沙枣多糖对小鼠免疫功能影响的研究文档格式.docx

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为了提高沙枣产品的附加值，石河子大学投入大量精力对沙枣进行了研究，发现沙枣中含有丰富的沙枣多糖，对动物具有良好的免疫保健功能。

为了开发这一药用资源，我们将沙枣多糖作用于小鼠，通过测定以观察对小鼠免疫器官脾、胸腺指数、单核巨噬细胞吞噬功能、血清半数溶血值、迟发型超敏反应功能的影响，为中药有效成分的进一步研究提供理论基础。

　　1材料与仪器1动物昆明种小鼠，8～12周龄，体重18～25g，雌雄随机，石河子大学实验动物中心提供。

2试剂丙酮，乌鲁木齐化学试剂厂产品；

石油醚，乌鲁木齐化学试剂厂产品；

印度墨汁，北京笃信精细制剂厂产品；

绵羊红细胞悬液，石河子大学实验动物中心提供；

Alsever′s血球保存液，按常规配制；

都氏试剂，高铁氰化钾ｇ，加水至1000ml，4℃保存；

补体。

3仪器KQ-250型超声波提取仪，昆山市超声仪器有限公司产品；

SENCOR502B旋转蒸发器，上海申生科技有限公司产品；

SartoriusBS210S电子天平，北京塞多利斯天平有限公司产品；

SHZ-C型循环水式多用真空泵，巩义市英欲予华仪器厂产品；

722型光栅分光光度计，上海精密科学仪器厂产品；

镀铬游标卡尺，湖北省教学仪器厂，精密度mm。

　　2方法

　　沙枣多糖的提取称取沙枣粉末g，加少量水浸泡24h湿润。

加入石油醚L，在超声循环提取仪中提取30min，过滤。

在滤渣中加入95%的乙醇L，超声提取30min，过滤。

在所得滤渣中加入蒸馏水L，超声提取30min，重复用水提取3次。

提取完毕后过滤、合并滤液，在旋转薄膜蒸发仪上减压浓缩至200ml。

加入95%的乙醇使溶液中乙醇含量达到80%，低温静置过夜，抽滤，滤渣分别用乙醚、丙酮、无水乙醇洗涤数次，得灰白色粉末样物质，放入烘箱中于60℃干燥备用。

由苯酚-硫酸法测得提取物中沙枣多糖含量为％。

　　检测项目及方法

　　实验动物分组及给药方式本实验设计了高、中、低3个剂量组（每组10只），即小鼠每日每只经口给予（加入饮水法）沙枣多糖60mg·

kg-1体重/体重

　　胸腺指数=胸腺重量/体重

　　单核巨噬细胞吞噬功能（碳粒廓清速率）的测定［4］末次给药后1h，称体重，各鼠均按ml/10g剂量由尾静脉注入印度墨汁，注射后分别在1min（t1）、5min（t2）从小鼠眼眶静脉丛取血20μl，溶于ml%Na2CO3溶液中摇匀，放置20min后于680nm处测其吸光度值，以%Na2CO3溶液做空白对照，将小鼠处死后取肝脏和脾脏，用滤纸吸干血迹后称重，根据公式计算廓清指数K值和校正廓清指数α值。

计算公式：

K＝／（t2－t1）；

α＝K1/3×

体重/

　　小鼠血清溶血素的检测［5］给药第3天，每鼠腹腔注射2％SRBC　ml致敏，并继续给药。

致敏后第4于末次给药后90min取小鼠眼球血，静置1h，2000r/min离心10min，取上层血清20μl，用NS稀释500倍，取此血清样1ml作为补体，37℃温浴1h，反应结束，将反应管立即移入冰浴中，以终止反应，以2000r/min离心10min，取1ml上清液盛于由3ml都氏试剂的试管摇匀，放置10min后于540nm测其吸光度值。

