生物制药工艺学习题选择填空文档格式.docx

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7、诱变时选择出发菌株时应考虑出发菌株的稳定性、选用具备某种优良特性、对诱变剂敏感、菌种的生理状态及生长发育时间等问题。

8、目前常用的诱变剂可分为物理诱变因子、化学诱变剂、生物诱变因子三大类。

9、常用的菌种保藏方法有：

斜面低温保藏法、液体石蜡封藏法、冷冻干燥保藏法、液氮超低温保藏法、甘油保藏法、沙土管保藏等。

10、微生物生长需要的六大营养要素是碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐、水。

11、生物药物制备过程中，常用的灭菌及除菌方法有：

加热灭菌、辐射灭菌（紫外杀菌）、介质过滤除菌、化学灭菌法。

12、获得具有遗传信息的目的基因的方法有鸟枪克隆法（DNA文库）、cDNA文库法、化学合成法、PCR法。

13、PCR由3个基本反应组成，即高温变性、低温退火、适温延伸。

14、基因工程中原核表达常用的宿主有大肠杆菌、枯草杆菌等；

常用的真核表达系统有酵母、动物（植物）细胞等。

15、大肠杆菌表达系统的缺点是不能进行翻译后加工（糖基化），因而像EPO等基因的表达需使用真核（酵母）表达系统。

16、分泌表达是指将目的基因嵌合在信号肽基因下游进行表达，从而使目的基因分泌到细胞周质或培养基中。

17、固定化酶常采用的方法可分为吸附、包埋、交联、共价键结合四大类。

18、下面酶固定化示例图分别代表哪种固定化方法：

A．吸附B.共价键结合C.交联D.包埋

二、选择题

1、如果想要从生物材料中提取辅酶Q10，应该选取下面哪一种动物脏器（D）

A、胰脏B、肝脏C、小肠D、心脏

2、目前分离的1000多种抗生素，约2/3产自（B）

A、真菌B、放线菌C、细菌D、病毒

3、由于目的蛋白质和杂蛋白分子量差别较大，拟根据分子量大小分离纯化并获得目的蛋白质，可采用（C）

A、SDS凝胶电泳B、盐析法C、凝胶过滤D、吸附层析

4、以下可用于生物大分子与杂质分离并纯化的方法有（D）

A、蒸馏B、冷冻干燥C、气相色谱法D、超滤

5、分离纯化早期，由于提取液中成分复杂，目的物浓度稀，因而易采用（A）

A、分离量大分辨率低的方法B、分离量小分辨率低的方法

C、分离量小分辨率高的方法D、各种方法都试验一下，根据试验结果确定

6、以下可用于菌种纯化的方法有（B）

A、高温灭菌B、平板划线C、富集培养D、诱变处理

7、能够实现微生物菌种定向改造的方法是（D）

A、紫外诱变B、自然选育C、制备原生质体D、基因工程

8、能够用沙土管保存的菌种是（C）

A、大肠杆菌B、酵母菌C、青霉菌D、乳酸杆菌

9、以下关于PCR的说法错误的是（C）

A、PCR反应必须要有模板、引物、dNTP和DNA聚合酶

