选修1知识清单填空版分析Word格式.docx

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（2）前者是对照，后者是对照。

还可以设置一组对照（2ml蒸馏水）

几种常用发酵菌种的比较

菌种

项目

酵母菌

醋酸菌

毛霉

乳酸菌

生物学分类

真核生物

原核生物

代谢类型

异养兼性厌氧

异养需氧

异养厌氧

繁殖方式

适宜条件下出芽生殖

二分裂生殖

孢子生殖

生产应用

酿酒

酿醋

制作腐乳

制作泡菜

发酵条件

前期需氧，后期不需氧

一直需氧

不需氧

深化拓展：

1、由于醋酸菌和乳酸菌属于原核生物，因此在利用这两类微生物时，其环境中一定不要加入等抗生素。

2、在葡萄酒自然发酵的过程中,起主要作用的是附着在葡萄皮表面的.在发酵过程中,随着酒精浓度的提高,红葡萄皮的色素也进入发酵液,使葡萄酒呈现深红色.在缺氧呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到制约。

3、控制发酵条件的作用①醋酸菌对氧气的含量特别敏感，当进行深层发酵时，即使只是短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌死亡。

②醋酸菌最适生长温度为30～35℃，控制好发酵温度，使发酵时间缩短，又减少杂菌污染的机会。

③有两条途径生成醋酸：

直接氧化和以酒精为底物的氧化。

2、微生物的实验室培养

1、培养基：

人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。

2、培养基按照物理性质可分为、和。

在液体培养基中加入凝固剂（是从红藻中提取的一种多糖，在配制培养基中用作常用的凝固剂，但不止这一种凝固剂）后，制成琼脂固体培养基。

微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的。

根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。

应用于工业或生活生产。

应用于微生物的分离和鉴定。

则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。

3、按照成分培养基可分为和。

按照培养基的用途，可将培养基分为和。

4、培养基的化学成分包括等。

6、：

能为微生物的代谢提供碳元素的物质。

如CO2、NaHCO3等无机碳源；

糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。

异养微生物只能利用有机碳源。

：

能为微生物的代谢提供氮元素的物质。

如N2、NH3、NO3-、NH4+（无机氮源）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等。

只有固氮微生物才能利用N2。

7、无菌技术：

获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面：

①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行。

②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行。

③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在进行。

④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。

无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？

10、消毒与灭菌的区别

消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子菌落.芽孢，一种休眠体；

孢子，一种生殖细胞。

）。

消毒方法常用，（对于一些不耐高温的液体）还有、。

灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括。

灭菌方法有、、。

灭菌方法选择：

①接种环、接种针、试管口等使用；

②玻璃器皿、金属用具等使用，所用器械是；

③培养基、无菌水等使用，所用器械是。

④表面灭菌和空气灭菌等使用，所用器械是。

制作牛肉膏蛋白胨固体培养基

（1）方法步骤：

（2）倒平板操作的步骤：

①将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，拿装有培养基的锥形瓶，拔出棉塞。

②右手拿锥形瓶，将瓶口迅速通过火焰。

③用左手的拇指和食指将培养皿，右手将锥形瓶中的培养基（约10～20mL）倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。

