土壤各种氮地测定Word下载.docx

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用橡皮塞塞紧，振荡30min，立即过滤于50mL三角瓶中（如果土壤NH4+—N含量低，可将液土比改为2.5:

1）。

吸取滤液25.0mL（含NH4+—N25µ

g以上）放入半微量定氮蒸馏器中，用少量水冲洗，先把盛有20g·

–1硼酸溶液5mL的三角瓶放在冷凝管下，然后再加120g·

–1 

MgO悬浊液10mL于蒸馏室蒸馏，待蒸出液达30～40mL时（约10min）停止蒸馏，用少量水冲洗冷凝管，取下三角瓶，用0.005mol·

L-11/2H2SO4标准液滴至紫红色为终点，同时做空白试验。

5结果计算

土壤中铵态氮NH4+—（N）含量（mg·

kg-1）= 

式中：

c——0.005mol·

L-11/2H2SO4标准溶液浓度；

V——样品滴定硫酸标准溶液体积（mL）；

V0——空白滴定硫酸标准溶液体积（mL）；

14.0——氮的原子摩尔质量（g·

mol-1）；

ts——分取倍数；

103——“换算系数”（包括mL换算为L，10-3；

g换算为mg，103；

换算为kg，103）；

m——烘干样品质量（g）。

2mol·

L-1KCl浸提—靛酚蓝比色法

L-1KCl溶液浸提土壤，把吸附在土壤胶体上的NH4+及水溶性NH4+浸提出来。

土壤浸提液中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝，溶液的颜色很稳定。

在含氮0.05～0.5mol·

L-1的范围内，吸光度与铵态氮含量成正比，可用比色法测定。

.2试剂

（1）2mol·

称取149.1g氯化钾（KCl，化学纯）溶于水中，稀释至1L。

（2）苯酚溶液 

称取苯酚（C6H5OH，化学纯）10g和硝基铁氰化钠[Na2Fe（CN）5NO2H2O]100mg稀释至1L。

此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。

（3）次氯酸钠碱性溶液 

称取氢氧化钠（化学纯）10g、磷酸氢二钠（Na2HPO4·

7H2O, 

化学纯）7.06g、磷酸钠（Na3PO4·

12H2O, 

化学纯）31.8g和 

52.5g·

L-1次氯酸钠（NaOCl，化学纯，即含5%有效氯的漂白粉溶液）10mL溶于水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。

（4）掩蔽剂 

将400g·

L-1的酒石酸钾钠（KNaC4H4O6·

4H2O, 

化学纯）与100g·

L-1的EDTA二钠盐溶液等体积混合。

每100mL混合液中加入10 

L-1氢氧化钠0.5mL。

（5）2.5µ

g·

mL 

–1铵态氮（NH4+—N）标准溶液 

称取干燥的硫酸铵[（NH4）2SO4，分析纯]0.4717g溶于水中，洗入容量瓶后定容至1L，制备成含铵态氮（N）100µ

–1的贮存溶液；

使用前将其加水稀释40倍，即配制成含铵态氮（N）2.5µ

–1的标准溶液备用。

3仪器与设备 

往复式振荡机、分光光度计。

4分析步骤

（1）浸提 

称取相当于20.00g干土的新鲜土样（若是风干土，过10号筛）准确到0.01g，置于200mL三角瓶中，加入氯化钾溶液100mL，塞紧塞子，在振荡机上振荡1h。

取出静置，待土壤—氯化钾悬浊液澄清后，吸取一定量上层清液进行分析。

如果不能在24h内进行，用滤纸过滤悬浊液，将滤液储存在冰箱中备用。

（2）比色 

吸取土壤浸出液2mL～10mL（含NH4+—N2µ

g～25µ

g）放入50mL容量瓶中，用氯化钾溶液补充至10mL，然后加入苯酚溶液5mL和次氯酸钠碱性溶液5mL，摇匀。

在20℃左右的室温下放置1h后（注1），加掩蔽剂1mL以溶解可能产生的沉淀物，然后用水定容至刻度。

用1cm比色槽在625nm波长处（或红色滤光片）进行比色，读取吸光度。

（3）工作曲线 

分别吸取0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL 

NH4+—N标准液于50mL容量瓶中，各加10mL氯化钠溶液，同

（2）步骤进行比色测定。

土壤中NH4+—（N）含量（mg·

ρ——显色液铵态氮的质量浓度（µ

–1）；

V——显色液的体积（mL）；

m

m——样品质量（g）。

注1. 