B、应用PCR技术可以进行定点突变

C、PCR的引物必须完全和模板互补配对

D、PCR反应中，仅介于两引物间的DNA片段得到大量扩增

第三章生物材料的预处理、细胞破碎和液-固分离（答案）

1、确定生物材料的预处理方法的依据是生物活性物质存在方式与特点、后续操作的要求、目的物稳定性。

2、高价金属离子的去处常用的方法：

离子交换法、沉淀法。

3、常用的细胞破碎方法：

机械法、物理法、化学法、生物法。

物理法主要包括：

干燥法、反复冻融法、渗透压冲击法。

生物法主要包括：

酶解法、组织自溶法。

4、常规的固液分离技术主要有过滤和离心分离等。

二、问答

1、简述错流过滤的优点及其原因。

答：

①过滤收率高，由于过滤过程中，洗涤充分、合理，少量多次，故滤液稀释量不大的情况下，获得高达97-98%的收率。

②滤液质量好，凡体积大于膜孔的固体，包括菌体、培养基、杂蛋白等均不能通过膜进入滤液，大部分杂质被排除掉，给后续分离及最终产品质量均带来好处。

③减少处理步骤，鼓式真空过滤器一般需涂助滤剂，板框过滤器则需清洗，拆装费时、费力，而错流过滤只需在18-20h连续操作之后，用清水沿原管流洗4-6h。

④对染菌罐易于批处理，也容易进行扩大生产。

2、简述影响液-固分离的因素。

答：

①微生物种类对液固分离的影响；

②发酵液的粘度；

③发酵液的PH、温度和加热时间。

3、简述离心分离法的优缺点。

离心分离法速度快，效率高，操作时卫生条件好，占地面积小，能自动化、连续化和程序控制，适合于大规模的分离过程，但是设备投资费用高、耗能也较高。

4、简述细胞及蛋白质的预处理方式。

①加入凝聚剂；

②加入絮凝剂；

③变性沉淀；

④吸附；

⑤等电点沉淀；

⑥加各种沉淀剂沉淀

第四章萃取分离法（答案）

1、常用的萃取方法有：

单级萃取、多级错流萃取、多级逆流萃取。

2、影响溶剂萃取的因素：

乳化和破乳化、PH的影响、温度和萃取时间的影响、盐析作用的影响、溶剂种类、用量及萃取方式的影响。

3、破乳方法有：

加入表面活性剂、离心、加电解质、加热、吸附法破乳、高压电破乳、稀释法、超滤、反应萃取。

4、常用的破乳剂有：

阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂。

二、名词解释

1、液-液萃取：

是指用一种溶剂将物质从另一种溶剂（如发酵液）中提取出来的方法，根据所用溶剂的性质不同或萃取机制不同，可将液-液萃取分为多种类型。

2、萃取：

在溶剂萃取中，被提取的溶液称为料液，其中与提取的物质称溶质，而用以进行萃取的溶剂称为萃取剂。

料液与萃取剂接触后，料液中的溶质向萃取剂转移的过程称为萃取，达到萃取平衡后，大部分溶质转移到萃取剂中，这种含有溶质的萃取剂溶液称为萃取液，而被萃取出溶质以后的料液称为萃余液。

