第五章 干细胞工程Word文档格式.docx
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专能干细胞：
多能干细胞进一步分化成具有专门功能细胞的干细胞。
造血干细胞、皮肤干细胞、神经干细胞等。
专能干细胞又分化为定向干细胞，如：
造血干细胞可分化为红细胞系定向干细胞、粒细胞系定向干细胞……
胚胎生殖细胞（embryonicgermcell,EGcell）：
来自于早期胚胎（5-10周）胎儿生殖嵴的原生殖细胞，也属于全能干细胞。
但与胚胎干细胞在特征上并不相同。
成体干细胞（somatic）：
出现在已特化的组织中的未分化或未特化的细胞，能够自我更新，并且产生它来源的所有特化类型的组织细胞，通常成体干细胞分裂产生祖细胞，后者分化成熟为组织细胞。
可塑性（plasticity）：
一种组织类型的干细胞转化为另一种组织类型的细胞的能力。
畸胎瘤细胞（embryoniccarcinomacell,ECcell）：
源于胚胎组织，保留胚胎组织特点的肿瘤。
祖细胞（progenitorcell）：
存在于胎儿或成体组织中，部分地特化化，分裂产生继续分裂的祖细胞或分化的细胞。
二、干细胞的分类
按分化潜能大小来分类:
全能干细胞（Totipotentstemcell）：
它具有形成完整个体的分化潜能。
如受精卵，胚胎干细胞。
多能干细胞（pluripotentstemcell）：
具有分化出多种组织细胞的潜能，但却失去了发育成完整个体的能力，发育潜能受到一定的限制。
如骨髓多能造血干细胞是典型的例子，它可分化出至少十二种血细胞。
专能干细胞（multipotentstemcell），
这类干细胞只能向一种类型或密切相关的两种类型的细胞分化，如上皮组织基底层干细胞、肌肉中的成肌细胞等。
根据来源来分:
来源于胚胎---胚胎干细胞ESC
（EmbryonicStemCell）
胚胎性生殖细胞EGC
（EmbryonicGermCell）
来源于成体---成体干细胞ASC
（Adult-derivedStemCell）
根据干细胞组织发生的名称进行分类:
胎胎干细胞
造血干细胞
骨髓间质干细胞
肌肉干细胞
成骨干细胞
内胚层干细胞
视网膜干细胞
胰腺干细胞
三、胚胎干细胞
1、来源：
（1）发育良好的囊胚，从中分离内细胞群细胞ES细胞
（2）从5-9周的胚胎生殖腺中分离出人的EG细胞（embryonicgerminatecells）
（3）恶性胚胎肿瘤或畸胎瘤细胞（embryonalcarcinoma,EC）
（4）生殖克隆（治疗性克隆）：
体细胞核转移（SCNT）
2、胚胎干细胞的分离
酶消化
免疫方法去除滋养层细胞
流式细胞仪分离法
3、培养条件：
（1）特殊的培养液：
用DMEM培养液，其中胎牛血清的浓度和质量很重要，还要加非必须氨基酸；
β-巯基乙醇。
（2）以人或胚鼠的成纤维细胞为饲养细胞。
（3）必须加入LIF，抑制细胞分化。
4、胚胎干细胞诱导分化
（1）加入诱导细胞分化的因子或化学物质，如VGEF、bFGF、DMSO和RA等
（2）将ES细胞与特定的细胞共培养
（3）将某种分化诱导因子的基因转入ES细胞内
5.ES细胞的全能性主要体现在以下几方面：
①形成畸胎瘤。
将ES细胞注人同源动物皮下可形成畸胎瘤，包括三个胚层细胞；
②形成类胚体。
培养ES细胞在非粘附底物中悬浮生长，或控制增殖细胞数目。
能够使之生成类胚体，它是一个与畸胎瘤相似的多种系混杂的集合体、具有三个胚层组织；
③直接分化。
通过控制ES细胞生长环境，或遗传操纵特定基因表达，ES细胞可直接分化成某特定种系细胞，例如将神经决定基因NeuroD2和NeuroD3转人ES细胞，可使之分化为神经细胞；
④形成嵌合体。
将ES细胞注射到同种动物囊胚腔中后，可以形成嵌合体（chimera），ES细胞可以参与嵌合体各个器官包括生殖腺的发育。
这是检验一个细胞系是否为ES细胞的标准。
6、ES细胞的应用前景及面临的难题
ES细胞的应用前景：
研究哺乳动物个体发生发育规律
研究细胞分化
研究基因功能
生产转基因动物
ES细胞治疗性克隆
研究细胞癌变机理及新药物的筛选
ES研究面临的难题
（1）体外培养ES细胞应当是既能快速无限增殖，又呈未分化状态。
如何平衡这一对矛盾,必须筛选适宜的培养条件。
目前在ES细胞研究中存在着建系成功率也不高等问题,只在小鼠中建立了稳定的ES细胞系，家畜、人类细胞系建立的最佳条件仍无定论。
（2）ES细胞高度未分化,具有形成畸胎瘤的可能性,因此在使用ES细胞进行治疗前必须首先体外诱导ES细胞分化产生某种特异的组织细胞或设计自杀基因,当移植的细胞向肿瘤发展时,自杀基因能启动自毁机制使其凋亡。
但如何诱导ES细胞定向分化成单一类型的分化细胞,是至今仍未解决的难题。