显色后在20℃左右放置1h,再加入掩蔽剂.过早加入会使显色反应很慢,蓝色偏弱;

加入过晚,则生成的氢氧化物沉淀可能老化而不易溶解.

土壤硝态氮的测定

酚二磺酸比色法

土壤浸提液中的NO3－—N在蒸干无水怕条件下能与酚二磺酸试剂作用，生成硝基酚二磺酸。

C6H3OH（HSO3）2+HNO3→C6H2OH（HSO3）2 

NO2+H2O

2，4-酚二磺酸 

6-硝基酚-2，4-二磺酸

此反应必须在无水条件下才能迅速完成，反应产物在酸性介质中无色，碱化后则为稳定的黄色溶液，黄色的深浅与NO3－—N含量在一定范围内成正相关，可在400～425nm处（或用蓝色滤光片）比色测定。

酚二磺酸法的灵敏度很高，可测出溶液中0.1mol·

NO3－—N，测定范围为0.1～2mol·

L-1。

分光光度计、水浴锅、瓷蒸发皿。

3试剂 

CaSO4·

2H2O（分析纯、粉状）、CaCO3（分析纯、粉状）、Ca（OH）2（分析纯、粉状）、MgCO3（分析纯、粉状）、Ag2SO4（分析纯、粉状）、1:

1 

NH4OH、活性碳（不含NO3－）。

溶液配制

（1）酚二磺酸试剂：

称取白色苯酚（C6H5OH，分析纯）25.0g置于500mL三角瓶中，以150mL纯浓H2SO4溶解，再加入发烟H2SO475mL并置于沸水中加热2h，可得酚二磺酸溶液，储于棕色瓶中保存。

使用时须注意其强烈的腐蚀性。

如无发烟H2SO4，可用酚25.0g，加浓H2SO4225mL，沸水加热6h配面。

试剂冷后可能析出结晶，用时须重新加热溶解，但不可加水，试剂必须贮于密闭的玻塞棕色瓶中，严防吸湿。

（2）10µ

mL-1 

NO3－—N标准溶液：

准确称取KNO3（二级）0.7221g溶于水，定容1L，此为100µ

NO3－—N溶液，将此液准确稀释10倍，即为10µ

NO3－—N标准溶液。

.4操作步骤 

称取新鲜土样（注1）50g放在500mL三角瓶中，加入CaSO4·

2H2O0.5g（注2）和250mL水，盖塞后，用振荡机振荡10min。

放置5 

min后，将悬液的上部清液用干滤纸过滤，澄清的滤液收集地干燥洁净的三角瓶中。

如果滤液因有机质而呈现颜色，可加活性碳除之（注3、4）。

（2）测定 

吸取清液 

25～50mL（含NO3－—N20～150µ

g）于瓷蒸发皿中，加CaCO3约0.05g（注5），在水浴上蒸干（注6），到达干燥时不应继续加热。

冷却，迅速加入酚二磺酸试剂2 

mL，将皿旋转，使试剂接触到所有的蒸干物。

静止10min使其充分作用后，加水20 

mL，用玻璃棒搅拌直到蒸干物完全溶解。

冷却后缓缓加入1：

NH4OH（注7）并不断搅混匀，至溶液呈微碱性（溶液显黄色）再多加2mL，以保证NH4OH试剂过量。

然后奖溶液全部转入100mL容量瓶中，加水定容（注8）。

在分光光度计上用光径1cm比色杯在波长420nm处比色，以空白溶液作参比，调节仪器零点。

（3）NO3－—N工作曲线绘制：

分别取10µ

mL-1NO3－—N标准液0、1、2、5、10、15、20mL于蒸发皿中，在水浴上蒸干，与待测液相同操作，进行显色和比色，绘制成标准曲线，或用计算器求出回归方程。

土壤中NO3－—N含量（mg·

kg-1）=

ρ（NO3－—N）——从标准曲线上查得（或回归所求）的显色液NO3－—N质量浓度（µ

mL-1）；

m——烘干样品质量，g。

注释

注1．硝酸根为阴离子，不为土壤胶体吸附，且易溶于水，很易在土壤内部移动，在土壤剖面上下层移动频繁，因此测定硝态氮时注采样深度。

即不仅要采集表层土壤，而且要采集心土和底土，采样深度可达40cm、60 

cm以至120 

cm。

试验证明，旱地土壤上分析全剖面的硝态氮含量能更好地反映土壤人供氮水平。

和表层土壤比较，则全剖面的硝态氮含量与生物反应之间有更好的相关性，土壤经风或烘干易引起NO3－—N变化，故一般都用新鲜土样测定。

注2．用酚二磺酸法测定硝态氮，首先要求浸提液清彻，不能混浊，但是一般中性或碱性土壤滤液不易澄清，且带有机质的颜色，为此在浸提液中应加入凝聚剂。

凝聚剂的种类很多，有CaO、Ca（OH）2、CaCO3、MgCO3、KAl（SO4）2、CuSO4、CaSO4等，其中CuSO4有防止生物转化的作用，但在过滤前必须以氢氧化钙或碳酸镁除去多余的铜，因此以CaSO4法提取较为方便。

