牛奶的成分检测可编辑修改word版Word下载.docx

1、乳糖4.9酸度T13-16杂质4度温度81.2.3卫生指标项目 指标细菌 cfu/ml 50耐热芽孢 个/ml 10芽孢 个/ml 100有机氯农药 mg/ml 0.02铅 mg/ml 0.05汞 mg/ml 0.01锡 mg/ml 2.3铬 mg/ml 2.3无机砷 mg/ml 0.05硝酸盐（以硝酸钠计mg/ml1.2.4其他要求酒精实验阴性 v/v75%煮沸前后酸度差 2抗生素 不的检出掺假、杂实验无任何掺假、杂煮沸实验呈均匀一致的胶态液体、无絮片、无凝块2原奶感官检验2.1 感官的检验：2.1.1色泽：取样过滤，观察样品是否为乳白色或微带黄色， 无明显其他颜色；2.1.2滋气味：取过滤

2、后的样品 100 ml 放入三角瓶中置于电炉上加热煮沸，闻其是否有奶香味，无其他异味（酸味，香精味，涩味，苦味，药味，咸味 臭味）。待降温至 15时品尝，是否稍带甜味，无其他异味。2.1.3组织状态：将样品倒入烧杯中，静置 5 分钟，观察有无沉淀、凝块、杂质等。3理化指标的检验3.1脂肪、蛋白质、全乳固体的检测a.仪器：乳成分分析仪（FT120） b.检测方法：取约 50 ml 混匀的样品倒入烧杯中，预热至 3540， 将样品放在牛乳全组分分析仪吸样管下，选择相应程序，点击检测键，仪器开始自动检测，待显示屏出现检测结果时，即可读数。记录脂肪、蛋白质、全乳固体的数值。3.2乳糖的检验3.3酸度的

3、检验3.3.1原理：牛乳的酸度一般是以中和 100 毫升牛乳所消耗的 0.1N 氢氧化钠的毫升数来表示，称为T，此为滴定酸度，简称为酸度， 也可以乳酸的百分含量为牛乳的酸度。RCOOH+NAOH RCOONA+H2O此中和反应用酚酞作指示剂，它在 PH 约 8.2 时，就确定了游离酸中的终点。无色的酚酞与碱作用时，生成酚酞盐，同时失去一分子水，引起醌型重排而呈现红色。3.3.2仪器与试剂（1）250 毫升锥形瓶（2）1 毫升刻度吸管（3）5 毫升微量滴定管（4）50 毫升烧杯（5）60 毫升滴瓶（6）10 毫升吸管（7）0.1NNaOH 标准溶液：用小烧杯在粗天平上称取固体氢氧化钠 4 克，加

4、水 100 毫升，氢氧化钠全部溶解，将溶液倒入另一清洁试剂瓶中，用蒸馏水稀释至 1000 毫升，以橡皮塞塞瓶口，充分摇匀。将化学纯邻苯二甲酸氢钾于 120烘约 1 小时至恒重，冷却25 分钟，称取 0.3-0.4 克，（精确到 0.0001 克）于 250 毫升锥形瓶中，加入 100 毫升水溶液，加三滴酚酞指示剂，用以上配好的氢氧化钠标准溶液滴定至微红色，半分钟不褪色为止。按下式计算氢氧化钠标准溶液的当量浓度。N= W/（V0.2042）式 中 ： N：氢氧化钠标准溶液的当量浓度。V：滴定时消耗氢氧化钠的毫升数。W：邻苯二甲酸氢钾的克数。0.2042：与 1NNaOH 溶液 l 毫升相当的邻苯

5、二甲酸氢钾的克数。（8）0.5酚酞乙醇溶液3.3.3方法：在 250 毫升三角瓶中注入 lOml 牛乳，加 20ml 蒸馏水，加0.5酚酞指示液 0.5m1，小心混匀，用 0.1N 氢氧化钠标准溶液滴定，直至微红色在 1 分钟内不消失为止。消耗 0.1N 氢氧化钠标准溶液的毫升数乘以 l0，即得酸度。TV l03.4杂质度与温度的检验3.4.1杂质度的检验：a.仪器：旋片式真空泵、抽滤瓶、真空瓶、24mm 布氏漏斗、杂质度棉板。b.方法将杂质度棉板放入布氏漏斗中，插上真空泵电源，将加热至60的 500ml 奶样，全部通过棉板抽入抽滤瓶中，并用已过滤的水冲洗盛放奶样的三角瓶，再次通过棉板抽入抽滤