（3）ES细胞真正用于器官克隆与移植仍需要技术上的突破，因为器官的形成是一个非常复杂的三维过程,很多器官是两个不同胚层的组织相互作用而形成的。
即便是发育完整的来自自然机体的器官,要离体培养并维持其正常的生理功能目前还无法做到,器官的体外保存和维持仍是器官移植中的难题。
（4）最大的障碍来自于伦理学问题，特别是ES细胞应用受到伦理、法律、宗教以及社会因素的强烈反对，有些国家甚至明令禁止进行人类ES细胞研究。
无论从基础研究角度来讲还是从临床应用方面来看，人类ES细胞带给人类的益处远远大于在伦理方面可能造成的负面影响，但随着观念的改变，人们会逐渐认识到ES细胞对临床医学及生物学理论研究的重要作用。
四、成体干细胞
没有证据表明成体干细胞是多能干细胞
成体干细胞稀少，难以识别与纯化，也难以在培养条件下在未分化状态保持长时间增殖，或能够保持长时间增殖时，又不定向分化。
来源：
成体内的干细胞：
多为专能干细胞。
如造血干细胞、皮肤干细胞等。
脐带血干细胞：
新生儿脐带血内含有丰富的干细胞，可以用来进行干细胞的培养和移植。
胎盘组织：
美国新泽西州的“人类创造”生物技术公司报道他们从人胎盘中分离出干细胞。
造血干细胞作为干细胞研究与应用的突破口
1.造血细胞是细胞增殖分化的最佳模型。
2.造血干／祖细胞及各系血细胞的表面标志较为清
楚，细胞表型特征可进行定量分析，且可分选。
3.造血干细胞增殖及向各系分化的重要诱导因
子、受体、信号转导、微环境等因素较为清楚。
4.造血细胞发挥功能可相对游离，不需“生物支架”、
神经、血管、外科移植等复杂的“下游”工艺，因
此便于直接应用于临床。
五、干细胞与组织工程
组织工程是指应用工程学和生命科学的原理和方法来研究正常或病理状况下哺乳动物组织的结构、功能和生长的机制，研究开发能够修复、维持或改善损伤组织的人工生物替代物的一门学科。
组织工程化皮肤
组织工程化骨骼
组织工程化血管
组织工程化管状器官
组织工程化腺体器官
六、人类干细胞研究的应用
基础研究方面
１.研究动物胚胎的发生发育
①利用转基因技术研究动物内分泌功能的关系
②研究激素与控制生物发育基因的关系
③寻找与生长发育有关的基因
④研究细胞分化机制
⑤研究干细胞在胚胎发育过程中的功能
２.研究疾病的发生机制和发展过程
①研究肿瘤的形成过程
②建立人类遗传病研究的动物模型
③动物抗病育种
应用研究方面
1.生产克隆动物：
提高良种家畜的繁殖效率；
抢救濒危动物；
创造新物种；
实验生物学的新材料。
2.生产转基因动物：
提高畜产品产量；
生产药用蛋白；
动物抗病育种。
3.生产用于人类器官移植的动物器官：
如生产含人基因的猪，为人类提供器官移植材料，修复更换丧失功能的组织和器官。
4.用于新药的发现及筛选：
用多能干细胞定向培育出某种组织，对新药的药理、药效、毒理及药物代谢等进行研究。
5.治疗性克隆：
通过ESC定向分化，培育出皮肤、肌肉、神经、软骨等组织及至心脏、肝脏、肾脏、胰腺等器官，人体的任何器官和组织一旦出现故障，就可以象修理损坏的机器零件一样随意更换和修复。
干细胞的产业化
目前世界上干细胞产业化已起步，美国有１０家进行脐带血研究的生物企业。
法国、日本、意大利等国建立了脐血干细胞库。
协和干细胞基因工程有限公司是我国第一个国家级干细胞产业化基地。
七、有关干细胞的若干问题
1.ES细胞与EG细胞在体外增殖而不分化的机制
2.干细胞分化的内部机制
3.通用的干细胞在哪儿
4.有多少（组织）成体干细胞？
成体干细胞的可塑性？
5.怎样使干细胞定位于受损的组织或器官？
6.干细胞通常居住在什么地方？
7.是否多能干细胞必须经祖细胞才能特化为成熟细胞？
8.祖细胞是移植质量的最适当细胞？
9.为什么当周围的细胞都已经分化，而成体干细胞可以保持未分化状态？
………
作业:
1.名词解释:
全能干细胞，包括：
胚胎干细胞（embryonicstemcells,ES细胞）,早期胚胎（4-5天）胚泡中内细胞群（innercellmass,ICM），生殖干细胞（embryonicgermcells,EG细胞），具有全能性，能分化成全身200多种细胞类型，进一步形成机体的任何组织和器官。
2.干细胞的分类
它具有形成完整个
体的分化潜能。
多能干细胞（pluripotentstemcell），具有分化出多种组
织细胞的潜能，但却失去了发育成完整个体的能力，发育
潜能受到一定的限制。
如骨髓多能造血干细胞是典型的例
子，它可分化出至少十二种血细胞。
专能干细胞（multipotentstemcell），这类干细胞只能向
一种类型或密切相关的两种类型的细胞分化，如上皮组织
基底层干细胞、肌肉中的成肌细胞等。
3、人类干细胞研究的应用
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