计算小鼠的半数溶血值。

　　样品HC50=（样品的吸光度值/SRBC半数溶血时的吸光度值）×

稀释倍数

　　迟发型超敏反应检测按文献方法［6］给药第3天，每鼠腹腔注射2％SRBC　ml致敏，并继续给药。

致敏后第4日取20％SRBC50μl悬液注射在小鼠右侧足垫皮下，左侧注射50μl生理盐水，24h后用游标卡尺测定小鼠左右足垫厚度之差为肿胀程度。

同一部位测量3次，取平均值。

　　3结果

　　对小鼠免疫器官的影响结果显示EAPS各剂量组均能增加小鼠胸腺和脾脏的重量。

与对照组胸腺指数比较，EAPS在120mg·

kg-1和240mg·

kg-1剂量组有显着性差异（）；

而60mg·

kg-1剂量组无显着性差异（）；

与对照组脾脏指数比较，EAPS在120mg·

kg-1剂量组，呈极显着性差异（）；

60mg·

kg-1剂量组，均有显着性差异（）。

　　表1沙枣多糖对小鼠免疫器官的影响

　　与对照组比较,*，**；

n=10

　　对小鼠单核巨噬细胞吞噬功能（碳粒廓清速率）的影响由表2数据可知，EAPS各剂量组均能明显提高廓清指数和吞噬指数。

与对照组比较，EAPS的120，240mg·

kg-1剂量组廓清指数均达到极显着水平（），EAPS的60mg·

kg-1剂量组的廓清指数也达到了显着水平（）。

EAPS各剂量组对小鼠单核巨噬细胞的吞噬功能的增强作用，以120mg·

kg-1剂量组最为显着。

　　表2沙枣多糖对小鼠碳粒廓清的影响

　　对小鼠血清溶血素及迟发型超敏反应的影响由表3可知，EAPS在240mg·

kg-1剂量组的半数溶血值与对照组差异极显着，120mg·

kg-1剂量组与对照组的差异显着，60mg·

kg-1剂量组的半数溶血值只是略有升高，差异不显着。

60mg·

kg-1剂量组足跖肿胀度差值明显高于对照组，60mg·

kg-1剂量组和240mg·

kg-1剂量组足跖肿胀度差值与对照组相比差异显着。

　　表3沙枣多糖对小鼠血清溶血素及迟发型超敏反应的影响

　　与对照组比较，*，**；

　　4讨论

　　多糖类化合物是生物体的重要结构成分，主要影响机体的网状内上皮系统和蛋白质的合成及抗体的生成，含有激活淋巴细胞、巨噬细胞和自然杀伤细胞等免疫细胞，具有促进细胞因子的生成，改善机体的免疫功能的作用［7，8］。

本实验采用连续经口给药的方式进行免疫相关指标的测定，结果发现当多糖给药剂量为120mg／kg时受试物能明显升高小鼠的胸腺指数和脾脏指数，这将对提高机体的免疫功能有一定的影响，因为胸腺是T细胞分化成熟的场所，也是机体细胞受抗原刺激后发生免疫应答的部位［9］。

　　溶血素作为抗绵羊红细胞抗体，经绵羊红细胞诱导由小鼠体内的B淋巴细胞产生，溶血素生成的增加，反应了RP对免疫反应较后期阶段抗体分泌细胞形成具有增强作用。

SRBC作为半抗原接触皮肤与皮肤蛋白结合成为完全抗原，使T淋巴细胞致敏，因此迟发型超敏反应是由特异性致敏效应T细胞介导的细胞免疫反应，是检测细胞免疫功能的常用方法之一。

实验数据说明沙枣多糖可以显着增强小鼠抗体分泌细胞产生抗体的能力，从而增强小鼠的体液免疫，并可明显增强由T细胞介导的迟发型超敏反应。

　　单核巨噬细胞的吞噬能力是衡量机体非特异性免疫功能的标志之一。

当细菌、异物等抗原性物质进入机体后，可迅速被单核巨噬系统吞噬和清除，其消除的速率反映了吞噬功能。

实验结果，沙枣多糖能显着增加小鼠的廓清指数和吞噬指数，其免疫调节机理值得深入探讨。

　　实验显示，灌服沙枣多糖能显着提高小鼠单核巨噬细胞系统的吞噬功能，增强小鼠迟发型超敏反应，促进溶血素的生成，以增强机体的特异性和非特异性免疫功能。

沙枣多糖对小鼠的免疫功能有明显的调节作用。

【参考文献】

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　　［4］徐叔云.药理实验方法学［M］.北京:

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　　［5］陈奇.中药药理实验方法学［M］.北京:

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　　［6］林飞卿.医学基础免疫学［M］.上海:

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　　［7］高海,李秀岚.中草药多糖免疫调节剂研究进展［J］.动物医学进展,2003,24（5）:

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　　［8］沈先荣,蒋定文,贾福星,等.角燕胶囊对小鼠免疫功能的影响［J］.中国海洋药物,2004，4:

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