胞间连丝的观察要点文档格式.docx

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五、作业：

1、完成实验报告，并绘胞间连丝图。

2、胞间连丝属于哪种细胞连接，有何生物学功能？

实验二植物细胞原生质流动的观察

一、实验目的

在活细胞中，原生质流动是细胞活力强弱的重要指标。

通常认为，原生质流动是原生质中微丝肌动蛋白与肌球蛋白相互滑动的结果，这个过程要消耗能量，也受光照、温度、渗透压、机械损伤等的影响。

通过实验认识细胞原生质流动的现象，并了解其影响因素。

二、实验用品：

1、材料：

黑藻

2、器材：

显微镜、载玻片、盖玻片等

1、黑藻叶片细胞质流动的观察

取黑藻叶片制作临时装片并观察，注意流速，并记录。

2、用温水浸泡，再观察其流动速度有无改变，并记录。

3、用照明灯照射一段时间后再观察其流动速度有无改变，并记录。

四、作业：

1、如何理解细胞原生质流动的原理？

2、细胞质环流有何特点？

3、图示细胞质环流。

实验三动物细胞线粒体的超活染色与观察

一、实验原理：

活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。

线粒体是细胞进行呼吸作用的场所。

詹纳斯绿B可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态）呈现蓝悬浮绿色，而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基。

二、实验器材：

显微镜、恒温水浴锅等，1%詹纳斯绿B

（一）线粒体超活染色

1、取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2滴詹纳斯绿B染色液。

2、用牙签取口腔上皮细胞放置于染色液的液滴中，染色15分钟（注意：

染色液不能干燥）盖片，吸出多余的染色液即可观察，线粒体为蓝绿色颗粒或短棒状的结构。

（二）永久装片的观察

1、线粒体2、中心体

实验报告、并绘线粒体形态图

实验四叶绿体的分离与观察

组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。

一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小，形状和密度，也同离心力以及悬浮介质的粘度有关。

在一定的离心场中，同一时间内，密度不同，大小不同、沉降速度不同，依次增加离心力和离心时间，能够使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分。

二、材料与用具：

离心机、组织匀浆器、天平、纱布、菠菜等

1、选取新鲜嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶脉，称30g于150ml0.35mol/LNaCl溶液中装入研钵捣碎；

2、将匀浆用纱布过滤于烧杯中；

3、取滤液4ml在1000r/min下离心2分钟，弃沉淀；

4、将上清液在3000r/min下离心5分钟，弃上清，沉淀即是叶绿体；

5、将沉淀用0.35mol/L氯化钠溶液悬浮。

6、取叶绿体悬液制临时装片观察。

完成实验报告，并绘图。

实验五细胞膜的通透性

1、观察细胞膜的通透性及各类物质进入细胞的速度。

2、了解细胞膜通透性的一般规律。

二、实验原理：

细胞膜是一种选择透过性膜。

将红细胞放在低渗溶液中，水分子会大量渗到细胞内，使细胞胀破，血红细胞释放到介质中，这种现象称为溶血。

将红细胞放入含有不同溶质的等渗溶液中，由于细胞膜对各种溶质的透性不同，有的溶质可以渗入，有的溶质则不能渗入，渗入的溶质能够提高红细胞的渗透压，所以促进水分进入细胞，随着水分的不断进入红细胞最终破裂，即引起溶血。

由于溶质透入的速度互不相同，溶血时间也不同。

因此，发生溶血现象所需时间长短可作为测量物质进入红细胞速度的一种指标。

三、实验用品：

剪刀，试管等

四、实验材料：

兔血

五、实验步骤：

1、制备兔红细胞悬液

取兔静脉血20ml（加抗凝剂3.8%柠檬酸钠），以1份兔血加10份0.17mol/L氯化钠溶液配制兔红细胞悬液。

2、低渗溶血的观察

取试管1支，加入3mL蒸馏水，再加入0.5ml红细胞悬液，观察溶液颜色的变化，由不透明逐渐变成红色澄清，说明红细胞发生破裂造成100%红细胞溶血。

3、兔红细胞的渗透性

1）取试管1支，加入0.17mol/l氯化钠溶液3mL，再加入0.5ml红细胞悬液，轻轻摇动，观察溶液颜色有无变化？

有无溶血现象？

分析原因。

2）取试管9支，编号后分别加入其他9种等渗溶液各3ml，再逐一加入0.5ml红细胞悬液，分别记下时间，轻轻摇动，观察溶液颜色有无变化。

以低渗溶血管的溶液作对照管，若有的实验管溶液变成与对照一样透明，说明发生完全溶血，记下那一刻的时间。

某种溶液的溶血时间等于自加入红细胞悬液到溶液变成红色透明所需的时间。

4、溶血结果判断：

1）不溶血：

液体分两层，上层浅黄色，下层红色不透明，镜检红细胞完好。

2）不完全溶血：

溶液浑浊，上层变红色，镜检红细胞有部分破裂。

3）完全溶血：

液体变红而透明，镜检红细胞全部呈碎片。

六、作业：

1、统计不同等渗溶液的溶血情况。

2、讨论溶血实验在研究中应用的可能性。

实验六相差显微镜观察口腔上皮细胞

相差显微镜具环状光阑，带相板的物镜，合轴调中望远镜及滤色片，这些特殊装置能使活细胞或未经染色的标本中各部分的折射率或厚度的微小差异，产生相位差，然后利用光的衍射和干射原理，把相位差变成振幅（明暗差）之差，使人的肉眼能够辩认出来。

