猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗NVDCJXA1株工艺规程Word格式文档下载.docx
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4.5.批准文号
农医药便函[2007]139号
4.6.工艺流程图
猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗（NVDC—JXA1株）工艺流程图
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4.7.质量控制点
工序名称
控制项目
控制标准
细胞消化
消化液
0.25%胰蛋白酶EDTA溶液；
50-100mL/转瓶
消化温度
37℃
消化时间
转动转瓶，待细胞层开始出现裂缝时终止，一般为45秒
转瓶培养
温度
37℃恒温室的控制
时间
细胞生长成单层即可结束培养，一般为24小时左右
转速
转瓶机设置为9～11转/小时
接毒
接种量
无菌控制下接种，3%
无菌检测
取样，T.G、G.P、G.A培养基培养应无菌
观察
细胞病变情况
出现混浊，可能污染，弃去。
病变≥70%时收获
收获
无菌
无菌控制下操作，不污染
灭活
灭活剂
0.2%的甲醛
灭活温度
调整灭活罐的温度为37℃
灭活时间
灭活充分，维持24小时
乳化
水相、油相比例
保证抗原含量并不分层，水相：
油相为2:
3
乳化时间
90分钟
乳化温度
保持抗原免疫效力，30±
2℃
4.8.活性物质制备工艺过程
4.8.1Marc-145传代细胞种的要求：
1.应无菌、无霉菌、无支原体、无外源病毒污染。
2.制苗的细胞代次：
第88—140代之间。
3.MARC-145细胞种应生长迅速，培养48小时应在1/2以上的瓶面出现细胞岛，并有部分相连、生长缓慢、形态不良的细胞培养物不可作种用，镜检时传代细胞的正常形态是梭状上皮细胞，明朗、轮廓清晰、胞浆内可见小颗粒，如出现肥大的圆细胞和空泡，是衰退的表现，不可留作种用。
4.8.2生产用毒种要求
4.8.2.1毒种应无
Ø
细菌
霉菌
支原体
其它外源病毒
4.8.2.2毒种保存与毒种继代
1）在-15℃以下保存，应不超过1年。
2）继代应不超过5代。
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4.8.3细胞的传代
工艺过程
选生长3-4天已形成致密单层的细胞种按常规法进行细胞分散，35~37℃培养，3-4天传代一次。
传代细胞传代时的分种率一般1：
4即1瓶分4瓶，也可1：
5。
可根据生产和试验的需要和细胞生长的情况增殖和扩大细胞。
每次传代应在细胞瓶上（中方瓶、扁瓶、圆瓶）注明细胞代次、日期。
◆生长不良、形态不好的细胞不能用。
工作条件
工作环境
洁净级别：
100级
温度：
18～26℃
相对湿度：
45～65%
压差：
大于5Pa
工作器械
121℃高温灭菌
◆高温蒸汽灭菌工艺应进行验证
4.8.4接种
选择符合要求的圆瓶细胞培养物，弃去生长液，用Hanks液洗单层3次，然后接种5-10%PRRS毒种，置35～37℃温室的转瓶机上旋转1.5小时后，加入维持液，使维持液中毒种含量为5%，维持液含犊牛血清1～2%，于35～37℃温室旋转培养。
4.8.5观察和收获
接种后每天逐瓶观察细胞病变，并做好记录，大部分圆瓶应在接种后6天内收获，应该有50%以上的细胞出现明显病变，病变细胞应为胞浆收缩，细胞萎缩变形，部分细胞脱落，收获的细胞培养物置–20℃以下冰箱冻结保存，细胞培养物需冻融1～2次，检验无菌后，将数瓶圆瓶的病毒液混合后，无菌吸取病毒液小样，进行中间检验。
4.8.6.灭活工艺过程
工艺过程
取病毒上清液导入灭活罐中,加入0.2%的甲醛
；
灭活24小时，灭活温度37℃。
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1000级
4.8.7半成品检验
应无菌生长。
取适宜稀释度，接种96孔长好单层的ST细胞微量板，每稀释度接8孔，每孔接毒0.1ml，续加维持液，培养观察细胞病变，计算TCID50。
取灭活毒液，接种长成单层的ST细胞，换成维持液，逐日观察细胞形态，连续6天，不引起细胞病变。
