武汉地区妇女宫颈感染人乳头瘤病毒基因型分析Word文档下载推荐.docx

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高危型HPV主要是HPV16和18，其次是HPV58、33、56。

【关键词】宫颈；

人乳头瘤病毒；

基因型

　　AnalysisofHumanPapillomavirusGenotypeDistributioninCervicalLesionofWomeninWuhan

　　HUXingwen

　　（MaternalandChildHealthHospitalofHubei,Wuhan,Hubei430070,China）

　　Abstract:

ObjectiveToinvestigatehumanpapillomavirus（HPV）genotypedistributionincervicallesionofwomeninWuhan.Methods18highriskHPV（hrHPV）genotypesand5lowriskHPV（lrHPV）genotypesincervicallesionofwomenweredetectedbygenechiptechniqe.ResultsOf606casesweredetected,391caseswereHPVpositive（%）.274caseswerehrHPVpositive（%）.117caseswereonlylrHPVpositive（%）.AmonghrHPVinfection,HPV16wasthemostcommongenotype（%）,followedbyHPV18（%）,HPV58（%）,HPV33（%）,andHPV56（%）respectively.AmongHPVinfectioncases,332casesweresingleHPVinfection（%）,53casesweredoubleHPVinfection（%）,and6casesweretripleHPVinfection（%）.ConclusionHPVinfectionincervicallesionofwomenwassevereinWuhan.MostofthemweresingleHPVinfection.HPV16wasthemostcommongenotype,followedbyHPV18,HPV58,HPV33,andHPV56.

　　Keywords:

Cervical;

Humanpapillomavirus;

Genotype

　　宫颈癌是全世界妇女第二位最容易发生的癌症，每年新诊断出约470000例，每年死亡人数达250000［1］。

HPV是宫颈癌发展的必要因素［2～5］。

在感染人类的人乳头瘤病毒（HPV）中，已经测定基因序列的有100多种基因型［6］。

在全世界，不同的地域，HPV流行的基因型有所差异，了解武汉地区妇女宫颈感染的HPV基因型分布情况，对监控HPV感染疫情和将来使用HPV疫苗来预防宫颈癌的发生有很重要的指导意义。

　　1材料和方法

　　材料

　　研究对象606例标本来自我院妇科门诊2005年1月至2006年12月诊断为宫颈上皮内瘤样变Ⅰ级以上的患者，年龄16岁～60岁，平均年龄（±

）岁。

　　试剂和仪器HPV分型基因芯片检测系统（亚能生物技术有限公司,深圳）；

Biometra基因扩增仪（德国），FYY3型分子杂交仪（江苏兴化分析仪器厂）。

显色液须新鲜配制,按顺序加入以下溶液:

C液（mol/L柠檬酸钠,pH）19ml,四甲基联苯胺1ml,体积分数3%H2O210μl。

20倍SSC,质量分数10%的十二烷基硫酸钠（SDS）、1mol/L柠檬酸钠均为深圳亚能生物技术有限公司提供,用时按所需浓度加蒸馏水配制。

　　方法

　　标本的采集及保存方法用专用毛刷,紧贴宫颈口黏膜,稍用力转动2周,以取得脱落细胞，将取样后的毛刷放入备有1ml无菌生理盐水的试管中,充分漂洗后将毛刷贴壁挤干丢弃。

采集的样本没有及时检测时则放在-20℃保存。

　　样本处理方法将漂洗过毛刷的生理盐水全部转移到ml离心管中,13000r/min离心10min,弃去上清,保留管底的细胞块。

加入50μl裂解液充分混合,100℃加热10min。

13000r/min离心10min,保留上清待用。

　　HPV基因芯片检测PCR扩增取PCR反应管一支,做好标记,于5000r/min离心2s,加入已提取的待测样品DNA5μl,反应总体系为25μl。

每次实验设置一个阴性对照,即以5μl无菌纯水为模板。

扩增条件:

50℃,15min；

95℃,10min；

而后循环40次（94℃,30s；

42℃,90s；

72℃,30s）；

72℃延伸5min。

杂交及洗膜取固定有23种HPV分型探针的膜条放入塑料离心管,加入A液（2SSC）及PCR产物,将塑料管放入沸水中加热10min后,放入杂交箱51℃杂交1h。

于51℃轻摇洗涤15min。

膜条转移至已于杂交箱中预热到51℃的40mlB液（SSC）管中,轻摇洗涤15min,弃液体。

显色膜条置于POD溶液室温轻摇浸泡30min,弃去POD溶液。

用A液室温轻摇洗2次,5min/次。

用C液室温洗膜1min～2min,将膜条浸泡于显色液中避光10min左右即可见斑点显现,若显色液较弱可适当延长显色时间,显色完毕将膜条浸泡在水中清洗,最后取出膜条于4℃保存。