相差显微镜、普通显微镜、解剖器具

1、阅读教材20：

二、相差显微镜的成像原理

掌握：

环状光阑、相板、正相差、负相差、滤光片、调中望远镜

2、口腔上皮细胞临时装片的制备与普通光镜下的观察。

3、相差显微镜观察口腔上皮细胞。

制备样品时，防止产生气泡

调好口腔上皮细胞的相差像后，对比一般明视野的像和相差像，画图说明你所看到的两个像的差别，指出相差像的成像特点。

实验七细胞荧光染色观察与荧光显微镜的使用

一、实验目的：

1、初步了解荧光显微镜的基本组件、位置和基本原理。

2、学习细胞荧光染色的基本方法。

二、实验用具：

1、材料：

洋葱、牛蛙

2、用具：

荧光显微镜、镊子、盖玻片等

三、实验内容：

1、阅读实验指导书P8

1）荧光：

物质中电子吸收光的能量由低能转变为高能状态，再回到低能状态时释放出的光。

2）荧光显微镜组件：

光源、激发滤片、双色反射镜、阻断滤片、物镜、目镜等。

3）荧光显微镜的成像原理，

2、蛙血细胞的染色观察

蛙血——涂片——晾干——甲醇固定，10分钟——1%丫啶橙染色，5分钟——水洗——干燥

3、洋葱表皮细胞染色观察

撕取内表皮——铺展于玻片上——晾干——1%啶橙染色，5分钟——水洗——干燥

4、植物叶表皮细胞自发荧光观察

撕取绿色植物叶表皮细胞制作临时装片，即可观察。

四、注意事项：

1、荧光显微镜要在光线尽量暗的环境下观察。

2、不要直接观察激发光源，保护眼睛。

五、作业：

简述荧光显微镜的主要部件和基本光路。

实验八细胞融合

1、了解PEG诱导细胞融合的基本原理。

2、通过实验，初步掌握细胞融合的技术。

两个或两个以上的细胞合成为一个双核或多核细胞的现象为细胞融合，也称为细胞杂交。

常用的诱导方法有病毒诱导融合、化学融合剂诱导融合和电融合。

它们一般都是使细胞凝聚，破坏接触处的细胞膜的磷脂双分子层，从而使相互接触的细胞膜之间发生融合，进而细胞质沟通，形成一个大的双核或多核融合细胞。

三、实验材料与用具：

P89

四、实验步骤：

1、在公鸡翼下静脉抽取2mL鸡血，加入盛有8mL的Alsever液中，使血液与Alsever液的比为1：

4，混匀。

2、取此贮存鸡血1ml加入4ml0.85%生理盐水，充分混匀，800r/min离心3min，弃上清，重复上述条件离心两次。

最后弃上清，加GKN液4ml离心，1000r/min，5min。

3、弃上清，加GKN液制成10%细胞悬液。

4、取上述细胞悬液1ml于离心管中，放入37℃水浴中预热，同时将50%PEG液一并预热20min。

5、20分钟后将0.5ml50%PEG溶液逐滴沿离心管壁加入到1mL细胞悬液中，边加边摇匀，然后放入37℃水浴中保温20min。

6、20分钟后加入适量GKN液到8mL，静止于水浴中20min。

7、800r/min离心3min，弃上清，加GKN液再离心1次。

8、弃上清，加入GKN液少许，混匀，取少量制临时装片观察细胞融合情况。

1、绘制细胞融合图像。

2、分析实验中遇到的问题及其解决办法。

实验九植物凝集素对红细胞的凝集作用

1、学习植物凝集素的提取方法；

2、观察红细胞的凝集现象。

细胞外被是指细胞质膜外表面的一层黏多糖物质，它在细胞间的联系和识别、细胞生长和分化、免疫反应和肿瘤发生等过程中发挥重要作用。

动物细胞表面的糖蛋白、糖脂中的糖链伸向膜的表面，它们是细胞识别、细胞免疫及细胞接触抑制等现象的必要组分。

凝集素是一类含糖的，并能与糖专一结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。

凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果。

凝集素与糖分子结合有一定的专一性和结合价，并与细胞膜上受体的分布有关。

三、实验用具：

离心机、天平、显微镜、试管、注射器等

土豆块茎或芸豆粒，家兔1只

五、实验步骤

1、提取凝集素：

称取土豆去皮块茎20g，加100mlPBS缓冲液，浸泡2小时后，将浸出的粗提取液过滤，即为土豆凝集素提取液。

2、制备2%红细胞悬液：

以无菌方法提取兔子静脉血液（加抗凝剂）2ml，加8ml生理盐水，以2000r/m离心5min，去掉上清液，再加生理盐水至10ml反复洗涤5次，最后按压积红细胞体积用生理盐水配成2%红细胞悬液。

3、凝集反应：

用滴管吸取凝集素和红细胞悬液各一滴，于双凹片的一个凹槽中，混匀静止10分钟后于低倍显微镜下观察。

4、以PBS液加2%红细胞悬液作对照实验。

六、作业

1、记录红细胞凝集情况。

2、查资料，简述凝集素在生物分子分离提取中的应用。