注3．如果土壤浸提液由于有机质而有较深的颜色，则可用活性炭除去，但不宜用H2O2，以防最后显色时反常。

注4．土壤中的亚硝酸根和氯离子是本法的主要干扰离子。

亚硝酸和酚二磺酸产生同样的黄色化合物，但一般土壤中亚硝酸含量极少，可忽略不计。

必要时可加少量尿素、硫尿和氨基磺酸（20g·

L-1NH2SO3H）以除去之。

例如亚硝酸根如果超出了1µ

mL-1时，一般每10mL待测液中加入20mg尿素，并放置过夜，以破坏亚硝酸根。

检查亚硝酸根的方法：

可取待测液5滴于白瓷板上，加入亚硝酸试粉0.1g，用玻璃棒搅拌后，放置10min，如有红色出现，即有1mg·

L-1亚硝酸根存在。

如果红色极浅或无色，则可省去破坏亚硝酸根手续。

NO3-+3Cl-+4H+→NOCl+Cl2+2H2O

亚硝酰氯

Cl-对反应的干扰，主要是加酸后生成亚硝酰氯化合物或其它氯的气体。

如果土壤中含氯化合物超过15mg·

kg-1，则必须加Ag2SO4除去，方法是每100mL浸出液中加入Ag2SO40.1g（0.1g 

Ag2SO4可沉淀22.72mg 

Cl-），摇动15min，然后加入Ca（OH）20.2g及MgCO30.5g，以沉过量的银，摇动5min后过滤，继续按蒸干显色步骤进行。

注5．在蒸干过程中加入碳酸钙是为了防止硝态氮的损失。

因为在酸性和中性条件下东干易导致硝酸离子的分解，如果浸出液中含铵盐较多，更易产生负误差。

注6．此反应必须在无水条件下才能完成，因此反应前必须蒸干。

注7．碱化时应用NH4OH，而不用NaOH或KOH，是因为NH3能与Ag+络合成水溶性的[ 

（NH3）2]+，不致生成Ag2O的黑色沉淀而影响比色。

注8．在蒸干前，显色和转入容量瓶时应防止损失。

4.4.2.2还原蒸馏法

4.4.2.2.1方法原理 

土壤浸出液中的NO3-和NO2-在氧化镁存在下，用FeSO4-Zn还原蒸出氨气为硼酸吸收，用盐酸标准溶液滴定。

单测硝态氮时，土壤用饱和硫酸钙溶液浸提，联合测定铵态氮和硝态氮时，土壤用氯化钾浸提。

4.4.2.2.2试剂

（1）饱和硫酸钙溶液 

将硫酸钙加入水中充分振荡，使其达到饱，澄清。

（2）0.01mol·

L-1HCl标准溶液 

将浓盐酸（HCl，ρ≈1.19g·

mL-1,分析纯）约1mL稀释至1L，用硼砂标准液标定其准确浓度。

（3）甲基红—溴甲酚绿混合指示剂 

称取甲基红0.1g和溴甲酚绿0.5g于玛瑙研钵中，加入100mL乙醇研磨至完全溶解。

（4）氧化镁悬液 

称取氧化镁（MgO，化学纯）12g，放入100mL水中，摇匀。

（5）硫酸亚铁锌还原剂 

称取锌粉（Zn，化学纯）与亚铁硫酸（FeSO4·

7H2O，化学纯）按1：

5混合，磨细。

（6）硼酸指示剂溶液 

称取硼酸20g溶于水中，稀释至1L，加入甲基红—溴甲酚绿指示剂20mL，并用稀碱或稀酸调节溶液为紫红色（约pH4.5）。

4.4.2.2.3主要仪器 

往复式振荡机和定氮蒸馏装置。

4.4.2.2.4操作步骤

（1）浸提。

见4.1.3.1.1.4

（1）

（2）蒸馏 

吸取滤液25mL,放入定氮蒸馏器中，加入氧化镁悬液10mL，通入蒸汽蒸馏去除铵态氮，待铵态氮去除后（用钠氏试剂检查），加入硫酸亚铁锌还原剂约1g，或节瓦尔德合金（过60号筛）0.2g，继续蒸馏，在冷凝管下端用硼酸溶液吸收还原蒸出的氨。

用盐酸标准溶液滴定。

同和空白试验。

4.4.2.2.5结果计算

土壤硝态氮NO3－—（N）含量（mg·

c——盐酸标准溶液浓度（mol·

L-1）；

V——样品滴定HCl标准溶液体积（mL）；

V0——空白滴定HCl标准溶液体积（mL）；

103——“换算系数”（包括mL换算为L，10-3；

*硝态N（紫外分光光度校正因数法）双波长紫外比色法

1.浸提：

称取20.00g1mm风干土，加入氯化钾溶液100ml，在振荡机上振荡1h，过滤。

2mol/l氯化钾溶液：

称取149.1g氯化钾，溶于水中，稀释至1L。

10μg/mlNO3-—N标准溶液：

准确称取硝酸钾0.7221g溶于水，定容1L，此为100μg/mlNO3-—N标准溶液，将此液准确稀释10倍，即为10NO3-—N标准溶液。

2.约测：

吸取水样（土壤浸提液）注入1cm光径石英比色杯中，以浸提剂为参比，在210nm波长处约测吸收值。

根据约测结果，测定浸出液应予稀释的倍数，使吸收溶液吸收值在0.1~0.8之间。

3.测定：

水样（浸出液）稀释一定倍数后，吸取25ml放入50ml三角瓶中，加入1.00ml1：

9硫酸溶液（防止铵态氮转化为硝态氮），摇匀。

装入1cm光径石英比色杯在紫外分光光度计上分别于210nm和275nm处测定吸光度A210和A275，以同样稀释酸化后的饱和硫酸钙溶液为参比溶液，调节仪器的零点。

4.工作曲线绘制：

吸取10mg/LNO3—N标准溶液0.00、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00ml于50ml容量瓶中，（加一定体积浸提剂）定容。