4.8.8岗位定员和生产周期
岗位
人员
生产周期
制细胞
每批共7天
配液
2
接种
收获
4.8.9原材料：
ST细胞，其质量标准应符合《中华人民共和国兽用生物制品质量标准》2001年版的要求。
4.9.活性物质生产技术经济指标和原料利用率计算
原料
营养液
收获得益率
数量
Marc-145细胞
10*1000
95%
价值/元
500
10*1000*0.2
1000*10*0.95
每ml活性物质
（500+2000）/1000*10*0.95=0.2631元
4.10.油乳剂灭活疫苗制造工艺过程
4.10.1配方
灭活液93.5份
水相
2份
吐温-856.5份
白油90.6份
油相
3份
司本-858份
硬脂酸铝1.4份
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4.10.1.1油相制备
取注射用白油90.6ml，加硬脂酸铝1.4g。
边加边搅拌，直到完全透明，再加入8ml司本-80。
充分混匀，高压灭菌备用。
4.10.1.2水相制备
取6.5份吐温-80装入的容器中，高压灭菌冷却后加入水相罐内与93.5份抗原充分搅拌直到吐温-85完全溶解。
4.10.1.3乳化
取油相3份放于乳化罐内，开动电机慢速转动搅拌，同时徐徐加入水相2份，加完后再以60r/min搅拌25-30分钟。
在控制面板上开乳化罐自乳化化开关；
乳化至60分钟时；
加入1％硫柳汞溶液，使其最终浓度为0.01％。
再乳化30分钟后，取3～5ml以3000r/min离心15分钟，若有分层现象，应重复乳化1次。
4.10.3分装
4.10.3.1内包装容器
名称：
西林瓶或药用高密度聚乙烯瓶、丁基橡胶塞
药用高密度聚乙烯瓶由符合GMP要求的厂家直接提供。
丁基橡胶塞灭菌：
121℃，蒸汽灭菌20分钟。
西林瓶清洗：
用超声波清洗机清洗2-3次；
121℃，干热灭菌60分钟。
4.10.3.2分装生产：
生产好的疫苗产品，移至分装生产线上，进行分装，有4ml/瓶和20ml/瓶两种规格。
4.10.3.3工作环境
4.10.4压盖贴签装箱
压盖：
分装完毕的产品，立即进入压盖生产线，加上铝盖，进行压盖。
贴签：
贴签机调整设置好相应的产品批号及有效期限，进入贴签程序。
装盒：
每20瓶一盒，盒内放置说明书、合格证各一份，小盒用不干胶封口。
入库。
注：
批号设置、贴签印刷应符合《兽药瓶签、说明书的管理规定》
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4.10.5．岗位定员和生产周期
分装
4
1/2天
压盖
贴签装箱
2天
4.11.油乳剂剂制造技术经济指标
序号
项目及计算
指标
1
分装率（%）=实际分装瓶数/理论分装瓶数*100%
100%
（±
5%）
合格率（%）=合格瓶数/实际分装瓶数*100%
≥99%
4.12.设备一览表
编号
工序
设备名称
型号
规格
制造单位
活性成分制备
恒温培养箱
HW-2500
0-100℃
上海一恒科学仪器有限公司
恒温摇床
YC-120
0-65℃
转瓶机
SHXJ-VI
1400*650*14000
南京
-70℃冰箱
HAIER
450L
青岛海尔集团
5
2-8℃冷库
装配
40m2
上海开灵制冷有限公司
6
-20℃冰库
20m2
7
脉动真空灭菌柜
YXQ-MG-225
2200*2000*2200
华菱医疗设备制造有限公司
8
YXQ-MG-208
2415*1200*1800
11
干热灭菌柜
101A
1600*1800*2550
12
灭活
灭活罐
YJ-2005
2000L
上海永巨制药设备有限公司
13
电子天平
YH-1000
0.0001
上海一恒科技有限公司
14
乳化
乳化泵
RH-2000
上海华东制药机械有限公司
15
分装机
HD-2005
0-20ml
16
0-100ml
17
自动胶塞清洗机
CDDA-10
2370*1320*1880
上海欣丽实业有限公司
18
臭氧灭菌柜
KER-1000
1600*1800*550
康尔医药设备制造有限公司
19
包装
轧盖机
XF-2005
1375*755*1600
20
贴签机
TLJ
1650*845*1200
21
检验
恒温箱
HIHENG
650*445*550
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4.13.生物安全及劳动保护
4.13.1技术安全
1.上岗工人必须经过“生物安全及自我防护”培训。
2.生产过程中，各岗位必须严格按照工艺规程、岗位标准操作程序及设备标准操作程序操作，不得违反。
3.生产时必须在符合兽药GMP要求环境条件下进行。
4.每次生产更换批号（或品种和规格），各工序须清洗工具容器和场地，达到清场要求。
5.各工序半成品容器加盖密封存放，放至半成品贮存间规定的地方，防止异物混入，并有明显标志（有卡片），按品名、规格、批号存放或设棚栏隔开。
6.机器设备有专人管理、维护、保养。
严格执行安全用电规定，经常检查电源、线路，防止漏电短路，电源要接地线，禁止湿手开掣；
机电设备严禁带病运转，机器运行时，严禁用手伸入转动部位；
禁止用水洗电机转轴及皮带轮防护安全罩，操作时不能站在与皮带轮同一线上。
7.随时检查燃气系统，应保持完好无损，以免发生事故，设备、设施应定期检查完好情况。
8.管道标志明显：
水管涂绿色，药液管涂黄色，蒸气管涂红色，严防漏气漏液。
高压容器、管道系统等应经劳动技术安全部门检测合格方能使用。
9.各工序均应配备防火设施和其他意外应急设施，每个员工都要学会使用灭火器材。
10.各岗位操作人员须经严格岗位培训并经考核合格，凭岗位合格证才能上岗独立操作。
非本岗位人员不能顶替上班。
当班人员不能随意离开岗位，严禁窜岗，必需离开时要有本岗位人员接替方能离开。
交接班应交接清楚，认真填写交接班记录。
11.各岗位上岗须按规定穿戴工作服、帽、鞋、手套。
特别是接触强酸、强碱，要穿戴防护衣、胶手套、水鞋及防护镜，避免酸、碱液溅到身上。
万一被溅上皮肤，立即用大量水冲洗。
4.13.2劳动保护
1．上班人员均要按规定穿戴工作服、帽、鞋、防护手套等劳保用品。
2．使用显微镜的人员严格执行中休、班休制度，每年检查视力一次。
◆员工每年进行健康检查一次。
建立健康档案。
4.14.物料
4.14.1注射用水的质量标准及检验
1）性状：
本品为纯化水经蒸馏所得的无色的澄明液体；
无臭，无味。
2）检查
a
pH值
应为5.0～7.0（附录ⅥH）。
b
氨
取本品50ml，照纯化水的方法检查，
对照用氯化铵溶液改为1.0ml，应符合规定（0.00002％）。
c
细菌内毒素
取本品，依法检查（附录ⅪE），每1ml中含内毒素量应小于0.25EU。
d
氯化物、硫酸盐与钙盐、硝酸盐与亚硝酸盐、二氧二碳、易氧化物、不挥发物与重金属
照纯化水的方法检查，应符合规定。
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4.14.2牛血清
牛血清
质量标准：
中国生物制品主要原辅料质控标准，2000年版。
供应商：
南京苏邦生物技术有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）
4.14.3营养液
DMEM
中国兽药典，2005版
清大天一生物科技有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）
4.14.4磷酸钠
磷酸钠
HG31292-80
上海国药集团化学试剂有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）
4.14.5磷酸氢二钾
磷酸氢二钾
GB274-93
4.14.6磷酸氢二钠
磷酸氢二钠
GB1909—1987
4.14.7磷酸氢二钠
重铬酸钾
GB/T642-1999
4.14.8硫酸
硫酸
GB625-89
4.14.9无水氯化钙
无水氯化钙
HGB3208-60
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4.14.10苯酚红
苯酚红
GB/T15351-94
4.14.11吐温-85
吐温80
中国药典，2000年版。
美国CRODA公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）
4.14.12司本-85
4.14.13硫柳贡
硫柳汞钠
Q/CYDZ-220-2004。
4.14.14白油
注射用白油（轻质矿物油）
中华人民共和国兽医生物制品规程，2000版。
美国埃克森美孚石油公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）
4.14.15甲醛
甲醛
中国药典，2000版。
4.15.成品质量标准
4.15.1物理性状
本品为乳白色乳状液，为水包油包水型，静置后，下层略带淡红色。
用1ml吸管（出口内径1.2mm），吸取25℃左右的疫苗1ml，令其垂直自然流下，记录流出0.4ml所需的时间。
在2秒以内为合格。
37℃放置21日，不破乳。
4.15.2无菌检验
4.15.3安全检验
用猪瘟中和抗体、猪细小病毒HI抗体阴性猪2头，各深部肌肉注射疫苗10ml。
观察21日，应无不良临床反应。
用2-4日龄同窝乳鼠至少5只，各皮下注射0.1ml，观察7日，应健活。
如有死亡，可重检一次。
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4.15.4效力检验
用体重350g以上的HI抗体阴性豚鼠4只，各肌肉注射疫苗0.5ml。
28日后，连同条件相同的对照豚鼠2只，采血，测定抗体。
对照抗体阴性，注射豚鼠应有3只出现抗体反应，其HI加应≥64。
4.16.贮藏和有效期
2-8℃保存，7个月
4.17.包装材料要求
4.17.1标签
猪细小病毒病灭活疫苗标签
80克铜板纸，内容符合《兽药瓶签、说明书的管理规定》
尺寸：
20mm×
60mm，25mm×
65mm
上海郑盛印务有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）
4.17.2玻璃瓶
冷冻瓶
符合《中华人民共和国药品管理法》和《药品包装用材料和容器管理办法》
7ml
东营力诺玻璃制品有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）
4.17.3塑料瓶
外用液体药用高密度聚乙烯瓶
20mm
杭州美坚华医药包装材料有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）
4.17.4铝塑盖
铝塑盖
d:
2cm,h:
1cm
洛阳豫洛瓶盖有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）
4.17.5胶塞
药用丁基橡胶塞（抗生素瓶、冷冻瓶）
Φ20mm
湖北应城市恒天药业包装有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）
4.17.6外包装箱
冷藏箱
405mm×
175mm,600mm×
340mm;
370mm×
285mm,140mm×
320mm
上海御风包装材料有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）
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4.17.7保温箱
泡沫保温箱
365×
280×
295,600×
345×
385
上海正泰泡塑厂、上海琅轩企业发展有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）
4.17.8内包装盒
小彩盒
90mm×
100mm×
53mm
上海金伴印刷有限公司（或经公司批准的其他符合规定的厂家）
4.17.9说明书
猪细小病毒病灭活疫苗说明书
105克铜板纸，内容符合《兽药瓶签、说明书的管理规定》
145mm×
103mm
4.18.标签、说明书
见样张。
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文件接收名单
接收部门人员名单
接收日期
接收份数
接收人
（签名）
总经理：
文鸣旭
生产总监：
孙国宝
生产部经理：
钮雪根
灭活苗车间主任：
李斌
质管部经理：
陶洪明
种子室主任：
张玉云
QA主任：
史素云
技术研发部经理：
赵有淑
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