000
4799.7
120.9000
7233.2
0.1995
10.8
Y=43.30426X+8.17645
1.9950
110.4
9.9750
441.5
39.9000
1736.3
79.8000
3455.3
119.7000
5196.9
0.2020
16.6
Y=78.92797X+6.06900
2.0200
167.0
10.1000
812.5
40.4000
3212.7
80.8000
6352.1
121.2000
9586.3
由表2可知，本方法的标准工作曲线线性范围较宽，0~120μg/mL线性良好。
4.2样品处理
4.2.1提取溶剂的选择
大豆异黄酮难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯等有机溶剂，参照国内外相关资料，选择了80%甲醇提取保健食品中的大豆异黄酮成分，80%的甲醇提取的样品色谱图见附页3。
保健食品片剂和粉末一般以淀粉和糊精作为填充剂，80%的甲醇能够使淀粉和糊精沉淀，另外能够有效提取大豆异黄酮成分；
软胶囊含油脂，用80%的甲醇作为萃取剂，一方面大大降低了油脂的溶解度，延长色谱柱的使用寿命，也可以有效提取大豆异黄酮。
保健饮料中的大豆异黄酮可溶于水，可以直接用80%甲醇提取。
4.2.2超声时间的选择
保健食品中组分复杂，含有淀粉、糊精、油脂、蛋白等各种成分，能够包容大豆异黄酮有效成分，通过超声萃取能够快速有效的提取。
本实验选择0min，10min，20min，30min，40min进行超声处理。
结果见图1。
图1超声时间对提取效果的影响
从上图可以看出，超声时间对软胶囊提取影响较明显，超声波能够使软胶囊中油状物破乳，大豆异黄酮成分能够更加快速被甲醇萃取出来，但是随着超声时间的延长，提取量没有明显增加，选定超声时间为20min。
硬胶囊（粉剂），粉剂为粉末状物质，它能够较好的分散于80%的甲醇中，使得其中的大豆异黄酮组分比较容易被提取，所以超声20min已能够完全提取。
4.3本方法的检出限
本方法的检出限：
进样量为10μL时，大豆苷（daidzin）、黄豆苷（glycitin）和染料木苷（genistin）、大豆黄素（daidein）、黄豆黄素（glycitein）和染料木素（genistein）的最低检出浓度均为：
0.02μg/mL，最低检出量如下:
以大豆异黄酮为主要功能性成分的片剂、胶囊及大豆异黄酮粉末0.005mg/g,口服液的最低检出量为:
0.0002mg/mL，保健饮料最低检出量为:
0.0002mg/mL。
4.4本方法的重复性和精密度
按照本方法，选择五种代表性的大豆异黄酮保健食品进行日内重复性测定，结果表明本方法精密度好，准确度高，操作简便，适合推广应用。
部分结果见下表。
表中，以大豆异黄酮总量计mg/g，饮料的单位为μg/mL。
表格3日内重复性
单位：
mg/g
次数
名称
胶囊
56.28
60.35
58.90
59.22
58.68
59.78
58.87
2.4
粉末
104.71
105.37
105.79
107.72
103.43
106.64
105.61
1.4
片剂
35.17
34.76
33.95
33.74
33.04
34.27
34.16
2.2
饮料
107.58
107.31
107.90
106.38
104.92
105.91
106.67
1.1
表格4样品中六种大豆异黄酮成分的重复性
次数名称
32.99
32.38
33.34
33.89
33.14
32.92
33.11
1.5
13.72
13.46
14.00
13.49
13.78
13.70
7.83
7.73
7.91
8.03
7.92
7.81
7.87
1.78
1.71
1.77
1.79
1.76
1.8
0.84
0.82
0.86
1.6
1.83
1.84
1.82
0.3
通过表4可以看出，六种大豆异黄酮日内重复性较好，精密度较高。
按照本检验方法对样品进行日间重复性测定：
间隔两天，共测定三次，部分实验结果见表5
表格5日间重复性
名称
33.69
32.18
33.36
33.08
13.23
13.89
13.71
3.1
8.01
7.70
7.88
2.0
1.70
2.8
0.85
1.9
1.85
4.5本方法的准确度
按照本检验方法对样品饮料、片剂、胶囊、口服液的加标回收实验，回收率见表6。
表格6饮料（空白）加标回收
实际测定均值（μg/mL）
加标量（μg/mL）
平均回收率（%）
1.94
2.04
95
10.10
10.20
99
19.70
20.40
97
2.12
2.16
98
10.60
10.80
21.10
21.60
1.60
1.55
103
7.96
7.75
15.60
15.50
101
2.59
100
12.70
12.95
25.70
25.90
1.87
96
9.59
9.35
18.90
18.70
2.07
2.00
104
9.80
10.00
20.70
20.00
表格7片剂（空白）加标
实际测定均值（mg/g）
加标量（mg/g）
0.250
0.255
0.970
1.020
0.270
1.060
1.080
0.200
0.193
0.795
0.772
0.333
0.313
106
1.340
1.295
0.228
0.235
0.930
0.940
1.030
1.000
表格8胶囊加标回收
实际测定值（mg/g）
样品本底值（mg/g）
回收率（%）
43.25
35.65
7.65
48.93
12.75
66.88
30.6
102
22.43
14.23
8.10
28.48
13.5
47.53
32.4
染料
木苷
14.15
8.30
5.78
18.20
9.63
32.43
23.3
大豆
黄素
2.87
1.88
0.97
4.12
2.27
6.35
4.54
黄豆
1.56
0.88
0.7
2.47
1.64
4.03
3.27
木素
2.72
1.97
0.75
3.60
1.74
94
5.45
3.48
表格9口服液加标回收
实际测定值（mg/mL）
样品本底（mg/mL）
加标（mg/mL）
0.934
0.616
0.306
1.222
0.612
1.224
0.456
0.119
0.324
0.770
0.648
1.440
1.296
0.775
0.533
0.233
0.992
0.466
1.490
0.932
0.0427
0.024
0.0182
0.0487
0.0259
0.0772
0.0519
0.0267
0.0132
0.0131
0.0312
0.0187
0.0484
0.0374
0.0243
0.0108
0.014
0.0302
0.020
0.0515
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