牛奶的成分检测可编辑修改word版Word下载.docx
《牛奶的成分检测可编辑修改word版Word下载.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《牛奶的成分检测可编辑修改word版Word下载.docx(19页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
乳糖
4.9
≤
酸度°
T
13-16
杂质
4
度≤
温度
8
1.2.3卫生指标
项目指标
细菌cfu/ml≤50
耐热芽孢个/ml≤10
芽孢个/ml≤100
有机氯农药mg/ml≤0.02
铅mg/ml≤0.05
汞mg/ml≤0.01
锡mg/ml≤2.3
铬mg/ml≤2.3
无机砷mg/ml≤0.05
硝酸盐(以硝酸钠计
mg/ml≤
1.2.4其他要求
酒精实验阴性v/v
75%
煮沸前后酸
度差2
°
抗生素不的检出
掺假、杂实
验
无任何掺假、杂
煮沸实验
呈均匀一致的胶态液体、无絮片、无凝块
2原奶感官检验
2.1感官的检验:
2.1.1色泽:
取样过滤,观察样品是否为乳白色或微带黄色,无明显其他颜色;
2.1.2滋气味:
取过滤后的样品100ml放入三角瓶中置于电炉上加热煮沸,闻其是否有奶香味,无其他异味(酸味,香精味,涩味,苦味,药味,咸味臭味)。
待降温至15℃时品尝,是否稍带甜味,无其他异味。
2.1.3组织状态:
将样品倒入烧杯中,静置5分钟,观察有无沉淀、凝块、杂质等。
3理化指标的检验
3.1脂肪、蛋白质、全乳固体的检测a.仪器:
乳成分分析仪(FT120)b.检测方法:
取约50ml混匀的样品倒入烧杯中,预热至35℃—40℃,将样品放在牛乳全组分分析仪吸样管下,选择相应程序,点击检测键,仪器开始自动检测,待显示屏出现检测结果时,即可读数。
记录脂肪、蛋白质、全乳固体的数值。
3.2乳糖的检验
3.3酸度的检验
3.3.1原理:
牛乳的酸度一般是以中和100毫升牛乳所消耗的0.1N氢氧化钠的毫升数来表示,称为°
T,此为滴定酸度,简称为酸度,也可以乳酸的百分含量为牛乳的酸度。
RCOOH+NAOHRCOONA+H2O
此中和反应用酚酞作指示剂,它在PH约8.2时,就确定了游离酸中的终点。
无色的酚酞与碱作用时,生成酚酞盐,同时失去一分子水,引起醌型重排而呈现红色。
3.3.2仪器与试剂
(1)250毫升锥形瓶
(2)1毫升刻度吸管
(3)5毫升微量滴定管
(4)50毫升烧杯
(5)60毫升滴瓶
(6)10毫升吸管
(7)0.1NNaOH标准溶液:
用小烧杯在粗天平上称取固体氢氧化钠4克,加水100毫升,氢氧化钠全部溶解,将溶液倒入另一清洁试剂瓶中,用蒸馏水稀释至1000毫升,以橡皮塞塞瓶口,充分摇匀。
将化学纯邻苯二甲酸氢钾于120℃烘约1小时至恒重,冷却25分钟,称取0.3-0.4克,(精确到0.0001克)于250毫升锥形
瓶中,加入100毫升水溶液,加三滴酚酞指示剂,用以上配好的氢氧化钠标准溶液滴定至微红色,半分钟不褪色为止。
按下式计算氢氧化钠标准溶液的当量浓度。
N=W/(V×
0.2042)
式中:
N:
氢氧化钠标准溶液的当量浓度。
V:
滴定时消耗氢氧化钠的毫升数。
W:
邻苯二甲酸氢钾的克数。
0.2042:
与1NNaOH溶液l毫升相当的邻苯二甲酸氢钾的克数。
(8)0.5%酚酞乙醇溶液
3.3.3方法:
在250毫升三角瓶中注入lOml牛乳,加20ml蒸馏水,加0.5%酚酞指示液0.5m1,小心混匀,用0.1N氢氧化钠标准溶液滴定,直至微红色在1分钟内不消失为止。
消耗0.1N氢氧化钠标准溶液的毫升数乘以l0,即得酸度。
T°
=V×
l0
3.4杂质度与温度的检验
3.4.1杂质度的检验:
a.仪器:
旋片式真空泵、抽滤瓶、真空瓶、24mm布氏漏斗、杂质度棉板。
b.方法
将杂质度棉板放入布氏漏斗中,插上真空泵电源,将加热至60℃的500ml奶样,全部通过棉板抽入抽滤瓶中,并用已过滤的水冲洗盛放奶样的三角瓶,再次通过棉板抽入抽滤瓶中,取下棉板烘干与标准板对照,即可读出过滤板上的杂质量。
当过滤板上的杂质含量介于两个级别之间时,判定为杂质含量较多的级别。
3.4.2收奶温度的检验:
取样时,将校准过的温度计插入奶罐中经搅拌均匀的牛奶中,待温度计温度恒定时,读取读数。
4卫生指标的检验
4.1菌落总数的检验
落总数是指食品检样经过处理,在一定条件下培养后(如培养基成分、培养温度和时间、PH、需氧性质等),所得1g或1ml检样中所含细菌菌落的总数。
本方法规定的培养条件下所
得结果,只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧的菌落总数。
菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志,也可以应用此方法观察细菌在食品中繁殖的动态,以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
4.1.1设备和材料
(1)恒温培养箱:
36±
1℃
(2)高压蒸汽灭菌锅
(3)恒温水浴锅:
46±
1℃(4)天平:
0~500g
(5)电炉
(6)吸管:
1ml、10ml和25ml,标有0.1ml单位的刻度。
(7)三角瓶:
容量为250ml、500ml(8)平皿:
皿底直径为9cm
(9)试管:
15×
150mm(10)酒精灯
(11)试管架、试管筐
(12)灭菌刀或剪刀、灭菌镊子
(13)酒精棉球:
75%酒精(14)记号笔
4.1.2培养基和试剂
(1)营养琼脂培养基:
购买制好的营养琼脂,按说明分装于
500ml三角瓶中,在121℃下高压灭菌15分钟。
(2)生理盐水:
称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中,高压灭菌121℃、15分钟。
4.1.3检样程序
做成几个适当的稀释倍数液检样
选择2-3个适宜稀释度各以1ml之量加入灭菌平皿中
每皿加入适量琼脂
1℃48±
2h
菌落计数数报告
4.1.4操作步骤
(1)检样稀释及培养
a.将检样摇匀,以无菌操作将检样25g(或25ml)放于含有225ml灭菌生理盐水三角瓶中,充分摇匀,作为1:
10的稀释液。
用1ml灭菌吸管吸取1:
10的稀释液1ml,沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管中(注意吸管尖不要触及管内稀释液)
,振摇试管混匀,作为1:
100的稀释液;
按上述操作顺序,做10倍递增稀释液,如此每递增稀释一次,即换用1支1ml灭菌吸管。
b.检样根据实际情况选择适当的稀释倍数,用1ml灭菌吸管分别移取lml适当稀释度的样液于灭菌平皿中,每个稀释度做两个平皿。
c.稀释液移入平皿后,应及时将凉至46℃的营养琼脂注入平皿约15ml,并转动平皿使样液与琼脂混匀;
同时将营养琼脂注入加有1ml灭菌生理盐水的平皿内做空白对照。
d.待营养琼脂凝固后,翻转平板。
置于36±
1℃的培养箱内培养48±
2h,取出计数。
4.1.5计数规则
(1)平板菌落数的选择
选取菌落数在30-300之间的平板作为菌落总数测定标准。
一个稀释度使用两个平板,应采用两个平板的平均数,若其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;
若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。
平板内如有链状菌落生长时(菌落之间无明显界限),如仅有一条链,可视为一个菌落;
如有几个不同来源的几条链,则应将每条链作为一个菌落计。
(2)稀释度的选择
a.应选择平均菌落数在30-300之间的稀释度,乘以稀释倍数,报告之。
b.若有两个稀释度,其生长的菌落数均在30-300之间,则视二者之比来决定,若其比值小于2,报告其平均数,若大于2,则报告其中较小的数字。
c.若所有稀释度的平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告。