3、反萃取（stripping）：

是将萃取液与反萃取剂（含无机酸或碱的水溶液，有时也可以是水）相接触，使某种被萃入有机相的溶质转入水相，可把这种过程看作萃取的逆过程。

4、分配定律：

即在一定温度，一定压力下，某一溶质在互不能相溶的两种溶剂间分配时，达到平衡后，在两相中的活度之比为一常数。

5、萃取因素：

也称萃取比，其定义为被萃取溶质进入萃取相的总量与该溶质在萃余相中总量之比，通常以E表示。

6、萃取率（percentageextraction）：

生产上常用萃取率来表示一种萃取剂对某种溶质的萃取能力，计算萃取效果，其公式为：

7、分离因素：

在同一萃取体系内两种溶质在同样条件下分配系数的比值。

第五章沉淀法（答案）

一.填空

1.固相析出法主要包括盐析法，有机溶剂沉淀法，等电点沉淀法，结晶法及其它多种沉淀方法等。

2.按照一般的习惯，析出物为晶体时称为结晶法，析出物为无定形固体则称为沉淀法。

3.影响盐析的因素有：

无机盐的种类、溶质（蛋白质等）种类的影响、蛋白质浓度的影响、温度的影响、pH的影响

4.结晶包括三个过程：

（1）形成过饱和溶液；

（2）晶核形成；

（3）晶体生长。

5.影晶体大小的主要因素，归纳起来与过饱和度、温度、搅拌速度、晶种等直接有关。

6.晶体的质量主要是指晶体的大小、形状和纯度等3个方面

二．选择

1、在一定的pH和温度下改变离子强度（盐浓度）进行盐析，称作（A）

A．KS盐析法B．β盐析法C．重复盐析法D．分部盐析法

2、当向蛋白质纯溶液中加入中性盐时，蛋白质溶解度（C）

A．增大B.减小C.先增大，后减小D.先减小，后增大

3、盐析法与有机溶剂沉淀法比较，其优点是（B）

A.分辨率高B.变性作用小C.杂质易除D.沉淀易分离

4、当向蛋白质纯溶液中加入中性盐时，蛋白质溶解度（C）

5、盐析常数Ks是生物大分子的特征常数，它与下列哪种因素关系密切。

（B）

A．盐浓度B.盐种类C.溶质浓度D介质pH

6、将配基与可溶性的载体偶联后形成载体-配基复合物，该复合物可选择性地与蛋白质结合，在一定条件下沉淀出来，此方法称为（A）

A．亲和沉淀B．聚合物沉淀C．金属离子沉淀D．盐析沉淀

7、将四环素粗品溶于pH2的水中，用氨水调pH4.5—4.6，28－30℃保温，即有四环素沉淀结晶析出。

此沉淀方法称为（B）

A．有机溶剂结晶法B．等电点法C．透析结晶法D．盐析结晶法

8、影响体大小的主要因素与下列哪些因素无关（D）

A．过饱和度B．温度C．搅拌速度D．饱和度

9、下列沉淀试剂不属于表面活性剂的是（D）

A．CTABB．CPCC．SDSD．PEG

三名词解释：

1.盐析法：

是利用各种生物分子在浓盐溶液中溶解度的差异，通过向溶液中引入一定数量的中性盐，使目的物或杂蛋白以沉淀析出，达到纯化目的的方法。

2.Ks盐析：

在一定的pH和温度下改变离子强度（盐浓度）进行盐析，称作Ks盐析法。

Ks盐析法多用于提取液的前期分离工作。

3．β盐析：

在一定离子强度下仅改变pH和温度进行盐析，称作β盐析法。

在分离的后期阶段，为了求得较好的分辨率，或者为了达到结晶的目的，有时应用β盐析法。

β盐析法由于溶质溶解度变化缓慢且变化幅度小，沉淀分辨率比KS盐析法好。

4．亲和沉淀:

利用亲和反应原理，将配基与可溶性的载体偶联后形成载体-配基复合物（亲和沉淀剂），该复合物可选择性地与蛋白质结合，在一定条件下沉淀出来。

第六章吸附分离法（答案）

一、填空

1、吸附剂按其化学结构可分为两大类：

一类是有机吸附剂，如活性炭、淀粉、大孔吸附树脂等；

另一类是无机吸附剂，如白陶土、氧化铝、硅胶、硅藻土等。

2、常用的吸附剂有活性炭、硅胶和白陶土等。

3、大孔网状聚合物吸附剂是在树脂聚合时加入惰性致孔剂，待网格骨架固化和链结构单元形成后，用溶剂萃取或蒸馏水洗将致孔剂去掉，形成不受外界环境条件影响的孔隙，其孔径远大于2～4nm，可达100nm，故称“大孔”。