6、瓶中，取下棉板烘干与标准板对照，即可读出过滤板上的杂质量。当过滤板上的杂质含量介于两个级别之间时，判定为杂质含量较多的级别。3.4.2收奶温度的检验：取样时，将校准过的温度计插入奶罐中经搅拌均匀的牛奶中， 待温度计温度恒定时，读取读数。4卫生指标的检验4.1菌落总数的检验落总数是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度和时间、PH、需氧性质等），所得 1g 或1ml 检样中所含细菌菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧的菌落总数。菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志，也可以应用此方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被

7、检样品进行卫生学评价时提供依据。4.1.1设备和材料（1）恒温培养箱：361 （2）高压蒸汽灭菌锅（3）恒温水浴锅：461 （4）天平：0500g（5）电炉（6）吸管：1ml、10ml 和 25ml，标有 0.1ml 单位的刻度。（7）三角瓶：容量为 250ml、500ml （8）平皿：皿底直径为 9cm（9）试管：15150mm （10）酒精灯（11）试管架、试管筐（12）灭菌刀或剪刀、灭菌镊子（13）酒精棉球：75%酒精（14）记号笔4.1.2培养基和试剂（1）营养琼脂培养基：购买制好的营养琼脂，按说明分装于500ml 三角瓶中，在 121下高压灭菌 15 分钟。（2）生理盐水：称取 8.

8、5g 氯化钠溶于 1000ml 蒸馏水中，高压灭菌 121、15 分钟。4.1.3检样程序做成几个适当的稀释倍数液检 样选择 2-3 个适宜稀释度各以 1ml 之量加入灭菌平皿中每皿加入适量琼脂1 482h菌落计数数报 告4.1.4操作步骤（1）检样稀释及培养a.将检样摇匀，以无菌操作将检样 25g（或 25ml）放于含有225ml 灭菌生理盐水三角瓶中，充分摇匀，作为 1:10 的稀释液。用 1ml 灭菌吸管吸取 1:10 的稀释液 1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml 灭菌生理盐水的试管中（注意吸管尖不要触及管内稀释液），振摇试管混匀，作为 1:100 的稀释液；按上述操作顺序，做10 倍递增

9、稀释液，如此每递增稀释一次，即换用 1 支 1ml 灭菌吸管。b.检样根据实际情况选择适当的稀释倍数，用 1ml 灭菌吸管分别移取 lml 适当稀释度的样液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。c.稀释液移入平皿后，应及时将凉至 46的营养琼脂注入平皿约 15ml，并转动平皿使样液与琼脂混匀；同时将营养琼脂注入加有 1ml 灭菌生理盐水的平皿内做空白对照。d.待营养琼脂凝固后，翻转平板。置于 361的培养箱内培养 482h，取出计数。4.1.5计数规则（1）平板菌落数的选择选取菌落数在 30-300 之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板的平均数，若其中一个平板有

10、较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘 2 以代表全皿菌落数。平板内如有链状菌落生长时（菌落之间无明显界限），如仅有一条链，可视为一个菌落；如有几个不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。（2）稀释度的选择a.应选择平均菌落数在 30-300 之间的稀释度，乘以稀释倍数，报告之 。b.若有两个稀释度，其生长的菌落数均在 30-300 之间，则视二者之比来决定，若其比值小于 2，报告其平均数，若大于2，则报告其中较小的数字 。c.若所有稀释度的平均菌落数均大于 300，则应

11、按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告 。d.若所有稀释度的菌落数均小于 30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告 。e 若所有稀释度均无菌落生长，则以小于 1 乘以最低稀释倍数报告 。f.若所有稀释度的平均菌落数均不在 30-300 之间，其中一部分大于 300 或小于 30 时，则以最接近 30 或 300 的平均菌落数乘以稀释倍数报告 。4.1.6菌落数的报告及报告方式（1）报告菌落数在 100 以内时，按其实有数报告；大于 100 时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值以四舍五入的方法计算，用 10 的指数来表示。（2）报告方式数稀释倍数平均菌落例次10-110-2

12、10-3两稀释倍数之比菌落总数 个/g或个/ml报告方式 个/g多不可计1621640041.629561.637753.83272.227102.74650135130005.105112700211073030503.14.2有毒有害物质的检测4.2.1有机氯农药残留量的测定a 气相色普法1.仪器与试剂（1）电子捕获坚定器、氚放射源（2）色谱柱：长 1.2M，内径 3mm（3）固定液：3%OV-17+3%QF-1（4）担体：ChromosorbW800-100 目（5）汽化室温度：230；色谱柱温度：186；鉴定器温度：190（6）载气：N2，柱前压 2.2kg,流速 92ml/min（7

13、） 极化电压 36V；记录器流速：5mm/min 2.操作方法（1）标准曲线的制备六六六标准曲线：取 a-六六六，r-六六六每 ml0.2ug,b-六六六每 ml1ug，q-六六六每 ml0.5ug 混合标准液1、3、5、7、10ul，分别进样，制造标准曲线。DDT 及其异构体标准曲线绘制：取 O，P-DDT、PP- DDD、P，P-DDE、P，P-DDT 每 ml 含有 1ug 的混合标准液分别进样；1、3、5、7、10ul，制作标准曲线。（2）测定：将净化浓缩至一定体积的样液进样 5ul，测得的峰高不应超过标准曲线范围，否则需要减少进样量或将样品稀释后重测。（3）计算：从色谱图中量出被测样

14、峰高值，查标准曲线，找出相当农药的量，计算有机农药（mg/kg）=V/WC/V1式中：V样品提取液浓缩体积 ml V1进色谱仪浓缩体积 mlC相当于标准浓度 ugW相当于原来样品重量 g4.2.2硝酸盐、亚硝酸盐的测定1.固体试剂法：（1）试剂：亚硝酸盐，硝酸盐检测专用药粉（哈尔滨专利）（2）方法：取亚硝酸盐，硝酸盐检测专用试剂（哈尔滨试剂）二耳勺（0.04-0.05g）倒入试管中，加入被检奶样 1ml，振荡溶解 1-2min；（3）观察判定：正常奶无色；含亚硝酸盐，硝酸盐奶，因含量不同颜色呈微粉一水粉一粉色（4）注意事项：试管用前要用不含亚硝酸盐水刷净，以防止影响判定结果； 低温季节时，加奶

15、样后应加温观察；注意本试剂出厂日期，本品保质期一年；试剂应干燥避光贮存，用后马上把盖关严，防透空气。4.2.3黄曲霉毒素的测定1原理标准溶液和样品试液加入各自板孔，游离的黄曲霉毒素 M1 与微孔中包被的黄曲霉毒素 M1 抗体结合，没有结合的物质在洗涤中被清除。再加入黄曲霉毒素 M1 酶标记物，将没有结合的抗体位点全部覆盖，结合的酶标记物通过显色液显示出来。最后加入终止液，用酶标仪在 450nm 测定吸光度值，吸光度值与样品中的黄曲霉毒素 M1 含量成反比。2试剂和溶液（1）本实验所用试剂均为分析纯，水为去离子水；（2）黄曲霉毒素 M1 试剂盒1：最低检出限不大于0.02g/kg；（3）微孔板；

16、（4）黄曲霉毒素 M1 标准溶液：浓度范围 00.10g/kg；（5）酶标记物浓缩液；（6）酶标记物稀释用缓冲液；（7）显色剂；（8）柠檬酸缓冲液；（9）终止液；（10）样品稀释缓冲液；（11）洗板浓缩酶标记物工作液：实验前计算用量，用酶标记物稀释用缓冲液（4.1.4）将其浓缩液（4.1.3）以 1：100 稀释，切勿涡旋混合，配制后放回试剂盒放置 4h 以上，备用。（12）显色反应液：显色剂（4.1.5）用柠檬酸缓冲液（4.1.6）以 1：10 稀释，在使用前配制，避光保存。（13）洗板工作液：洗板浓缩液（4.1.9）用水以 1：20 稀释，备用。（14）0.36mol/L 亚铁氰化钾溶液：

17、称取 15.2g K4Fe（CN） 63H2O，用水溶解、定容至 100mL。（15）1.04mol/L 硫酸锌溶液：称取 29.9g ZnSO47H2O,用水溶解、定容至 100mL。液；3仪器和设备（1）微孔板酶标仪（带 450nm 滤光片）。（2）天平：最小感量 0.01g。（3）冷冻离心机：最大转速不小于 3000rpm。（4）旋涡混合器。（5）连续可调移液器及配套吸头：5L50L、20L200L、200L1000L。（6）脱脂棉签。（7）实验室常规玻璃器皿。4分析步骤（1）样品前处理生鲜乳：将待测样品摇匀，平行称取两份 5.0g 试样（精确到 0.1g）到 10mL 离心管中，2 o

18、C8 oC 以 3000rpm 的转速离心 10min，用脱脂棉签除去上层脂肪。加入 150L 亚铁氰化钾溶液（4.5），短暂涡旋混合后加入 150L 硫酸锌溶液（4.6），涡旋振荡 3min。10oC15 oC 以 3000rpm 的转速离心 10min，上清液供测试用。（2）测试程序a 以下操作均须在 20 oC25 oC 温度下进行。b 取出试剂盒，放置 1h 以上，使其温度恢复到 20 oC25 oC。将足够标准和样品所用数量的孔条插入微孔架，并记录标准和样品对应的位置。c 加 100L 标准溶液（4.1.2）和已处理好的样品试液到各自微孔中，孵育 60min。d 倒除微孔中的液体，注

19、入洗板工作液（4.4）约 300L， 重复洗涤 5 次，最后在吸水纸上轻轻拍干。e 在所有微孔中加入 100L 酶标记物工作液（4.2），孵育20min。f 重复 6.2.3 步骤。g 在所有微孔中加入 100L 显色反应液（4.3），孵育30min。h 在所有微孔中加入 50L 终止液（4.1.7），混匀后 60min内在 450nm 处测定吸光度值。5分析结果计算和表述（1）标准工作曲线绘制以标准溶液的浓度值（C）为横坐标，相对吸光度值（B/B0）为纵坐标，在半对数坐标纸上绘制标准工作曲线。相对吸光度值（%）= B/B0 100 （1） B 标准（或样品）的吸光度值；B0 空白（浓度为 0

20、 的标准溶液）的吸光度值。（2）结果计算a 液态乳中黄曲霉毒素 M1 的含量按式（2）计算： X1 = k1Cx （2）X1 液态乳中黄曲霉毒素 M1 的含量，g/kg； k1 液态乳在前处理过程中的稀释倍数。Cx 由测试用上清液的相对吸光度值查标准工作曲线得到的黄曲霉毒素 M1 的浓度，ng/mL；4.3微量元素的测定4.3.1重金属含量的测定a 铅含量的测定：双硫腙比色法（1）原理样品经消化后，在 pH 值在 8-9 时，铅离子与双硫腙生成红色螯合物，可被三氯甲烷、四氯化碳等有机溶剂萃取，颜色的深浅与铅离子浓度成正比。（2）试剂酚红指示剂：溶解 0.1 酚红于 100ml95%的乙醇中；2

21、0%柠檬酸铵溶液：取 50g 柠檬酸铵，溶于 100ml 水中， 加 2 滴酚红指示剂，用 1：1 氨水调至微红色，置于分液漏斗中， 用双硫腙三氯甲烷溶液分次抽提，每次 10-20ml，至溶剂层绿色不变为止。弃去双硫腙三氯甲烷层，用三氯甲烷洗 2 次，每次 5ml，弃去三氯甲烷层，加水稀释至 250ml；20%盐酸羟胺溶液：取 20g 盐酸羟胺。溶于 50ml 水中， 加 2 滴酚红指示剂，用 1：1 氨水调至 PH 值为 8.5-9.0，用试剂处理除铅和除去残余双硫腙，盐酸化，加水至 100ml；10%氰化钾溶液：取 10g 氰化钾，溶于 100ml 水中；0.05%双硫腙储备液：取精制过的

22、双硫腙 0.05g，加100ml 三氯甲烷溶解，储备与冰箱中；铅标准溶液：精密称取 0.1598g 硝酸铅，加 10ml1%硝酸， 溶解后，移入 100ml 容量瓶中，加水稀释至刻度；双硫腙使用液：吸取 1.0ml 双硫腙储备液，加三氯甲烷至10ml，混匀，用 1cm 比色杯，以三氯甲烷调节仪器零点，于波长 510nm 处测吸光度，用下式算出配制 100ml 双硫腙使用液所需的双硫腙储备液的毫升数：V=10（2-70）/A=1.55/A；标准使用液：吸取 1.0ml 铅标准溶液于 100ml 容量瓶中， 加水稀释至刻度。（3）操作方法取适量样品，用硝酸-硫酸法消化或干法灰化后定容至 50 或

23、100ml，吸取 10.0ml 消化液和相同的试剂空白液，分别置于125ml 分液漏斗中，各加水至 20ml。吸取0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml 铅标准使用液，分别置于125ml 分液漏斗中，各加 1%硝酸溶液至 20ml。于样品消化液、试剂空白液和铅标准液各加 2.0ml20%柠檬酸铵溶液，1.0ml20%盐酸羟胺溶液和 2 滴酚红指示剂，用1：1 氨水调至红色，加 10.0ml 双硫腙溶液，剧烈振摇 1min， 静置分层后，三氯甲烷层经脱脂棉滤入 1cm 比色杯中，以零管调节零点，于波长 510nm 处测的吸光度，绘制标准曲线，在曲线上查出样品消化液和试剂空白液中铅的含量。

24、（4）计算铅的含量（mg/l）=V1（A1-A2）/W*V2A1测定用样品消化液中铅的含量 ug A2试剂空白液中铅的含量 ugW样品体积 mlV1样品消化液总体积 ml V2测定用样品消化液体积 ml b 汞含量的测定：汞离子在酸性溶液中与双硫腙生成橙色络合物，用氯仿萃取比色。20%盐酸羟胺溶液双硫腙使用液汞标准使用液：准确称取 0.135g 于干燥器中干燥过的二氯化汞，加 0.5mol/l 硫酸使其溶解后，移入 100ml 容量瓶中， 定容至刻度。（3）操作方法：称取适量样品，消化后加水至总体积为 150ml，去全量消化液用锥形瓶在电炉上煮沸 10min，除去二氧化氮，冷却，于样品消化液及

25、空白液中各加 5%高锰酸钾液至溶液呈紫红色，然后再加 20%盐酸羟胺溶液至红色褪去，加 2 滴酚酞指示剂，用氨水调痔 PH 值为 1-2，定量转移至 125ml 分液漏斗中。吸取 0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml 汞标准使用溶液，分别置于 125ml 分液漏斗中，各加 10ml5%硫酸，各加水至 40ml，混匀。再各加 1ml20%盐酸羟胺溶液，放置 20 分钟，并时时振摇。于上述个分液漏斗中各加 5.0ml 双硫腙使用液，剧烈振摇 2 分钟，静置分层后，经脱脂棉将溶剂层入 1cm 比色杯中，以氯仿调节零点，在波长 490nm 处测吸光度，标准管吸光度减去零管

26、吸光度，绘制标准曲线。计算如下：Hg（mg/kg）=（A1-A2）100/W1000=A1-A2/10WA1样品消化液中汞的含量 ug A2试剂空白液中汞的含量 ugW 样品重量 g同样用比色法可测出铬、锡等金属的含量。4.3.2非金属元素的检测（1）无机砷的检验5其他要求5.1酒精实验酒精有脱水作用，当给牛奶中加入酒精后，牛奶酪蛋白胶粒周围水化层被脱掉，胶粒变成只带负电荷的不稳定状态。当奶的酸度增高时，H与负电荷作用，胶粒变为电中性而发生沉淀。奶的酸度与引起酪蛋白沉淀的酒精浓度之间存在着一定的关系，故可利用不同浓度的酒精检测奶样，以是否结絮来判定奶的酸度。（1）仪器: 平皿，直径 80-90 mm 量筒，250 ml 吸管，2 ml 酒精计 温度计（2）试剂:所有试剂均应为分析纯；实验用水至少应是蒸馏水。酒精：根据需要用分析纯中性乙醇配制 75 的酒精。（注： 如酒精呈酸性，可用 0.1mol/l 或 1