d.若所有稀释度的菌落数均小于30,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告。
e若所有稀释度均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数报告。
f.若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300之间,其中一
部分大于300或小于30时,则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告。
4.1.6菌落数的报告及报告方式
(1)报告
菌落数在100以内时,按其实有数报告;
大于100时,采用二位有效数字,在二位有效数字后面的数值以四舍五入的方法计算,用10的指数来表示。
(2)报告方式
数
稀释倍数平均菌落
例次
10-1
10
-2
1
0-3
两稀释倍数
之
比
菌落总数个
/g
或个
/ml
报告方式个/g
多不可计
16
2
—
1640
04
1.6×
29
5
6
1.6
3775
3.8×
3
27
2.2
2710
2.7×
46
50
13
5130
00
5.1×
05
11
270
02
<1×
<10
7
30
3050
3.1×
4.2有毒有害物质的检测
4.2.1有机氯农药残留量的测定
a气相色普法
1.仪器与试剂
(1)电子捕获坚定器、氚放射源
(2)色谱柱:
长1.2M,内径3mm
(3)固定液:
3%OV-17+3%QF-1
(4)担体:
ChromosorbW800-100目
(5)汽化室温度:
230℃;
色谱柱温度:
186℃;
鉴定器温度:
190℃
(6)载气:
N2,柱前压2.2kg,流速92ml/min
(7)极化电压36V;
记录器流速:
5mm/min2.操作方法
(1)标准曲线的制备
六六六——标准曲线:
取a-六六六,r-六六六每ml0.2ug,b-
六六六每ml1ug,q-六六六每ml0.5ug混合标准液
1、3、5、7、10ul,分别进样,制造标准曲线。
DDT及其异构体标准曲线绘制:
取O,P-DDT、P′P-DDD、P,P′-DDE、P,P′-DDT每ml含有1ug的混合标准液分别进样;
1、3、5、7、10ul,制作标准曲线。
(2)测定:
将净化浓缩至一定体积的样液进样5ul,测得的峰高不应超过标准曲线范围,否则需要减少进样量或将样品稀释后重测。
(3)计算:
从色谱图中量出被测样峰高值,查标准曲线,找出相当农药的量,计算
有机农药(mg/kg)=V/W×
C/V1
式中:
V——样品提取液浓缩体积mlV1——进色谱仪浓缩体积ml
C——相当于标准浓度ug
W——相当于原来样品重量g
4.2.2硝酸盐、亚硝酸盐的测定
1.固体试剂法:
(1)试剂:
亚硝酸盐,硝酸盐检测专用药粉(哈尔滨专利)
(2)方法:
取亚硝酸盐,硝酸盐检测专用试剂(哈尔滨试剂)二耳勺(0.04-0.05g)倒入试管中,加入被检奶样1ml,振荡溶解1-2min;
(3)观察判定:
正常奶无色;
含亚硝酸盐,硝酸盐奶,因含量不同颜色呈微粉一水粉一粉
色
(4)注意事项:
试管用前要用不含亚硝酸盐水刷净,以防止影响判定结果;
低温季节时,加奶样后应加温观察;
注意本试剂出厂日期,本品保质期一年;
试剂应干燥避光贮存,用后马上把盖关严,防透空气。
4.2.3黄曲霉毒素的测定
1原理
标准溶液和样品试液加入各自板孔,游离的黄曲霉毒素M1与微孔中包被的黄曲霉毒素M1抗体结合,没有结合的物质在洗涤中被清除。
再加入黄曲霉毒素M1酶标记物,将没有结合的抗体位点全部覆盖,结合的酶标记物通过显色液显示出来。
最后加入终止液,用酶标仪在450nm测定吸光度值,吸光度值与样品中的黄曲霉毒素M1含量成反比。
2试剂和溶液
(1)本实验所用试剂均为分析纯,水为去离子水;
(2)黄曲霉毒素M1试剂盒[1]:
最低检出限不大于
0.02μg/kg;
(3)微孔板;
