无菌检查法标准操作程序要点Word下载.docx
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（
0.3ml）
除
葡
萄
糖
和
天
青
液
外
，取上述成分混合
，微
温
解
，调节
p
H
为弱碱性，煮沸
，滤清
，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节
使
灭
菌
后
25℃的
值为
7.1
土
0.2。
分装至适宜的容器中，其
装
量
与
容
器
高
度
比
例
应
符
合
培
养
结
束
基
氧
化
层
（
粉红色）不超过培养基深度的
1/2。
灭菌。
在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深
度的
1/5，否则
，须经
100°
C
水浴加热至粉红色消失（不释过
2
0
分钟）
，迅速冷却
只限加热
一次，并防止被污染。
除另有规定外
，硫乙醇酸盐流体培养基置
30〜
35C
培养。
4.1.1.2
胰酪大豆胨液体培养基
胰酪胨1
7
.
0g氯化钠5.0g
大豆木瓜蛋白酶水解物
3.
0g磷酸氢二钾
2.
葡萄糖/无水葡萄糖2.
5g/2.
3g
水1000m
l
除葡萄糖外，取上述成分，混合
，微温溶解，滤过，调节
使灭菌后在
5℃
值
为
7.
3±
2，加入葡萄糖，分装
，灭菌
。
胰酪大豆胨液体培养基置
20〜2
5
℃培养。
4.1.1.3
中和或灭活用培养基
按上述硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培养基的处方及制法，在培养基灭菌或使用前
加入适宜的中和剂、灭活剂或表面活性剂，其用量同方法适用性试验。
4.1.1.4
0.5%
葡萄糖肉汤培养基（用于硫酸链霉素等抗生素的无菌检查）
胨1
0g
氯化钠5
0g
牛肉浸出粉
0g水1000m
葡萄糖5.
除葡萄糖外，取上述成分混合，微温溶解，调
节
为弱碱性，煮沸
，加入葡萄糖溶解后，
摇匀
pH
值
士
0.2，分装，灭菌。
4.1.1.5
胰酪大豆胨琼脂培养基
胰酪胨15.0g
琼脂
5.0g水1000m
氯化钠5.0g
除琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节
7.3
士
0.2，加入琼脂
，加热溶化后
，摇匀
，分装，灭菌。
4.1.1.6
沙氏葡萄糖液体培养基
动物组织胃蛋白酶水解物水
1000m
和胰酪胨等量混合物
10.
葡萄糖20.0g
，微温溶解，调节
5.
6
0.2，加入葡萄糖，摇匀，分装，灭菌
4.1.1.7沙氏葡萄糖琼脂培养基
动物组织胃蛋白酶水解物琼脂
15.0g
和胰酪胨等量混合物1
水
葡萄糖40.0g
除葡萄糖、琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节
25°
为
0.2，加入琼脂，加热溶化后，再加入葡萄糖，摇匀
4.1.2
培养基的适用性检查
无菌检查
用的硫乙醉酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符合培养基的无
菌性检查
及灵敏度检查
的要求
本检查可在供试品的无菌检查
前或与供试品的无菌检查
同时进行
4.1.3
无
性
检
查
每
批
随
机
取
不
少
于
支
（瓶
）
，置
各
规
定
14
，应
无菌生长
4.1.4
灵敏度检查
4.1.4.1
种
灵
敏
所
用
株
传
代
次
数
得
超
过
（从
保
存
中
心
获
的
干
燥
，并
采用
适
宜
藏
技
术
进
行
，以
证试
验菌
生
物
学
特
性
〔
金
黄
色
球
Staphylococcusaureus）〔CMCC（B）26003〕
铜
绿
假
单
胞
Pseudomonasaeruginosa）
〔CMCC（B）10104〕
枯
草
芽
孢
杆
（Bacillussubtilis）CMCC（B）63501〕
生孢
梭
（Clostridium
sporogenes）〔CMCC（B）64941〕
白
念
珠
（Candida
albicans）
〔CMCC（F）98001〕
黑
曲
霉
（Aspergillus
niger）
〔CMCC（F）98003〕