4、大孔网状聚合物吸附剂按骨架的极性强弱，可分为非极性、中等极性、极性和强极性吸附剂四类。

1、用大网格高聚物吸附剂吸附的弱酸性物质，一般用下列哪种溶液洗脱（D）

A.水B.高盐C.低pHD.高pH

2、“类似物容易吸附类似物”的原则,一般极性吸附剂适宜于从何种溶剂中吸附极性物质（B）

A.极性溶剂B.非极性溶剂C.水D.溶剂

3、“类似物容易吸附类似物”的原则,一般非极性吸附剂适宜于从下列何种溶

剂中吸附非极性物质。

（A）

A.极性溶剂B.非极性溶剂C.三氯甲烷D.溶剂

4、下列属于无机吸附剂的是：

（A）

A.白陶土B.活性炭C.淀粉D.纤维素

5、活性炭在下列哪种溶剂中吸附能力最强？

A.水B.甲醇C.乙醇D.三氯甲烷

6、关于大孔树脂洗脱条件的说法，错误的是：

A.最常用的是以高级醇、酮或其水溶液解吸。

B.对弱酸性物质可用碱来解吸。

C.对弱碱性物质可用酸来解吸。

D.如吸附系在高浓度盐类溶液中进行时，则常常仅用水洗就能解吸下来。

第七章凝胶层析（答案）

1、凝胶层析的分离原理有平衡排除理论、扩散分离理论、流动分离理论。

这三种分离原理是互相补充的，在通常情况下平衡排除理论起主导作用；

扩散分离理论的作用随流速增加而加强；

只有在流速很高时流动分离理论才起作用。

2、琼脂糖凝胶的一个特征是分离的分子量范围非常大，其分离范围随着凝胶浓度上升而下降，颗粒强度随浓度上升而提高。

3、凝胶粒度的大小对分离效果有直接的影响。

一般来说，细粒凝胶柱流速低，洗脱峰窄，分辨率高，多用于精制分离等。

粗粒凝胶柱流速高，洗脱峰平坦，分辨率低，多用于脱盐等。

4、在作分级分离时，为了提高分辨率，多采用比样品体积大25倍以上的柱体积，25以上的柱比，较大吸液量、较细粒的凝胶固定相。

5、溶质通过色谱柱时造成的峰加宽效应包括分子扩散、涡流扩散、流动相中传质阻力、固定相中传质阻力。

6、葡聚糖凝胶的孔径大小取决于交联度，其越小，凝胶孔径越大；

而琼脂糖凝胶的孔径却依赖于琼脂糖浓度。

1、凝胶层析中，有时溶质的Kd>

1，其原因是（B）

A.凝胶排斥B.凝胶吸附C.柱床过长D.流速过低

2、凝胶层析中，有时小分子溶质的Kd<

1，其原因是（A）

A.水合作用B.凝胶吸附C.柱床过长D.流速过低

3、在凝胶层析中样品各组分最先淋出的是（B）

A.分子量最大的B.体积最大的C.分子量最小的D.体积最小的

4、为了进一步检查凝胶柱的质量，通常用一种大分子的有色物质溶液过柱，常见的检查物质为蓝色葡聚糖，下面不属于它的作用的是（C）

A.观察柱床有无沟流B.观察色带是否平整

C.测量流速D.测量层析柱的外水体积

5、在选用凝胶层析柱时，为了提高分辨率，宜选用的层析柱是（A）

A.粗且长的B.粗且短的C.细且长的D.细且短的

第八章离子交换法（答案）

1、离子交换剂由惰性的不溶性载体、功能基团和平衡离子组成。

平衡离子带正电荷为阳离子交换树脂，平衡离子带负电荷称阴离子交换树脂。

2、常见的离子交换剂有离子交换树脂，离子交换纤维素，葡聚糖凝胶离子交换剂等。

3、离子交换树脂的基本要求有有尽可能大的交换容量、有良好的交换选择性、

化学性质稳定、化学动力学性能好和物理性能好。

4、影响离子交换选择性的因素主要有离子价与离子水合半径、离子价与离子浓度、交换环境、树脂结构、偶极离子排斥等。

5、请写出下列离子交换剂的名称和类型：

CM-C的名称是羧甲基纤维素，属于弱酸型阳离子交换纤维素;

DEAE-C的名称是二乙基氨基乙基纤维素，属于强碱型阴离子交换纤维素;

。

6、色谱聚焦（chromatofocusing）是一种高分辨的新型的蛋白质纯化技术。

它是根据蛋白质的等电点，结合离子交换技术的大容量色谱，能分离几百毫克蛋白质样品，洗脱峰被聚焦效应浓缩，分辨率很高，操作简单。

7、写出下列离子交换剂类型：

732强酸型阳离子交换树脂，724弱酸型阳离子交换树脂，717强碱型阴离子交换树脂，CM-C阳离子交换纤维素,DEAE-C阴离子交换纤维素，PBE94阴离子交换剂。

8、在采用多缓冲阴离子交换剂作固定相的离子交换聚焦色谱过程中，当柱中某位点之pH值下降到蛋白质组分PI（等电点）值以下时，它因带正电荷而下移，如果柱中有两种蛋白组分，pI值较大（高）者会超过另一组分，移动至柱下部pH较高的位点进行聚焦（交换）。