④等待平板，大约需5～10min。

然后，将平板放置，使培养皿盖在下、皿底在上。

纯化大肠杆菌

（1）微生物接种的方法最常用的是和。

（2）平板划线法：

接种环第一次灼烧，目的是；

每次划线前灼烧，目的是；

划线结束灼烧，目的是。

灼烧后冷却目的是。

（3）稀释涂布平板法：

是将菌液进行，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。

一般分为和

两步。

微生物计数方法

1、显微镜直接计数法，利用在显微镜下计数，但不能区分活菌与死菌。

2、活菌计数法，在稀释度足够高的菌液中聚集在一起的微生物被分散成单个细胞，形成单个菌落，选择菌落数在之间的平板计数。

菌落数比活菌实际数，因为。

统计结果用来表示。

3、滤膜法，饮用水过滤后，滤膜放在上培养，计数大肠杆菌菌落。

菌种的保存

（1）对于频繁使用的菌种，可以采用的方法。

（2）对于需要长期保存的菌种，可以采用的方法。

确定培养基制作是否合格的方法：

将在恒温箱中保温1～2天，无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。

3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

①筛选菌株：

利用筛选菌株。

②测定微生物数量的常用方法：

统计菌落数目和显微镜直接计数。

③土壤取样→选择培养→梯度稀释→涂布平板→微生物的培养与观察→挑选菌落

尿素分解菌的分离：

尿素分解菌能合成将尿素分解成氨。

氨使培养基的PH升高。

以的培养基中加入指示剂，培养尿素分解菌，指示剂变。

筛选菌株

（1）实验室中微生物的筛选应用的原理：

人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。

（2）选择性培养基：

在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。

（3）配制选择培养基的依据：

根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。

例如，培养基中不加入有机物可以选择培养；

培养基中不加入氮元素，可以选择培养；

加入高浓度的食盐可选择培养等。

实验设计：

实验设计包括实验方案，所需仪器、材料、用具和药品，具体的实施步骤以及时间安排等的综合考虑和安排。

（1）土壤取样：

同其他生物环境相比，土壤中的微生物，数量最大，种类最多。

在富含有机质的土壤表层，有更多的微生物生长。

从的土壤中取样。

铲去，在距地表约的土壤层取样。

（2）样品的稀释：

样品的稀释程度将直接影响平板上生长的菌落数目。

在实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30~300之间、适于计数的平板。

测定土壤中细菌的数量，一般选用，测定放线菌的数量，一般选用，测定真菌的数量，一般选用。

（3）微生物的培养与观察：

不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。

每隔24小时统计一次菌落数目，选取的记录作为结果，这样可以防止因培养时间不足而导致一楼菌落的数目。

一般来说，在一定的培养条件下（相同的培养基、唯独及培养时间），同种微生物表现出稳定的菌落特征。

如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？

统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的

每克样品中的菌落数=其中，C代表，V代表，M代表。

4、菊花的组织培养

一、植物组织培养的基本过程

1、原理：

细胞分化的实质：

2、全能性表达的条件：

3、基本过程：

离体的植物组织或细胞→愈伤组织→丛芽、生根（试管苗）→完整植株。

细胞分化：

在生物个体发育过程中，细胞在上出现稳定性差异的过程。

细胞分化是一种持久性的变化，它有什么生理意义？

脱分化（去分化）：

由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程。

再分化：

愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官的过程。

4、愈伤组织：

排列疏松而无规则，高度液泡化的呈无定型状态的。

二、菊花的组织培养

1、材料选取：

2、营养：

MS培养基，一般添加（浓度、使用顺序、用量比例都会影响实验）。

3、过程：

制备MS培养基→外植体消毒→接种→培养→移栽→栽培

4、影响植物组织培养的条件：

（1）材料：

不同的植物组织，培养的难易程度差别很大。

一般来说，容易进行的植物容易进行组织培养。

选取生长旺盛嫩枝进行组培的是嫩枝生理状态好，容易诱导。

（2）营养：

离体的植物组织和细胞，对营养、环境等条件的要求相对特殊，需要配制适宜的培养基。

常用的培养基是，其中含有的大量元素是N、P、S、K、Ca、Mg，微量元素是Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I、Co，有机物有甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等。

