各种缓冲液的配制方法Word格式.docx

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取2mol/L醋酸钠溶液13ml与2mol/L醋酸溶液87ml,加每1ml含铜1mg的硫酸铜溶液0.5ml,再加水稀释至1000ml,即得.醋酸一醋酸钠缓冲液（pH4.5）

取醋酸钠18g,加冰醋酸9.8ml,再加水稀释至1000ml,即得.醋酸一醋酸钠缓冲液（pH4.6）

取醋酸钠5.4g,加水50ml使溶解，用冰醋酸调节pH值至4.6，再加水稀释至100ml，即得.醋酸一醋酸钠缓冲液（pH6.0）

取醋酸钠54.6g，加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后，加水稀释至500ml，即得.

用醋酸和醋酸钠配制的缓冲溶液的PH=PKa+lg[C（NaAc）/C（HAc）]（在此，C（HAc）指醋酸的浓

度，C（NaAc）指醋酸钠的浓度,Ka是醋酸的解离常数

=1.8*10-5（1.8乘10的-5次方），PKa=-lgKa=4.75,将

PH=5.5代入，可得C（NaAc）/C（HAc）=5.6通常我们配制时

会使C（HAc）=0.1mol/L，或是C（HAc）=0.2mol/L等若是配制C（HAc）=0.1mol/L，贝UC（NaAc）=0.56mol/L称虽醋

酸钠固体质虽为82*0.56=46克虽取冰醋酸体积为

0.1*1000/17.5=5.7mL.将称好的醋酸钠和虽好的冰醋酸参

加1000mL水中溶解、搅拌平均即可.当然若想配制其它的浓度，也可照公式计算即可，通常缓冲溶液不能配的太稀，否则缓冲能力要下降，太浓的话乂糜费试剂.

苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液

0.1mol/LNaOH（ml）

0.2mol/L苯一甲酸氢钾（ml）

加水至（ml）

0.2mol/L苯二甲酸氢钾溶液：

称取在硫酸枯燥器中枯燥过

24小时的苯二甲酸氢钾20.44g溶于水中，稀释至500ml.

磷酸缓冲液（0.2mol/L）

0.2mol/LNaH2PO4

0.2mol/LNa2HPO4（ml）

0.2mol/LNaH2PO4（ml）

5.8

磷酸盐缓冲液（PBS）配制办法

0.01MPBS

PBS（135mMNaCl,2.7mMKCl,1.5mMKH2PO4,and

8mMK2HPO4,pH7.2）

称NaCl,KCl,KH2PO4（orNa2HPO4）和K2HPO4,溶于800ml蒸储水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4,最后加蒸储水定容至1L.保管于4C冰箱中即可.

需要注意的是，通常所说的浓度0.01M指的是缓冲溶液中

所有的磷酸根浓度，而非Na离子或K离子的浓度，Na离子和K离子只是用来调节渗透压的.

母液的配制：

Na2HPO4:

称取Na2HPO4-12H2O，溶于1000ml水NaH2PO4:

称取NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml水

各种浓度PB（pH=7.4）的配制：

先配PB（pH=7.4,100ml）:

取19ml0.2mol/L的NaH2PO4,81ml0.2mol/L的Na2HPO4,即可.

然后只需将PB（pH=7.4）按相应比例适当稀释即可，如：

PB（PH=7.4）:

取500mlPB,加水稀释至1000ml即可.

取50mlPB,加水稀释至1000ml即可.

PB（PH=7.4）:

取100ml0.2MPB,加水稀释至1000ml即可.

若需要NaCl的话，参加NaCl至0.9%（g/100ml）即可.

另：

其它各种另PH值的PB（100ml）配方：

pHNaH2PO4（ml）Na2HPO4（ml）

5.8928

5.99010

6.18515

6.85149

6.94555

7.03862

7.13367

7.22872

7.32377

7.419ml81ml

7.51684

7.61387

7.9793

称取8gNaCl、KCl、Na2HPO4和KH2PO4,溶于800ml

蒸储水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4,最后加蒸储水

定容至1L即可在15lbf/in2（1034x105Pa）高压下蒸气灭菌（至少20分钟），保管存于室温或4C冰箱中.

