临床检验技师微生物兼性厌氧革兰阳性杆菌及检验讲义Word文件下载.docx

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菌体染成黄褐色，颗粒染成紫黑色。

　　Albert染色：

菌体呈蓝绿色，异染颗粒蓝黑色。

培养特性

　　营养要求：

较高。

　　气体环境：

需氧或兼性厌氧。

　　温度环境：

35～37℃；

pH7.2～7.8。

　　菌落特征：

普通培养基上生长不良，形态不典型。

　　吕氏血清斜面培养基：

生长迅速，10～18h形成灰白色、湿润、S型菌落。

异染颗粒明显。

　　亚碲酸钾血琼脂：

菌落呈黑色。

　　白喉棒状杆菌——微生物检验及鉴定

标本采集：

若需培养，应在使用抗生素或其他抗菌药物前用无菌长棉拭子，从可疑的伪膜边缘采集分泌物，或采集鼻咽部或扁桃体黏膜上的分泌物。

如不能立即送检，应将标本浸于无菌生理盐水或15%甘油盐水中保存。

形态学检查：

革兰染色和异染颗粒染色（奈瑟法或阿培特法）。

镜检如见革兰阳性形态典型的棒状杆菌，在细菌的一端或两端有浓染的颗粒，和菌体着色不均匀，称为异染颗粒。

这是白喉棒状杆菌的形态学特征，对鉴别细菌有重要意义。

分离培养

生化试验

糖类发酵试验

硝酸盐还原试验

明胶液化试验

吲哚试验

尿素分解试验

分解葡萄糖、麦芽糖、果糖、半乳糖，不分解乳糖、蔗糖；

产酸不产气

+

-

毒力试验：

可作为鉴定致病菌株的重要依据。

体外法有双向琼脂扩散法、SPA协同凝集试验、对流免疫电泳；

体内法可用豚鼠作毒素中和试验。

　　白喉棒状杆菌——致病性及临床意义

致病物质

　　白喉外毒素：

抗原性强，毒性剧烈。

本菌不侵入血流，但白喉外毒素可吸收入血，引起毒血症。

所致疾病

　　白喉：

急性呼吸道传染病。

　　气管、支气管假膜：

是白喉早期死亡的主要原因。

　　心肌炎、软腭麻痹：

是白喉晚期死亡的主要原因。

　　芽胞杆菌属

G+大杆菌。

大多数菌种在有氧环境下形成芽胞。

有动力。

非抗酸性。

需氧或兼性厌氧菌，在普通培养基上生长良好。

广泛分布于自然界，绝大多数为腐生菌，许多菌种成为实验室等环境的污染菌。

少数寄生于动物或昆虫并对人类及动物致病，其中炭疽杆菌是人畜共患的重要致病菌，蜡样芽胞杆菌能致食物中毒。

　　炭疽芽胞杆菌——生物学特性

两端齐平，呈竹节状。

组织内生长呈单个或短链，试管内可形成长链。

　　大小：

致病菌中最大的革兰阳性杆菌。

　　染色：

G+。

　　无鞭毛，机体内或含血清培养基上可形成荚膜。

　　人工培养或在外界环境中易产生芽胞，形状椭圆，位于菌体中央，其直径小于菌体。

一般。

37℃，pH7.0～7.4。

可用2%兔血清肉汤增菌。

　　（血）琼脂平板：

形成灰白色、不透明、无光泽、边缘不整齐、大而扁平的粗糙型菌落，低倍镜下观察呈卷发状。

轻微溶血。

　　碳酸氢钠琼脂平板：

置5%CO2环境中37℃24h后，有毒株形成黏稠有光泽的黏液型（M型）菌落（有荚膜菌体）；

无毒株粗糙型菌落（R型）。

抗原

　　①菌体多糖抗原；

　　②荚膜多肽抗原；

　　③芽胞抗原；

　　④炭疽毒素抗原。

抵抗力

　　本菌芽胞体抵抗力很强，在干燥土壤或皮毛中常温下可存活数十年。

一般对碘及氧化剂较敏感。

　　炭疽芽胞杆菌——微生物检验及鉴定

根据不同感染部位取材；

各型炭疽均可采取血液。

专门防护的实验室，并对用过的器具、检材等进行严格的消毒处理。

革兰染色和荚膜染色。

镜检发现有荚膜的革兰阳性竹节状大杆菌。

荚膜荧光抗体染色，链状或竹节状大杆菌周围有发荧光的荚膜者为阳性。

分离培养：

污染严重的标本可预先加热至65℃30min杀灭杂菌，或接种炭疽杆菌选择培养基-喷他脒（戊烷脒）血琼脂平板，菌落特征与血平板培养基的生长相似，但菌落较小。

硫化氢

试验

明胶液

化试验

吲哚

动力