(4)黄曲霉毒素M1标准溶液:
浓度范围0~0.10μg/kg;
(5)酶标记物浓缩液;
(6)酶标记物稀释用缓冲液;
(7)显色剂;
(8)柠檬酸缓冲液;
(9)终止液;
(10)样品稀释缓冲液;
(11)洗板浓缩酶标记物工作液:
实验前计算用量,用酶标记物稀释用缓冲液(4.1.4)将其浓缩液(4.1.3)以1:
100稀释,切勿涡旋混合,配制后放回试剂盒放置4h以上,备用。
(12)显色反应液:
显色剂(4.1.5)用柠檬酸缓冲液
(4.1.6)以1:
10稀释,在使用前配制,避光保存。
(13)洗板工作液:
洗板浓缩液(4.1.9)用水以1:
20稀释,备用。
(14)0.36mol/L亚铁氰化钾溶液:
称取15.2gK4[Fe(CN)6]·
3H2O,用水溶解、定容至100mL。
(15)1.04mol/L硫酸锌溶液:
称取29.9gZnSO4·
7H2O,
用水溶解、定容至100mL。
液;
3仪器和设备
(1)微孔板酶标仪(带450nm滤光片)。
(2)天平:
最小感量0.01g。
(3)冷冻离心机:
最大转速不小于3000rpm。
(4)旋涡混合器。
(5)连续可调移液器及配套吸头:
5μL~50μL、20μL~200μL、200μL~1000μL。
(6)脱脂棉签。
(7)实验室常规玻璃器皿。
4分析步骤
(1)样品前处理
生鲜乳:
将待测样品摇匀,平行称取两份5.0g试样(精确到0.1g)到10mL离心管中,2oC~8oC以3000rpm的转速离心10min,用脱脂棉签除去上层脂肪。
加入150μL亚铁氰化钾溶液(4.5),短暂涡旋混合后加入150μL硫酸锌溶液
(4.6),涡旋振荡3min。
10oC~15oC以3000rpm的转速离心10min,上清液供测试用。
(2)测试程序
a以下操作均须在20oC~25oC温度下进行。
b取出试剂盒,放置1h以上,使其温度恢复到20oC~25oC。
将足够标准和样品所用数量的孔条插入微孔架,并记录标准和样品对应的位置。
c加100μL标准溶液(4.1.2)和已处理好的样品试液到各自微孔中,孵育60min。
d倒除微孔中的液体,注入洗板工作液(4.4)约300μL,重复洗涤5次,最后在吸水纸上轻轻拍干。
e在所有微孔中加入100μL酶标记物工作液(4.2),孵育
20min。
f重复6.2.3步骤。
g在所有微孔中加入100μL显色反应液(4.3),孵育
30min。
h在所有微孔中加入50μL终止液(4.1.7),混匀后60min
内在450nm处测定吸光度值。
5分析结果计算和表述
(1)标准工作曲线绘制
以标准溶液的浓度值(C)为横坐标,相对吸光度值
(B/B0)为纵坐标,在半对数坐标纸上绘制标准工作曲线。
相对吸光度值(%)=B/B0×
100
(1)
B——标准(或样品)的吸光度值;
B0——空白(浓度为0的标准溶液)的吸光度值。
(2)结果计算
a液态乳中黄曲霉毒素M1的含量按式
(2)计算:
X1=k1·
Cx
(2)
X1——液态乳中黄曲霉毒素M1的含量,μg/kg;
k1——液态乳在前处理过程中的稀释倍数。
Cx——由测试用上清液的相对吸光度值查标准工作曲线得到的黄曲霉毒素M1的浓度,ng/mL;
4.3微量元素的测定
4.3.1重金属含量的测定
a铅含量的测定:
双硫腙比色法
(1)原理
样品经消化后,在pH值在8-9时,铅离子与双硫腙生成红色螯合物,可被三氯甲烷、四氯化碳等有机溶剂萃取,颜色的深浅与铅离子浓度成正比。
(2)试剂
①酚红指示剂:
溶解0.1酚红于100ml95%的乙醇中;
②20%柠檬酸铵溶液:
取50g柠檬酸铵,溶于100ml水中,加2滴酚红指示剂,用1:
1氨水调至微红色,置于分液漏斗中,用双硫腙三氯甲烷溶液分次抽提,每次10-20ml,至溶剂层绿
色不变为止。
弃去双硫腙三氯甲烷层,用三氯甲烷洗2次,每次5ml,弃去三氯甲烷层,加水稀释至250ml;
③20%盐酸羟胺溶液:
取20g盐酸羟胺。
溶于50ml水中,加2滴酚红指示剂,用1:
1氨水调至PH值为8.5-9.0,用试剂②处理除铅和除去残余双硫腙,盐酸化,加水至100ml;
④10%氰化钾溶液:
取10g氰化钾,溶于100ml水中;
⑤0.05%双硫腙储备液:
取精制过的双硫腙0.05g,加100ml三氯甲烷溶解,储备与冰箱中;
⑥铅标准溶液:
精密称取0.1598g硝酸铅,加10ml1%硝酸,溶解后,移入100ml容量瓶中,加水稀释至刻度;
⑦双硫腙使用液:
吸取1.0ml双硫腙储备液,加三氯甲烷至10ml,混匀,用1cm比色杯,以三氯甲烷调节仪器零点,于波长510nm处测吸光度,用下式算出配制100ml双硫腙使用液所需的双硫腙储备液的毫升数:
V=10(2-㏒70)/A=1.55/A;
⑧标准使用液:
吸取1.0ml铅标准溶液于100ml容量瓶中,加水稀释至刻度。
(3)操作方法
取适量样品,用硝酸-硫酸法消化或干法灰化后定容至50或100ml,吸取10.0ml消化液和相同的试剂空白液,分别置于125ml分液漏斗中,各加水至20ml。
吸取
0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml铅标准使用液,分别置于
125ml分液漏斗中,各加1%硝酸溶液至20ml。
于样品消化液、试剂空白液和铅标准液各加2.0ml20%柠檬酸铵溶液,1.0ml20%盐酸羟胺溶液和2滴酚红指示剂,用1:
1氨水调至红色,加10.0ml双硫腙溶液,剧烈振摇1min,静置分层后,三氯甲烷层经脱脂棉滤入1cm比色杯中,以零管
调节零点,于波长510nm处测的吸光度,绘制标准曲线,在曲线上查出样品消化液和试剂空白液中铅的含量。
(4)计算
铅的含量(mg/l)=V1(A1-A2)/W*V2
A1——测定用样品消化液中铅的含量ugA2——试剂空白液中铅的含量ug
W——样品体积ml
V1——样品消化液总体积mlV2——测定用样品消化液体积mlb汞含量的测定:
汞离子在酸性溶液中与双硫腙生成橙色络合物,用氯仿萃取比色。
①20%盐酸羟胺溶液
②双硫腙使用液
③汞标准使用液:
准确称取0.135g于干燥器中干燥过的二氯化汞,加0.5mol/l硫酸使其溶解后,移入100ml容量瓶中,定容至刻度。
(3)操作方法:
称取适量样品,消化后加水至总体积为150ml,去全量消化液用锥形瓶在电炉上煮沸10min,除去二氧化氮,冷却,于样品消化液及空白液中各加5%高锰酸钾液至溶液呈紫红色,然后再加20%盐酸羟胺溶液至红色褪去,加2滴酚酞指示剂,用氨水调痔PH值为1-2,定量转移至125ml分液漏斗中。
吸取0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml汞标准使用溶液,分别置于125ml分液漏斗中,各加10ml5%硫酸,各加水至40ml,混匀。
再各加1ml20%盐酸羟胺溶液,放置20分钟,并时时振摇。
于上述个分液漏斗中各加5.0ml双硫腙使用液,剧烈振摇2分钟,静置分层后,经脱脂棉将溶剂层入1cm比色杯中,以氯仿调节零点,在波长490nm处测吸光度,标准管吸光度减去零管吸光度,绘制标准曲线。
计算如下:
Hg(mg/kg)=(A1-A2)×
100/W×
1000=A1-A2/10W
A1——样品消化液中汞的含量ugA2——试剂空白液中汞的含量ug
W——样品重量g
同样用比色法可测出铬、锡等金属的含量。
4.3.2非金属元素的检测
(1)无机砷的检验
5其他要求
5.1酒精实验
酒精有脱水作用,当给牛奶中加入酒精后,牛奶酪蛋白胶粒周围水化层被脱掉,胶粒变成只带负电荷的不稳定状态。
当奶的酸度增高时,H+与负电荷作用,胶粒变为电中性而发生沉淀。
奶的酸度与引起酪蛋白沉淀的酒精浓度之间存在着一定的关系,故可利用不同浓度的酒精检测奶样,以是否结絮来判定奶的酸度。
(1)仪器:
平皿,直径80-90mm量筒,250ml吸管,2ml酒精计温度计
(2)试剂:
所有试剂均应为分析纯;
实验用水至少应是蒸馏水。
酒精:
根据需要用分析纯中性乙醇配制75º
的酒精。
(注:
如酒精呈酸性,可用0.1mol/l或1