初级检验士考试微生物学检验讲义微生物检验概述Word文件下载.docx

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　　1.快速、准确地提出检验报告。

　　2.检验人员必须有较丰富的微生物学基础知识和熟练、正确的操作技能，必须养成有菌观点和无菌操作的习惯。

　　3.临床微生物学检验必须进行全面质量控制，并参加和接受质量控制考核。

　　4.重视实验室消毒灭菌工作。

　　三、诊断试验的选择原则

　　1.选择有鉴定价值的试验

　　要对两种细菌进行鉴定，须选择一项两种菌呈现截然不同结果的试验，即一种菌呈现阳性（阳性反应的菌株阳性率须大于90%），另一种菌为阴性（阴性反应的菌株阳性率应小于10%），这项试验才有鉴定价值。

否则，就没有鉴定价值。

　　2.选择简易、快速、方便的试验

（1）鉴定一种细菌可能有多种特异的方法，没有必要逐一进行试验，只选择其中一或两种达到目的即可，多选无意义。

如金黄色葡萄球菌凝固酶试验、耐热DNA酶试验、甘露醇分解试验均阳性，只选较简单的凝固酶试验就足够了。

（2）选择操作简便、快速的方法。

　　（3）选用复合培养基，一次操作可同时看几个生化反应，如克氏双糖铁（KIA），动力靛基质脲酶（MIU）等。

　　3.综合考虑试验的敏感性和特异性

　　敏感性=所有阳性结果数／所有感染病人数，试验敏感性越高，假阴性结果就越少。

特异性=阴性结果总数／未感染病人数，特异性越高，假阳性结果越少。

试验的敏感性和特异性是相互联系的，试验的敏感性增加，会使特异性下降，反之亦然。

　　四、标本的采集和运送

　　标本质量的好坏直接影响诊断结果的正误，是确保实验结果准确可靠的前提。

（一）标本采集的一般原则

　　1.早期采集：

病程早期、急性期或症状典型时，而且必须在使用抗生素或其他抗菌药物之前采集。

　　2.无菌采集：

应无外源性污染。

　　在采集无菌标本时，应注意对局部及周围皮肤的消毒；

对于与外界相通的腔道，应由底部取活组织检查；

对于从正常菌群寄生部位（如口腔）采集的标本,应明确检查的目的菌，在进行分离培养时，采用特殊选择性培养基。

　　3.根据目的菌的特性用不同的方法采集

　　4.采集适量标本：

采集量不应过少，而且要有代表性，同时有些标本还要注意在不同时间采集不同部位标本。

　　5.安全采集：

采集标本时不仅要防止皮肤和黏膜正常菌群对标本的污染。

同时也要注意安全，防止传播和自身感染。

（二）标本的处理

　　一些对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和流感嗜血杆菌等应保温并立即送检，而其他所有的标本采集后最好在2h之内送到实验室。

若不能及时送检，标本应置于一定环境中保存，如尸检组织、支气管洗液、心包液、痰、尿等标本应保存在4℃环境中。

脑脊液、滑膜液等则要在25℃保存。

一般情况下，用于细菌培养的标本保存时间不应超过24h。

　　病人标本中可能含有大量致病菌，不管标本运送距离远近，都必须注意安全防护。

标本切勿污染容器的瓶口和外壁，容器必须包装好，防止送检过程中倒翻或碰破流出。

对于烈性传染病标本运送时更要特别严格，必须按规定包装，由专人运送。

　　厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，有时可直接用抽取标本的注射器运送。

　　五、微生物学检查

　　微生物学检查方法

方法

鉴定类型

速度

直接镜检

初步诊断

5～10min

免疫荧光（直接法）

快速诊断

1～2h

乳胶凝集

15～30min

对流免疫电泳

2h

气-液相色谱

鉴定

1.5～2h

DNA探针

快速诊断、鉴定

1～3天

PCR

数小时

微量鉴定系统

3～6h

常规法

确定诊断

数天或以上

　　微生物学检验技术:

　　1.形态学检查

　　2.分离培养技术

　　3.生物化学试验

　　4.血清学试验

　　5.动物试验

　　6.免疫检测技术

　　7.发光分析技术

　　8.鲎试验（检测内毒素）

　　9.分子生物学技术

　　免疫检测技术:

　　微生物学中常用的免疫检测技术包括

　　凝集反应

　　沉淀反应

　　补体结合试验

　　免疫荧光技术

　　酶免疫测定

　　皮肤反应

　　发光分析技术:

　　依赖酶或化学反应释放能量引起发光物质（如鲁米诺、荧光素等）发光的检测方法。

　　具有操作简便、快速、敏感度高、无污染特点。

　　根据发光原理，主要分为生物及化学发光两种方法。

　　鲎试验（检测内毒素）:

　　基本原理是内毒素在碱性金属离子存在下激活鲎试剂中凝固酶原转变为凝固酶，凝固酶使存在于鲎试剂中的凝固蛋白原生成凝固蛋白，产生凝胶。

凝胶的形成速度及其坚固程度与内毒素浓度有关。

鲎试验阳性表明有革兰染色阴性菌或内毒素血症,也可用于生物制品或注射液的内毒素污染检测。

　　分子生物学技术：

　　对生物体的基因组DNA片段及其转录产物进行定性和定量分析，进而对人体状态和疾病作出诊断。

基因诊断技术可克服病原微生物的传统检测方法灵敏度低、特异性低及速度慢等不足之处，并可用于流行病学的大量现场筛查工作。

　　六、临床微生物实验室安全措施和质量保证

（一）实验室感染来源

　　1.在检验操作过程中可能产生危险的微生物气溶胶。

　　2.接触感染材料或使之附着于衣服带出室外以及其他偶然事故如菌液滴落于物体表面，注射时不慎刺破皮肤等。

（二）感染性废弃物的处理

　　1.任何污染材料未经消毒不能拿出实验室。

　　2.液体废弃物必须收集在防漏、未破的容器内，经高浓度的化学消毒剂处理。

　　3.对剩余标本、接种过的培养基、菌种等丢弃前均需适当消毒。

　　4.动物房的废物在处理前及动物笼被清洗前均需消毒，最好经高压蒸气灭菌。

　　5.对于任何有污染的锐器如针头、注射器、玻片等在处理前不要用手接触。

　　（三）微生物实验室的室内质控

　　1.对细菌检验人员的要求；

　　2.操作手册；

　　3.仪器设备的功能监测；

　　4.培养基的质量控制；

　　5.试剂、染色液以及抗生素的质量控制；

　　6.标本检验的质量控制；

　　7.标准菌株的来源和保存及室内质量的全面控制。

　　标本采集的一般原则有

　　A、早期采集

　　B、无菌采集

　　C、根据目的菌的特性用不同的方法采集

　　D、采集适量标本

　　E、安全采集

【正确答案】ABCDE

　　关于标本处理的说法错误的是

　　A、标本采集后应立即送检

　　B、痰、尿等标本应保存在4℃环境中

　　C、细菌培养的标本保存时间可超过24h

　　D、厌氧性标本可用抽取标本的注射器送检

　　E、脑脊液标本要在25℃保存

【正确答案】C

　　室内质量控制的内容包括

　　A、实验室手册

　　B、常用仪器设备的检测

　　C、培养基的质量控制

　　D、试剂的质量控制

　　E、全体技术人员的水平