结果判定作为阴性对照的杂交膜条会在PC位置出现蓝色斑点,同时其他位点不应该显色；

检测用的每张膜条在PC处均应有蓝色斑点出现,此时结果的判读视为有效。

膜条上的探针排列顺序HPV6、11、16、18、31、33、35、39、42、43、45、51、52、53、56、58、44、59、66、68、73、83、MM4、PC。

由斑点显现的位置即可断定HPV的基因型。

其中,低危型:

HPV6、11、42、43、44。

其他为高危型:

HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、MM4。

　　2结果

　　总共检测606例，HPV总感染例数391例，感染率为%。

检出的基因型有低危型HPV6、11、42和高危型HPV16、18、31、33、35、45、53、56、58、59、68、73，见表1。

未检出的基因型有低危型HPV43、44和高危型HPV39、51、52、66、83、MM4。

高危型HPV感染人数274例，感染率为%，在高危型基因型中，HPV16和18共占%，其他基因型共占%，感染率排在前5位的依次是HPV16、18、58、33、56。

单一基因型感染332例，占感染人数的%。

两重感染53例，占感染人数的%，其中，高危型和低危型混合感染32例，占两重感染的%；

两者均为高危型感染18例，占两重感染的%；

两者均为低危型感染3例，占两重感染的%，见表2。

三重感染6例，占感染人数的%，其中高危型和低危型混合感染5例，三者均为高危型感染1例，见表3。

　　表1HPV基因型的分布

　　表2HPV两重感染基因型分布

　　表3HPV三重感染基因型分布

　　3讨论

　　武汉地区检查的606例妇女宫颈病变患者HPV感染率达到%，比深圳［7］、广州［8］、广西［9］、粤东地区［10］都高，这可能与筛查的患者和检查方法有关，筛查对象的宫颈病变越严重，HPV感染率可能越高；

另外，检查的基因型越多，漏检率越小，HPV的感染率也就越高。

在高危型HPV感染中，武汉地区感染率最高的是HPV16，其后依次是HPV18、HPV58、HPV33、HPV56等。

不同的地区，流行的基因型有所不同，广州地区排在前5位的分别为HPV52、16、51、58、68［8］，粤东地区排在前5位的分别为HPV16、18、58、33、73［10］，香港地区感染率最高的是HPV16、18［11］。

在非洲感染率排在前5位的分别是HPV52、35、58、51、16［12］；

在印度是HPV16、18、33、58、35［13］；

在美国是HPV56、53、16、58、52［14］；

在澳大利亚是HPV16、18、45、39、73［15］。

在世界范围内，HPV16是与宫颈癌联系最紧密的基因型，并随地域变化很小［16］。

在武汉地区HPV感染患者中，大多数是单一基因型感染，单一基因型感染占感染人数的%，两重感染的占%，感染基因型最多的也只有三重感染，三重感染占%，非洲有些患者可同时感染有7种基因型［12］，由于HPV属于性传播疾病，患者和（或）对方性伙伴越多，多重感染的基因型可能就越多。

武汉地区两重感染的主要是低危型HPV和高危型HPV混合感染，占%；

其次是两者均为高危型HPV感染，占%；

两者均为低危型HPV只占%。

大多数HPV感染者是短暂无症状，并且自身能够把病毒清除掉，只有持久感染高危型HPV，就会增加发展成为宫颈癌的风险性［2，17～20］。

自身清除病毒,多重基因型感染可能比单一基因型难，HPV16是最难清除掉的基因型。

妇女感染高危型HPV后，在随后的6年中发展成CINⅢ级病变的风险比未感染者高210倍［21］，国外正进行研究HPV疫苗来预防HPV的感染，但HPV的基因型比较多，国外主要是研究HPV16和18两价疫苗，一般是在第一次性生活之前13岁～14岁左右接种［22］。

武汉地区高危型HPV也主要以HPV16、18为主，占%，其他高危型HPV共占%，但若接种HPV16/18两价疫苗，将会仍有将近30%的机会感染其他高危型HPV基因型而不能预防。

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