需要注意的是，通常所说的浓度指的是缓冲溶液中所有的磷

酸根浓度，而非Na离子或K离子的浓度，Na离子和K离子只是用来调节渗透压的.如果是用于免疫组化的话，则需要

在配置的时候辨别参加100u/ml青霉素和链霉素之后再调

PH、定容、灭菌消毒.

PH7.67.47.27.0

H2O1000100010001000

NaCl8.58.58.58.5

Na2HPO42.22.2

2.22.2

依据经历来看，新鲜配置的PBS搅匀后其PH值约在7.2-7.4之间，可是在温度的影响下，尤其在夏天，其电离常数发作了改动，在经过昼夜的时间后，PH值会明显改动（我亲自

测过偏酸）.所以做实验的同学可要注意了，PH值能够会影

响实验后果，甚至能够招致阴性.所以务必记得这个时候和天气，要增强实验条件控制问题.每次使用前最好用试纸测一下过夜了的PBS，如果发作偏酸或偏碱，注意重新换新液.

PBS缓冲液

称取NaCl8g,KCl,Na2HPO4?

12H2O,KH2PO4,浴于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4，加水定容至1L,常温保管备用.

PBST缓冲液

取300plTween20参加PBS100ml中，混匀后即刻使用.现用现配.

如果是把所有固体加年夜十倍，配置为浓缩液，任务时候十倍稀释，那么，在刚配好浓缩液时，PH在6.5左右，明显

偏酸.不能用盐酸调.虽然可以用氢氧化钠颗粒调，然则有更方便的办法.

十倍稀释以后，PH自动升高到所需要的值.不需要其它任何处置.这个可以先取少虽试一试，配好之后再测一次~

2.向烧杯中参加约800ml的去离子水，充沛搅拌溶解.

3.滴加浓盐酸将pH值调节至8.0,然后参加去离子水将溶液定容至1L.

4.低温局压火菌后，室温保管^

注意：

上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配

方中弥补1mMCaCl2和0.5mMMgCl2.

0.05mol/LPBS（磷酸缓冲液PhosphateBufferSolution,PBS）的配制：

甲液：

0.05mol/LNa2HPO4溶液：

称取磷酸氢二钠，加蒸储水至1000ml;

乙液：

0.05mol/LKH2P04溶液：

称取磷酸二氢钾，加蒸储水至1000m1.

将甲乙液分装在棕色瓶内，于4C冰箱中保管，用时甲、乙两液各按分歧比例混合，即可得所需pH的缓冲液，见下表：

pH甲液ml乙液mI

5.59

5.0

95.0

5.91

10.0

90.0

6.24

20.0

80.0

6.47

30.0

70.0

6.64

40.0

60.0

6.81

50.0

6.98

7.17

7.38

7.73

8.04

你要配制pH=6.8的PBS,可用甲、乙液各50ml混合即可.

硼酸缓冲液（0.2mol/L硼酸盐）

0.05mol/L硼砂（ml）

0.2mol/L硼酸（ml）

硼砂易失去结晶水，必需在带塞得瓶中保管；

硼砂溶液也可以用半中和的硼酸溶液替代

盐酸-氯化钾缓冲液

0.1mol/LHCl（ml）

0.02mol/LKCl（ml）

加水至

（ml

）

加水

至

100

0.02mol/LKCl溶液：

溶7.455g氯化钾于水中，稀释至

500ml

苯二甲酸氢钾-盐酸缓冲液

0.1mol/LHCl

0.02mol/L苯二

加

甲酸氢钾（ml）

水

（

（mi）

mi）

0.02mol/L苯二甲酸氢钾溶液：

24小时额苯二甲酸氢钾20.44g溶于水中，稀释至500ml

磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液

0.2mol/L磷酸二氢钾（ml）

ml）

25.00

0.2mol/L磷酸二氢钾溶液：

溶13.616g磷酸二氢钾于水中,

稀释至500ml

硼酸-氯化钾-氢氧化钠缓冲液

0.1mol/LNaO

H（ml）

0.2mol/L硼酸-

氯化钾（ml）