分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，不分解乳糖；

其他试验

　　①串珠试验阳性

　　②噬菌体裂解试验

　　③重碳酸盐毒力试验菌落呈M型

　　④青霉素抑制试验

　　⑤植物凝集素试验

　　⑥动物试验

　　炭疽芽胞杆菌——致病性及临床意义

致病物质：

荚膜及炭疽毒素。

　　炭疽病：

　　炭疽芽胞杆菌经皮肤、呼吸道和胃肠道侵入机体引起。

人畜共患的急性传染病。

临床类型有皮肤炭疽、肺炭疽、肠炭疽，病死率很高。

感染后可获得持久免疫力。

　　蜡样芽胞杆菌

G+大杆菌；

呈链状排列。

芽胞位于菌体中心或次末端不突出菌体。

能耐受100℃30min。

营养要求不高，菌落较大，表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状，故名蜡样杆菌。

β-溶血。

可致食物中毒，有腹泻型与呕吐型之分。

　　产单核李斯特菌——生物学特性

偶呈丝状。

呈V字形或成对排列。

幼龄菌呈G+，陈旧培养物多转为G-。

有鞭毛、无芽胞，20℃有动力，37℃动力缓慢，一般不形成荚膜。

能生长于4℃。

菌落特征：

　　咽喉拭子、组织及粪便接种于肉汤培养基中，置4℃冷增菌。

　　血标本或脑脊液离心沉淀物接种脑心浸液培养基，分别置10%CO237℃培养24～48h及4℃培养增菌。

　　血琼脂平板：

形成小而透明的S型菌落，周围有狭窄的β溶血环。

　　半固体培养基：

25℃培养时显示有动力，倒伞形生长。

　　根据菌体及鞭毛抗原的不同，可分4个血清型。

　　抵抗力

　　耐碱不耐酸。

对热较为敏感，加热50℃10分钟可死亡。

　　产单核李斯特菌——微生物检验及鉴定

根据感染部位不同而采取相应标本。

如全身感染采取血液，局部采取分泌物或脓液，感染动物则用组织匀浆。

形态学检查

硫化氢试验

触酶试验

CAMP

尿素水解试验

七叶苷水解试验

发酵多种糖类，不发酵甘露醇和木糖

溶血素样外毒素；

磷脂酶。

　　由带菌动物或人粪便污染动物制品，而经口感染。

　　通过胎盘或产道感染新生儿是本病的重要特点。

宫内感染常可导致流产、死胎及新生儿败血症，死亡率较高。

　　本菌常伴随EB病毒引起传染性单核细胞增多症，此外可引起脑膜炎。

　　红斑丹毒丝菌

G+杆菌，单个存在或形成短链。

无芽胞、无鞭毛、无荚膜。

厌氧或微需氧菌，初次分离要在厌氧环境中培养。

血琼脂平板：

两种菌落。

光滑型菌落细小、圆形、突起有光泽；

粗糙型菌落大，表面呈颗粒状。

对湿热及化学消毒剂敏感。

48h发酵葡萄糖、乳糖，产酸不产气；

H2S阳性；

触酶、氧化酶、动力阴性。

引起丹毒丝菌病，以局部感染为主，全身感染少见。

　　阴道加特纳菌

多形性。

新鲜标本分离菌株G+，保存菌株G-。

无芽胞、无荚膜、无鞭毛。

营养要求较高。

在5%人血平板上，在3%～5%CO2、35℃培养48h，可形成针尖大小菌落，出现β溶血环。

引起非淋菌性阴道炎的主要病原菌之一。

形态结构及培养要求

菌落特征

鉴别要点

临床意义

白喉棒状杆菌

不规则栅栏状；

异染颗粒。

营养要求较高

吕氏血清斜面生长迅速，异染颗粒明显。

亚碲酸钾血琼脂菌落黑色

不分解乳糖；

产酸不产气。

毒力试验

白喉外毒素致白喉；

菌体不入血，可有毒血症

炭疽芽胞杆菌

竹节状，可成长链。

最大G+致病杆菌；

有荚膜

有毒株黏液型、无毒株粗糙型。

低倍镜下卷发状

串珠试验阳性；

重碳酸盐毒力试验菌落M型

荚膜及炭疽毒素致炭疽病

产单核李斯特菌

幼龄菌G+，陈旧培养物G-；

有鞭毛；

20℃有动力。

能生长于4℃

血琼脂小而透明S型菌落，狭窄β溶血环。

半固体培养基25℃倒伞形生长

不发酵甘露醇和木糖

触酶及七叶苷水解试验阳性；

CAMP试验阳性

胎盘或产道感染新生儿