9、影响离子交换选择性的因素有离子水合半径、离子价与离子浓度、交换环境、树脂结构、偶极离子排斥。

1、用钠型阳离子交换树脂处理氨基酸时，吸附量很低，这是因为（C）

A.偶极排斥B.离子竞争C.解离低D.其它

2、在酸性条件下用下列哪种树脂吸附氨基酸有较大的交换容量（C）

A.羟型阴B.氯型阴C.氢型阳D.钠型阳

3、在尼柯尔斯基方程式中，K值为离子交换常数，K＞1说明树脂对交换离子吸引力（）。

A.小于平衡离子B.大于平衡离子C.等于平衡离子D.其它

第九章亲和纯化技术（答案）

1、亲和层析洗脱方法有非专一性洗脱，特殊洗脱，专一性洗脱。

2、亲和力大小除由亲和对本身的解离常数决定外，还受许多因素的影响，其中包括亲和吸附剂微环境、载体空间位阻、载体孔径、配基和配体的浓度、配基结构等。

3、亲和层析中常用作分离酶的配基有酶抑制剂，辅酶，底物和底物结构类似物。

4、亲和层析中非专一性吸附有离子效应、疏水基团、复合亲和力。

5、亲和过滤指的是将亲和层析和膜过滤技术结合运用，它包括亲和错流过滤和亲和膜分离两大方法。

1、下面关于亲和层析载体的说法错误的是（B）

A.载体必须能充分功能化。

B.载体必须有较好的理化稳定性和生物亲和性，尽量减少非专一性吸附。

C.载体必须具有高度的水不溶性和亲水性。

D.理想的亲和层析载体外观上应为大小均匀的刚性小球。

2、制备亲和柱时，应首先选用的配基是（A）

A.大分子的B.小分子的C.中等大小的D.不确定

3、亲和层析的洗脱过程中，在流动相中加入配基的洗脱方法称作（C）

A.阴性洗脱B.剧烈洗脱C.竞争洗脱D.非竞争洗脱

4、亲和层析的洗脱过程中，在流动相中减去配基的洗脱方法称作（D）

A.阴性洗脱B.剧烈洗脱C.正洗脱D.负洗脱

第十章离心技术

1、制备型离心机的转子有角度、水平、垂直、区带转子

2、密度梯度的制备方法有手工制备法、梯度混合仪制备法、离心形成法反复冻融法

3、梯度的取出和收集方法：

取代法、穿刺法、切割法、虹吸法。

在离心分离过程中,若离心机的转速为4000转/分种,离心半径为10厘米,则相对离心力为（A）A.1789（g）B.4000（g）C.8000（g）D.2000（g）

第十一章膜分离技术

1、微孔滤膜孔径检测方法有气泡压力法、细菌过滤法、水流量法。

2、克服浓差极化现象的措施有震动、搅拌、错流（crossflow）、切流（tangentflow）

3、实验用超滤器的类型有无搅拌式装置，搅拌或振动式装置，小棒超滤器，浅道系统超滤装置（中孔纤维系统超滤器）。

1、透析是膜分离技术的一种，通常利用透析技术进行（B）

A脱脂B脱盐C除菌D除热源

2、在超滤过程中，主要的推动力是（C）

A.浓度差B.电势差C.压力D.重力

第十三章生化药物（答案）

1、生化药物的主要资源有动物来源、血液及其它分泌物、海洋生物、现代生物技术产品、微生物、植物和化学合成。

2、氨基酸有水解法，发酵法，酶转化法，化学合成法四类生成方法。

其中酶转化法通用性好，是最有前途的方法。

水解法中碱水解法解法会引起消旋作用，酶水解法解法不够彻底，故以酸水解法解法较为常用。

3、肽合成中，由于顺序合成的需要，必须对暂不参加反应的基团加以保护。

用于保护氨基的基团常有卞氧羰基，叔丁氧羰基和9-芴甲氧羰基。

4、以动物组织为原料提取多肽和蛋白质类物质时，为了获得安全性高，活性高，收率高的目的物，在选材上应注意的问题有种属、发育生长阶段、生物状态、

原料来源和原料解剖学部位。

5、目前采用重组DNA技术制造人胰岛素的两条途径为AB链合成法和发转录酶法。

6、利用产氨短杆菌发酵法生产肌苷酸，第一步是用诱变育种的方法筛选缺乏SAMP合成酶的腺嘌呤缺陷型菌株，在发酵培养基中提供亚适量的腺嘌呤；

另外，改变细胞膜对5′-IMP的透性，选育

不敏感的变异株。

7、依据核酸类药物的结构特点及临床应用情况，可将此类药物分为两类，即

具有天然结构的核算酸物质类和天然结构碱基核苷、核苷酸类结构类似物或聚合物。

8、酶在制备过程中，为了保持酶的活力，要注意防止酶蛋白变性，防止辅因子的流失，防止酶被蛋白水解酶降解。

一般酶的纯度愈高，其稳定性愈不稳定。

9、常用的纯化多糖的方法有乙醇沉淀法，分级沉淀发，季铵盐络合法，离子交换层析法，凝胶过滤法，还有乙醇分级沉淀法和电泳法适用于粘多糖的纯化。

10、以动物的组织为原料提取纯化酶时常常需要对动物材料进行预处理，常用的预处理的方法有机械处理，反复冻融和丙酮粉。

11、粘多糖是一类含有糠醛酸和硫酸化的糖残基的酸性糖，它们在组织中常与蛋白质结合为复合物。

故提取时须先经酶解法或碱解法使糖-蛋白质间的结合键断裂。