4.1.4.2
备
接
、
新
鲜
至
胰
酪
大
豆
胨
体
或
胰
琼
脂
上
，接
硫
乙
醇
酸
盐
流
，30〜35°
18〜24
小
时
；
沙
氏
糖
，20〜25°
24〜48
，上
述
PH7.0
无
氣
钠
-蛋
缓
冲
0.9%无
氯
成
lml
含
l00cfu（菌
落
形
位
）
悬
斜
面
，20〜25℃培
5〜7
，加
入
3〜5ml
0.05%（ml/ml）
聚
山
梨
酯
80
pH7.0
0.9%
化
，将
子
洗
脱
然
，采用
方
法
吸
出
试
管
内
，用
0.05%（ml/ml）
醋
数
l00cfu
若
室
下
放
置
，应
2〜8°
可
24
曲
2〜8℃，在
验
证
贮
期
4.1.4.3
12ml
醇
，分
别
，另
作
空
对
照
，培
9ml
白
逐
日
观
察
果
4.1.4.4
判
长
，若
加
管均
良
好
，判
该
灵
敏度检查符合规定
4.2
稀释液、冲洗液及其制备方法
稀释液
冲洗液配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌
4.2.1
0.1
蛋
l.0
g，加
l,微
，滤
清
，调
0.2，分
，灭
4.2.2
-
磷
二
氢
钾3.56g，无
5.77g,氯
4.30g,
胨l.00g，加
1000ml,微
根
据
供
品
，可
选
其
他
经
证过
稀
释
（如
菌氯化
如
需
要
前
表
活
剂
等
4.3
方法适用性试验
产
验，以
确
认
程
序
发
变
能
影
响
重
验。
按
“供
”
及
列
求
操
一
应
逐一进行方法确认
4.3.1
肠
埃
希
Escherichia
coli
〔CMCC（B）44
102〕
，金
、枯
、生
同
大
肠埃希菌的菌液制备同金黄色葡萄球菌
4.3.2
薄
膜
滤
总
，冲
，在
最
后
，过
液
筒
另
有
积
，作
规
间
，各
4.3.3
直
酵
接
4
，取
基
小于
菌
、黑
人
4.3.4
断
较
，如
均
，则
说
明
品
条
件
抑
以
忽
略
计
，照
此
查
条件进行供试品的无菌检查
如含供试品的任一容器中的试验菌生长微弱
缓慢或不生
验条
增
养
更
换
，消
新
方法适用性试验也可与供试品的无菌检查同时进行
4.4
供试品的无菌检查
包
括
只
质
允
许
法
验确
相同
验过
证明
效
，且
对微生物无毒性
4.4.1
是
指
验所
，成
亚
查。
，出
厂产
市
监
督
验按
1、
中最少检验数量不包括阳性对照试验的供试品用量
4.4.2
个
份
g
ml）。
定
，供
）供
足
够
两
，
则
分
，只
试
将
全
部
4.4.3
阳
择
：
抗
革
兰
主
供
阴
厌
真
阳
验，加
l00cfu，供
检
样
72
4.4.4
相应
对
阴性对照不得有菌生长
4.4.5
供试品处理及接种培养基
消
毒
彻
底
材
带
针
头
向
导
气
，再
按
无菌操作启开容器取出内容物
，按
处
理
4.4.5.1
薄膜过滤法
封
闭
式
孔
径
0.45μm，直
约
50mm。
的完整性
先
润
湿
油
类
，其
过
充
挥
率
注
意
持
覆
盖
整
，每
张
洗
100ml，且
1000ml，以
避
免
微
受
损
伤
4.4.5.1.1
，直
，或
混
100ml
容
，混
匀
，立
即
具
，须
不
三
，所
，一
，1
，2
人
4.4.5.1.2
固
标
签
复
，然后
溶
液供试品项下的方法操作
4.4.5.1.3
非
乳
，充
0_1%〜1%聚
少
项
4.4.5.1.4可溶于十四烷酸异丙酯的膏剂和黏性油剂供试品取规定
十
四
烷
异
丙
，剧
烈
振
摇
，使
当
热
，但
过44°
C,趁
迅
速
仍
，于
烷
萃
，静
相
滤膜冲洗及接种培养基照非水溶性制剂供试品项
下的方法操作
4.4.5.1.5
气（
喷
雾
20°
冷
冻
小
速在
端
钻
，释
抛
射
再
开
启
转
移
亦可
性制剂供试品项下的方法操作
4.4.5.1.6
药
（若
或
示
非水溶性供试品项下方法操作
同时应采用适宜的方法进行包装中所配带的无菌针头的
4.4.5.1.7
医
疗
具（输
血、输
袋
等）
50〜100ml
壁
，收
集
，然
同
4.4.5.2
直接接种法
，即
别
升级会员 