传单

红斑丹毒丝菌

厌氧或微需氧，

初次分离要厌氧

血琼脂光滑型、粗糙型菌落

发酵葡萄糖、乳糖，产酸不产气

丹毒丝菌病

阴道加特纳菌

多形性；

新鲜G+，菌株G-。

人血平板有针尖菌落，β溶血环

非淋菌性阴道炎

棒状杆

菌属

芽胞杆

李斯特

丹毒丝

加特纳

形态

棒状

杆菌有

芽胞

短杆、链

或丝状

细杆或

线状

杆菌、多形性

触酶

对氧

需氧、兼性厌氧

兼性厌氧

G+Cmol%

51～65

32～69

36～38

36～40

42～44

　　经典例题

　　棒状杆菌属重要的生物学特征是

　　A.不能分解任何糖类

　　B.有鞭毛

　　C.有荚膜

　　D.有芽胞

　　E.着色不均，有异染颗粒

『正确答案』E

『答案解析』棒状杆菌属重要的生物学特征是着色不均，有异染颗粒。

　　白喉棒状杆菌主要传播方式是

　　A.血液传播

　　B.呼吸道传播

　　C.消化道传播

　　D.垂直传播

　　E.接触传播

『正确答案』B

『答案解析』白喉棒状杆菌主要传播方式是呼吸道传播。

　　下列细菌直接涂片即可作出初步鉴定的是

　　A.流感嗜血杆菌

　　B.百日咳鲍特菌

　　C.大肠埃希菌

　　D.白喉棒状杆菌

　　E.鼠疫耶尔森菌

『正确答案』D

『答案解析』白喉棒状杆菌为细长微弯，一端或两端膨大，排列成不规则栅栏状的G+杆菌。

　　白喉棒状杆菌菌体被染为蓝绿色，异染颗粒呈蓝黑色的染色方法是

　　A.美蓝染色

　　B.革兰染色

　　C.Albert染色

　　D.抗酸染色

　　E.Neisser染色

『正确答案』C

『答案解析』Albert染色白喉棒状杆菌菌体被染为蓝绿色，异染颗粒呈蓝黑色。

　　观察白喉棒状杆菌异染颗粒，宜选用的最佳培养基是

　　A.亚碲酸盐血琼脂

　　B.吕氏血清斜面

　　C.巧克力培养基

　　D.血液琼脂

　　E.血清肉汤

『答案解析』观察白喉棒状杆菌异染颗粒，宜选用的最佳培养基是吕氏血清斜面。

　　白喉杆菌的主要毒力因子是

　　A.杀白细胞毒素

　　B.肠毒素

　　C.溶血素

　　D.外毒素

　　E.蛋白酶K

『答案解析』白喉杆菌的主要毒力因子是白喉外毒素。

　　对于炭疽芽胞杆菌，叙述正确的是

　　A.只能引起食草动物患炭疽病

　　B.是致病菌中最大的革兰阴性杆菌

　　C.菌体两端齐平，呈竹节状

　　D.在所有培养基中均形成荚膜

　　E.不易形成芽胞

『答案解析』炭疽芽胞杆菌菌体两端齐平，呈竹节状。

　　在血琼脂平板上呈浅灰白色似毛玻璃样菌落并有β或α溶血环的细菌最可能是

　　A.白喉棒状杆菌

　　B.枯草杆菌

　　C.蜡样芽胞杆菌

　　D.产单核李斯特菌

　　E.星形奴卡菌

『答案解析』在血琼脂平板上呈浅灰白色似毛玻璃样菌落并有β或α溶血环的细菌最可能是蜡样芽胞杆菌。

　　食入被大量的蜡样芽胞杆菌污染的食物，可导致

　　A.伪膜性肠炎

　　B.阿米巴痢疾

　　C.食物中毒

　　D.中毒性痢疾

　　E.出血性大肠炎

『答案解析』食入被大量的蜡样芽胞杆菌污染的食物，可导致食物中毒。

　　产单核李斯特菌是

　　A.革兰阴性短小杆菌

　　B.革兰阳性短小杆菌

　　C.革兰阴性小球菌

　　D.革兰阳性小球菌

　　E.革兰阳性大杆菌

『答案解析』产单核李斯特菌是革兰阳性短小杆菌。

　　产单核李斯特菌在半固体培养基中培养可出现

　　A.沉淀生长

　　B.浑浊生长

　　C.表面形成菌膜

　　D.产生色素

　　E.倒伞形生长

『答案解析』产单核李斯特菌在半固体培养基中培养可出现倒伞形生长。

　　产单核李斯特菌在羊血琼脂上培养可出现

　　A.狭窄的β溶血环

　　B.狭窄的α溶血环

　　C.无溶血现象

　　D.放置过夜后溶血环消失

　　E.宽阔的α溶血环

『正确答案』A

『答案解析』产单核李斯特菌在羊血琼脂上培养可出现狭窄的β溶血环。