（3）激素：

植物激素中和是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。

其使用的先后顺序、用量的比例等都影响结果。

若生长素与细胞分裂素比值偏高，则。

（4）环境条件：

等环境条件。

（5）无菌技术。

植物组织培养技术与微生物培养技术的比较

　比较项目

植物组织培养

微生物培养

含义

在无菌条件下，将离体的植物体器官或组织接种在适当的培养基上进行培养，最终发育成完整植物体

在无菌条件下，在适宜的营养和环境条件下对微生物的培养

培养基成分

水、矿质元素、蔗糖、维生素、有机添加物和植物激素等

水、无机盐、碳源、氮源等

特殊操作要求

严格控制无菌操作，在培养过程中要更换培养基，调节细胞分裂素和生长素的比例

严格控制无菌操作，整个培养过程无需更换培养基

注：

在这两种技术中均需要一定的营养物质，但营养物质的划分标准不同。

5、操作流程

（1）配制MS固体培养基：

需提前配制各种。

·

在菊花组织培养中，可以不添加

微生物培养基以为主，MS培养基则需提供大量。

（2）外植体的消毒：

菊花茎段用冲洗后可加少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右。

用吸干外植体表面的水分，放入中摇动2~3次，持续6~7s，立即将外植体取出，在中清洗。

取出后仍用吸干外植体表面水分，放入中1~2min。

取出后，在中至少清洗3次，漂洗消毒液。

注意：

对外植体进行表面消毒时，既要考虑，又要考虑。

（3）接种：

接种过程中插入外植体时朝上，每个锥形瓶接种7～8个外植体。

外植体接种与细菌接种相似，操作步骤相同，而且都要求。

（4）培养：

应该放在中进行，并，保持适宜的温度（18~22℃）和光照（12h）。

（5）移栽：

移栽之前要先进行。

外植体在培养过程中可能会被污染，可能的原因有；

等。

5　果胶酶在果汁生产中的作用

（一）基础知识

1．植物细胞壁以及胞间层的主要组成成分有。

并且两者不溶于水，在果汁加工中，既影响出汁率，又使果汁浑浊。

2．果胶酶的作用是能够将，瓦解植物的细胞壁及胞间层，并且使果汁变得澄清。

3．果胶酶是总称，包括等。

4．果胶酶的来源：

5．影响酶活性的因素包括：

6．酶的活性是指。

其高低用一定条件下酶所催化的某一化学反应的速度来表示。

酶的反应速度是指来表示。

7．果胶酶的用量：

生产果汁时，为了使果胶酶得到充分的利用，需要控制好酶的用量，用量的多少常要通过实验设计来探究。

（二）．实验设计

〔设计一〕探究温度对酶活性的影响

1．进行实验前要解决的几个问题：

①此实验的自变量是；

根据，你应该要确保各实验组其他

完全相同。

你要观测的因变量是。

2．设计实验

（1）实验原理：

在一恒定PH下，通过改变温度来确定最适宜的温度

（2）实验步骤：

①搅拌器搅拌制苹果泥。

②将分别装有苹果泥和果胶酶的试管在恒温水浴中保温。

③加入果胶酶反应一段时间。

④过滤果汁。

并记录实验结果。

⑤改变不同的温度后重复上面的实验。

（3）实验结果、结论：

〔设计二〕探究PH对酶活性的影响

①你准备如何设置pH梯度，又将如何控制实验要求的pH？

②此实验应选一个适宜的温度进行水浴加热，并且要控制好其他的因素。

2．设计实验：

可参考温度对酶活性的影响实验，作相应的变动。

〔设计三〕探究果胶酶的用量

①此探究实验是建立在温度和PH对果胶酶活性影响的基础之上的。

此时，研究的变量是，其他因素保持不变。

②实验时可以配制的果胶酶溶液，也可以只配制的果胶酶溶液，然后使用即可，但必需保证必须相同，否则影响实验结果的准确性。

可参考前两个探究实验，作相应的变动。

6血红蛋白的提取和分离

一、实验原理

蛋白质的（形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等）千差万别，由此提取和分离各种蛋白质。

1．凝胶色谱法（分配色谱法）：

（1）原理：

分子量的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程，流动；

分子量的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程，流动。

（2）凝胶材料：

多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。

（3）分离过程：

混合物上柱→洗脱→大分子流动快、小分子流动慢→收集大分子→收集小分子

＊洗脱：

从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。

2．缓冲溶液

由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成（如H2CO3－NaHCO3，NaH2PO4/Na2HPO4等），调节酸和盐的用量，可配制不同pH的缓冲液。

（2）缓冲液作用：

3．凝胶电泳法：

不同蛋白质的不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。

（2）分离方法：

、等。

SDS的作用是使蛋白质迁移速率仅取决于

二、实验步骤

1．样品处理

1红细胞的洗涤

洗涤红细胞的目的是，采集的血样要加入抗凝血剂，及时采用离心分离红细胞，然后用胶头吸管吸出上层透明的，将下层暗红色的倒入烧杯，再加入，缓慢搅拌10min，离心，如此重复洗涤三次，直至，表明红细胞已洗涤干净。

②血红蛋白的释放：

在和作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。

加入蒸馏水后红细胞液体积与原血液体积要相同。

加入甲苯的目的是溶解细胞膜，有利于血红蛋白的释放和分离。

2．粗分离

①分离血红蛋白溶液

将搅拌好的混合溶液离心后，试管中的溶液分为4层。

第一层为无色透明的，第2层为白色薄层固体，是，第3层是红色透明液体，这是，第4层是的暗红色沉淀物。

将试管中的液体用

过滤，除去，于中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。

②透析

取1mL的血红蛋白溶液装入中，将透析袋放入盛有300mL的物质的量的浓度为20mmol/L的，透析12h。

透析可以去除。

3．纯化

思考：

加样的过程中应注意哪些事项？

4.纯度鉴定------SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（选做）

三、注意事项

1.电泳技术：

电泳技术就是在电场的作用下，利用待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而达到对样品进行分离、鉴定或提纯的目的。

2.红细胞的洗涤：

如果分层不明显，可能是的原因。

此外，，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。

3．如何检测凝胶色谱柱的装填是否成功

由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的，检查凝胶是否装填得均匀。

此外，还可以加入，观察色带移动的情况。

如果，说明凝胶色谱柱的性能良好。

如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新装柱。

4．为什么凝胶的装填要紧密、均匀？

如果凝胶装填得不够紧密、均匀，就会在色谱柱内形成无效的空隙，使本该进入凝胶内部的样品分子从这些空隙中通过，搅乱，影响分离的效果。

5．装填完后，立即用洗脱液洗脱的目的：

6．加入柠檬酸钠有何目的？

为什么要低速、短时离心？

为什么要缓慢搅拌？

7．与其他真核细胞相比，红细胞的特点及这一特点对进行蛋白质的分离的意义：

哺乳动物及人的成熟的红细胞是双面凹圆饼状，没有。

其含有的血红蛋白是，因此在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集脱液。

这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作。

10．如何检测血红蛋白的分离是否成功

如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到，随着洗脱液缓慢流出；

如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。

7胡萝卜素的提取

一、胡萝卜素性质：

结晶，化学性质，不溶于水，微溶于乙醇，易溶于。

种类：

依据的数目划分为α、β、γ三类。

其中最主要的组成成分为。

1.作用：

①治疗夜盲症、幼儿生长发育不良、干皮症等疾病；

②常用于食品色素；

③使癌变细胞恢复成正常细胞。

2.提取β－胡萝卜素的方法主要有三种：

①从植物中提取②从大面积养殖的岩藻中获得③利用微生物的发酵生产

二、实验步骤：

①粉碎：

使原料与有机溶剂充分接触，增大溶解度。

②干燥：

脱水温度太高，干燥时间太长会导致胡萝卜素分解。

③萃取

Ⅰ、萃取剂的选择　

选择：

具有的沸点，能够充分溶解胡萝卜素，并且。

Ⅱ、影响萃取的因素

主要因素：

次要因素：

原料颗粒的大小、紧密程度、含水量、萃取的温度和时间等

一般来说，原料颗粒小，萃取温度高，时间长，需要提取的物质就能够充分溶解，萃取效果就好。

萃取前，要将胡萝卜进行。

Ⅲ、胡萝卜素提取

装置的设计：

萃取过程应该避免，采用，这是因为。

为了防止加热时有机溶剂挥发，还要在加热瓶口安装。

萃取液的浓缩可直接使用。

在浓缩之前，还要进行，除去萃取液中的不溶物。

④过滤：

除去萃取液中的不溶物

⑤浓缩：

蒸发出

三、鉴定：

纸层析法