即得0.00、0.20、0.40、0.80、1.20、1.60mg/LNO3—N标准溶液。

各取25.00mL于50ml三角瓶中，加1.00ml1：

9硫酸溶液，摇匀。

装入1cm光径石英比色杯在紫外分光光度计上分别于210nm和275nm处测定吸光度A210和A275。

5.结果计算：

ΔA=A210-A275f

其中f为校正因数，在土壤有机质含量小于50g/kg时，f可取2.2，若大于土壤有机质含量大于50g/kg，需重新测定。

硝态氮含量（mg/kg）=c*V*D/m

其中c为溶液中硝态氮浓度（mg/L），V为浸提液体积（mL），m为烘干土样质量（g），D为浸出液稀释倍数，不稀释时为1。

*氨态N2mol•L-KCl浸提—靛酚蓝比色法

1）方法原理

2mol•L-1KCl溶液浸提土壤，把吸附在土壤胶体上的NH4+及水溶性NH4+浸提出来。

在含氮0.05～0.5mol•L-1的范围内，吸光度与铵态氮含量成正比，可用比色法测定。

2）试剂

（1）2mol•L-1KCl溶液称取149.1g氯化钾（KCl，化学纯）溶于水中，稀释至1L。

（2）苯酚溶液称取苯酚（C6H5OH，化学纯）10g和硝基铁氰化钠100mg稀释至1L。

（3）次氯酸钠碱性溶液称取氢氧化钠（化学纯）10g、磷酸氢二钠（Na2HPO4•7H2O,化学纯）7.06g、磷酸钠（Na3PO4•12H2O,化学纯）31.8g和52.5g•L-1次氯酸钠（NaOCl，化学纯，即含5%有效氯的漂白粉溶液）10mL溶于水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。

（4）掩蔽剂将400g•L-1的酒石酸钾钠（KNaC4H4O6•4H2O,化学纯）与100g•L-1的EDTA二钠盐溶液等体积混合。

每100mL混合液中加入10mol•L-1氢氧化钠0.5mL。

g•mL–1铵态氮（NH4+—N）标准溶液称取干燥的硫酸铵0.4717g溶于水中，洗入容量瓶后定容至1L，制备成含铵态氮（N）100µ

g•mL–1的贮存溶液；

g•mL–1的标准溶液备用。

3）仪器与设备

4）分析步骤

（1）浸提称取相当于20.00g干土的新鲜土样（若是风干土，过10号筛）准确到0.01g，置于200mL三角瓶中，加入氯化钾溶液100mL，塞紧塞子，在振荡机上振荡1h。

（2）比色吸取土壤浸出液2mL～10mL（含NH4+—N2µ

（3）工作曲线分别吸取0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL

5）结果计算

土壤中NH4+—（N）含量（mg•kg-1）=

g•mL–1）；

V——显色液的体积（mL）；

ts——分取倍数；

m——样品质量（g）。

6）注释

注1.显色后在20℃左右放置1h,再加入掩蔽剂.过早加入会使显色反应很慢,蓝色偏弱;

土壤pH值的测定方法

（PH计测定法）

操作步骤：

称土10克，放入50毫升烧杯中，加入蒸馏水25毫升用搅拌器搅拌1分钟，使土体充分散开，放置半小时然后用酸度计测定。

具体操作方法如下：

1.接通电源，开启电源开关，预热15分钟。

2.选择精确位数（0.01和0.001两档）中的0.01档和调节档的自动档。

3.按要求配置PH为4.01和6.86的两种标准缓冲溶液，将电极依次放入进行标定，如此重复直到仪器显示相应的pH值较稳定为止（读书相差不超过0.1）。

4.将洗干净的电极放入待测液中，仪器即显示待测液的pH值，待显示数字较稳定时（5秒内PH变化不超过0.02）读数即可,此值为待测液的pH值。

5.取出电极,用水冲洗,用滤纸条吸干水后依次进行测定。

注意：

1.保护电极的缓冲溶液1摩尔每升的KCl溶液：

称取7.5gKCl溶解定容到100ml蒸馏水中即可。

2.PH计测定时最好把温度调节到室温再去标定及测定，否则就开空调来测定。

土壤碱解氮的测定

（碱解扩散法）

试剂：

⑴1.0摩尔/升（mol/L）氢氧化钠溶液；

称取化学纯氢氧化钠40克，用水溶解后冷却定容到1升。

⑵定氮混合指示剂：

分别称取0.1克甲基红和0.5克溴甲酚绿指示剂，放入玛瑙研钵，先加少量95%酒精研磨溶解，最后定容到100毫升95%酒精中。

⑶20克/升硼酸-指示剂溶液；

称20克硼酸溶于约900毫升水中，加入甲基红-溴甲酚绿指示剂20毫升，用0.1摩尔/升的盐酸和氢氧化钠溶液调其PH为4.3，此时溶液为紫红色。

再硼酸溶液加水定容到1升。

⑷0.01摩尔/升盐酸标准溶液：

通过0.1摩尔/升的盐酸稀释10倍而得（0.1为量取8.3毫升浓盐酸，在1升容量瓶内加水定容到1升）

标定方法：

称取在250度干燥4小时的无水碳酸钠M（约0.22克）于250毫升锥形瓶中，加50毫升水溶解，加两滴甲基红指示剂，用0.1摩尔/升盐酸滴定，在出现红色后加热煮沸、冷却，反复直至红色不退去为止，记录用量V（约为40ml左右）C约等于0.1000左右计算公式：

盐酸C=M/（0.05299*V）

⑸0.1摩尔/升氢氧化钠：

将1.0摩尔/升氢氧化钠溶液稀释10倍而得。

⑹碱性胶液；

取阿拉伯胶粉40克在装有50毫升水的烧杯中，放于80度温度的水浴锅中搅拌促溶，取出冷却加入甘油（丙三醇）20毫升，饱和碳酸钾水溶液20毫升，搅拌混匀，装瓶。

饱和的碳酸钾溶液：

称取碳酸钾溶解到蒸馏水中直到不能溶解为止。

测定步骤：

1称土:

精确称土2克均匀铺在扩散皿外室中，水平轻轻旋转扩散皿，使样品均匀铺平，切忌土样飞入扩散皿内室。

2.加吸收剂-加碱-封闭：

在扩散皿内室中加入2毫升20克/升硼酸-指示剂溶液，然后在扩散皿的外室边缘涂上碱性胶液，迅速加入1.0摩尔/升氢氧化钠溶液10毫升于皿的外室中，立即用毛玻璃盖严（毛面朝下）。

加氢氧化钠时应防止溅在内室边缘或毛玻璃盖上，以免影响测定结果。

3.放入恒温箱：

水平的轻轻旋转扩散皿，使溶液与土壤充分混匀，用橡皮筋固定，随后放入40度恒温箱中，24小时后取出。

4.滴定：

取出扩散皿，用0.01摩尔/升盐酸标准溶液，半微量滴定管滴定内室硼酸中所吸收的氨量，由蓝色到微红色为终点，记下盐酸用量，设为V。

同时做空白（除外室不称土，其他步骤一样），设空白用盐酸V0。

结果计算

碱解氮含量（毫克/千克）=C*（V-V0）*14*1000/M=7000CV

注意事项：

注意扩散皿要用少量盐酸漂，一定要刷干净尤其是内室，否则一加硼酸，就会立刻变成蓝色。

如变成蓝色，则需重新做。

（补充）

仪器和试剂：

1.仪器：

50套扩散皿，恒温箱，1个半微量酸式滴定管，1个玻璃棒，1支2ml移液管，1支10ml移液管，

2.试剂：

1）1.8mol/L氢氧化钠溶液；

称取化学纯氢氧化钠72克，用水溶解后冷却定容到1L

2）2%硼酸溶液（W/V）；

称10克硼酸用约60度热蒸馏水溶解，冷却稀释到500ml，最后用稀