高效液相色谱仪验证方案文档格式.docx
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4.2.3.2确认标准操作规程的可行性
4.2.3.3确认设备正常运行的项目
4.3性能确认
4.3.1输液系统
4.3.1.1泵流量设定值误差与流量稳定性误差
4.3.1.2定性、定量测量重复性误差
4.3.1.3系统适用性试验
4.3.2紫外检测器性能
4.3.2.1基线漂移与基线噪声
5.拟订验证期
6.验证结果评价与结论
7.附件
1目的:
为确认Alliance2695型高效液相色谱仪测试数据准确可靠,性能稳定,特制订本验证案,对高效液相色谱仪进行验证。
验证过程应格按照本案规定的容进行,若因特殊原因确需变更时,应填写验证案变更申请及批准书,报验证委员会批准。
2围:
适用于美国Waters公司Alliance2695型高效液相色谱仪系统的再验证。
3责任:
3.1验证委员会
3.1.1负责验证案的批准。
3.1.2负责验证的协调工作,以保证本验证案规定项目的顺利实施。
3.1.3负责验证数据及结果的审核。
3.1.4负责验证报告的审批。
3.1.5负责发放验证证书。
3.1.6负责验证期的确认。
3.2设备部。
3.2.1负责建立设备档案。
3.2.2负责仪器、仪表的校正。
3.3质量保证部
3.3.1负责制定验证案。
3.3.2负责验证的实施。
3.3.3负责拟定验证期。
3.3.4负责收集各项验证、试验记录,起草验证报告,报验证委员会。
4验证:
4.1公用系统检查
名称
设计要求
实际
结论
确认人
日期
备注
电压(V)
220伏、单相
功率
500W
频率
50HZ
接地保护
有
检查项目
标准
结果
检查人
生产厂商
美国Waters公司
设备名称
Alliance2695型HPLC系统
安装地点
液相色谱室220
公司部设备编号
ZJ-LH-201
主要性能参数
2695型溶剂与样品管理系统参数
电源
220V/50Hz,250W
流速围
0.00~45ml/min
压力围
0~6000Psi
流速精度
±
0.01ml
工作温度
4~38℃
工作湿度
20~90%
重量
42.3Kg
PDA检测器参数
220V/50Hz,250W
波长围
190~800nm
波长精度
1nm
基线噪音
5×
10-5AU254nm
漂移值
1×
10-3AU/hour254nm
线性围
5%over-0.1~2.0AU
光谱分析
1.2nm/光电二极管
4~40℃
20~80%
15.4Kg
复核人:
日期:
试验并证明设备的各部分及整体,能在预期的及设计围准确的运行,并能完全达到规定的技术指标和使用要求。
通过对输液系统、紫外检测器性能的检测,确认本机器运行正常。
4.2.3.1设备概述
4.2.3.1.1本仪器为Waters公司Alliance2695型高效液相色谱仪,包括四元梯度泵,2996检测器和自动进样器、Millennium32色谱管理工作站及打印机组成。
4.2.3.1.2高压液相色谱法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液,作为流动相,用泵将流动相注入分析色谱柱,注入的供试品被流动相带入柱进行分离后,各成分先后进入检测器,用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理,得到测定结果,然后分别进行收集。
4.2.3.2确认高效液相色谱系统标准操作规程的可行性测试过程:
A.前提:
安装确认结果使得设备安装稳固,电源连接完好,仪器自检完毕。
B.仪器操作运行:
仪器运行,整个操作过程完全按《10-G-08002Alliance2695型高效液相色谱仪标准操作规程》进行。
C.在整个系统运转的同时,运行确认以下项目,以证明设备符合要求。
4.2.3.3高效液相色谱仪运行确认
项目
要求
结论
泵流量设定值测定
误差SS<±
2%
泵流量稳定性测定
误差SR<±
系统重复性测定
误差RSD≤1.5%
基线漂移与基线噪声测定
基线漂移≤5×
10-3(AU/h)
基线噪声≤5×
10-4(AU)
4.3性能确认
4.3.1.1.1要求:
泵流量设定值误差SS<±
2%;
流量稳定性误差SR<±
2%。
4.3.1.1.2检定法:
将仪器的输液系统、进样器、色谱柱和检测器联接好后开机,以甲醇为流动相,按表1设定流量,待流速稳定后,在流动相排出口用事先清洗干燥称重过的容量瓶收集流动相,同时用秒表计时,准确地收集10~25分钟,称重,按下式计算SS和SR。
SS=
SR=
式中:
SS为流量设定值误差(%);
Fm=
为流量实测值(ml/min);
W2为容量瓶+流动相的重量(g);
W1为容量瓶的重量(g);
FS为流量设定值(ml/min);
Ρt为实验温度下流动相的密度(g/cm3);
t为收集流动相的时间(min)
SR为流量稳定性误差(%)
Fmax为同一组测量中流量最大值(ml/min);
Fmin为同一组测量中流量最小值(ml/min)
F为同一组测量值的算术平均值(ml/min)
流量设定值(ml/min)
0.5
1.0
1.5
测量次数
3
收集流动相时间(min)
25
15
10
允误差
SS
3%
SR
表1SS、SR的检定
4.3.1.2.1检定法:
将仪器的输液系统、进样器、色谱柱和检测器联接好后开机,使之处于正常工作状态,注入注射用胸腺五肽样品溶液20μl,记录保留时间和峰面积,连续测量5次,计算相对标准偏差RSD。
4.3.1.2.2可接受标准:
RSD≤1.5%。
测定次数
1
2
4
5
保留时间
峰面积
实测RSD
保留时间(min):
标准RSD
≤1.5%
峰面积:
按下式计算相对标准偏差RSD。
RSD=
RSD为定性、定量测量重复性的相对标准偏差
为第i次测得的保留时间或峰面积
为n次测量结果的算术平均值
i为测量序号
n为测量次数
选定注射用胸腺五肽含量测定的色谱条件作为系统适用性试验,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;
0.05mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0)-甲醇(90:
10)为流动相;
检测波长为275nm。
精密量取20μl,注入液相色谱仪,连续测定3次,依据图谱,记录理论板数。
4.3.1.3.1可接受标准:
记录色谱图理论板数按胸腺五肽峰计算应不低于2000。
4.3.2.1.1要求:
10-3(AU/h);
10-4(AU)。
将仪器各部分联接好,紫外检测器波长调到254nm,流动相为100%甲醇,流速为1.0ml/min,吸收度围选择最灵敏档,开机,待基线稳定后,记录基线20-30分钟,计算基线漂移和噪声。
5.拟订再验证期
设备验证期拟订为:
一年一次。
由设备动力部负责收集各项验证试验结果记录,根据验证试验结果起草验证报告,报验证委员会,验证委员会对验证结果进行综合评审,做出验证结论,发放验证证书,确认验证期。
对验证结果的评审应包括:
6.1验证实验是否有遗漏?
6.2验证实验过程中对验证案有无修改?
修改案的依据以及修改是否经过批准?
6.3验证记录是否完整?
6.4验证试验结果是否符合要求?
偏差及对偏差的说明是否合理?
是否需要进一步补充试验?
附件1
高效液相色谱仪验证结果及记录
(1)
验证项目名称
设备性能确认
验证案编码
设备名称
Alliance2695高效液相色谱仪
规格型号
Alliance2695
设备位置
设备编号
制造厂家
出厂日期
2002
泵流量设定值误差与流量稳定性误差
操作人
日期
实测误差
结果评价及建议:
设备动力部:
结果评价及建议
中心化验室:
质量保证部:
备注:
附件2
高效液相色谱仪验证结果及记录
(2)
定性、定量重复性检定
保留时间(min)
峰面积
峰面积:
附件3
高效液相色谱仪验证结果及记录(3)
系统适用性试验
色谱图理论塔板数(n)
可接受标准
n不低于2000
附件4
高效液相色谱仪验证结果及记录(4)
紫外检测器性能试验
测定
项目
标准要求
实测数据及结果计算
基线
漂移
与基
线噪
声
波长254nm,流动相为100%甲醇,流速为1.0ml/min,吸收度围选择最灵敏档,开机,待基线稳定后,记录基线20~30分钟,计算基线漂移和噪声
判定标准:
基线漂移:
基线噪声:
设备动力部:
日期:
中心化验室:
日期:
质量保证部:
附件5
验证最终评价报告
验证案名称
Alliance2695型高效液相色谱仪再验证案
部门
最终评价
设备动力部
负责人:
质量保证部
批准
备注: