植物细胞工程试题库Word文档格式.docx

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4、基本培养基：

只含有无机盐、蔗糖、维生素和水等最基本成分的合成培养基。

如MS、White、Ntsch、

N6等培养基。

5、中间繁殖体：

在离体培养过程中形成的具有一定形态结构的中间繁殖材料。

6、大量元素：

培养基中浓度超过0.5mmol/L的元素C、HO氮（N）、磷（P）、硫（S）钾（K）

钙（Ca）、镁（Mg）、九种大量元素

7、微量元素：

培养基中浓度低于0.5mmol/L的元素，铁（Fe）、硼（B）、锰（Mh）、铜（Cu）、锌

（Zn）、钼（MO）、氯（Cl）

8、愈伤组织：

在离体培养过程中形成的具有分生能力的一团不规则细胞，多在外植体切面上产生。

9、胚状体：

在离体植物细胞、组织或器官培养过程中，由一个或一些体细胞，经过胚胎发生和发育过

程，形成的与合子胚结构相类似的中间繁殖体。

14、继代培养：

更换新鲜培养基来繁殖同种类型的材料（愈伤组织.芽等）。

10、脱分化：

已分化好的细胞在人工诱导条件下，恢复分生能力，回复到原始无分化状态或分生细

胞状态的过程。

11、再分化：

脱分化后具有分生能力的细胞再经过与原来相同的分化过程，重新形成各类组织和器

官的过程。

12、器官发生：

指在离体培养下的组织或细胞团分化形成不定根、不定芽等器官的过程。

13、体细胞胚胎发生：

指体细胞在未经性细胞融合的情况下，模拟有性胚胎发生的各个阶段而发育

出新个体的形态发生过程。

14、极性：

指植物的组织、器官甚至单个细胞在不同的轴向上存在的某种形态结构以及生理生化梯

度的差异•极性是植物细胞分化的前提

15、细胞周期：

指连续分裂细胞从一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂结束所经历的整个过程。

二、判断题

1、分化程度不同的植物细胞，其脱分化能力不同。

2、不是每一个植物细胞都能表达出全能性。

3、植物细胞全能性的表达程度是可以调控的。

4、所有的植物细胞都具有全能性。

（X）

5、胚状体和合子胚一样具有两极性。

6、生长素/细胞分裂素的比率平衡时有利于愈伤组织增殖。

7、离体培养条件下，植物细胞全能性的表达是通过细胞脱分化和再分化实现的。

&

细胞周期运行的动力主要来自cyclin。

（X）------主要来自CDK周期蛋白依赖酶

9、生长中心是愈伤组织中形成器官的部位，因此生长中心的细胞体积大。

（X）

10、体细胞胚胎发生是通过先芽后根的方式形成再生植株的。

11、生活细胞要表达全能性必须回复到分生状态。

（V）----或胚性细胞状态

12、细胞脱分化调控的实质是G0期细胞回复到分裂周期的调控过程。

13、在同一个培养体系中可以通过不同器官发生方式再生植株。

14、连续的光照有利于培养细胞微管组织的形成，而一定的昼夜光周期则有利于极性建立和形态发生。

（V）

15、植物体细胞胚胎发生是从合子开始的。

16、肌醇具有促进生长的作用，所以培养基中必须添加肌醇。

17、对愈伤组织诱导，被子植物比裸子植物敏感，单子叶植物比双子叶植物敏感。

18、幼叶比成熟叶易诱导形成愈伤组织。

19、致密型胚性愈伤组织适合于快速建立细胞悬浮系。

20、一般认为体细胞胚是多细胞起源的。

21、培养物缺钾时，生长缓慢，叶片变黄。

22、4-CPA具有促进细胞分裂的作用，而三、问答题

1、实现植物细胞全能性的条件是什么？

TDZ具有促进芽增殖的作用。

1）内在条件：

有生命力的核；

完整的膜系统，如：

A、茎尖、根尖和形成层细胞；

B、表皮细胞

和各种薄壁细胞；

C、特化细胞：

导管、筛管、气孔保卫细胞

2）组织或细胞和母体分离

3）外在条件：

温、光、水、气、营养

2、简述Skoog和Miller（1957）提出的有关植物激素控制器官形成的理论及意义。

Skoog和Miller等所提出的生长素和激动素比例决定根和芽分化的观点：

生长素/细胞分裂素的比例高，诱导形成根，而当生长素/细胞分裂素的比例低，诱导形成芽。

这种器官发生激素调控模式的建立为植物组织培养中植物器官的再分化奠定了理论基础。

3、植物组织培养培养基中的大量元素、微量元素都主要包括哪些，它们主要以哪些化合物的形式提供？

大量元素：

C、HO氮（N）、磷（P）、硫（3钾（K）、钙（Ca）、镁（Mg九种大量元素；

微量元素：

铁（Fe）、硼（B）、锰（Mn、铜（Cu）、锌（Zn）、钼（MO、氯（CI）。

C:

从培养基中加入的各种糖类获得，H和0主要从水中获得，氮（N）从有机氮，无机氮（硝态氮，铵态氮）中获得；

磷通常以正磷酸（H2P0-）形式被植物吸收，因此培养基配制时常采用KH2PO4;

钾（K）由KCI、KN03

或者KH2PO4供给；

钙（Ca）由CaCI2-2H2O和Ca（N032•4H2O提供；

镁（M0由硫酸镁（MgS047H20提供；

硫（S）由硫酸镁（MgS047H20提供

4、蔗糖在培养基中有何作用？

作为碳源为植物提供能源，为有机化合物的合成提供碳架，细胞内调节渗透压，对形态的发生的特殊作用等。

5、生长素类物质大致可分为哪几类，目前植物组织培养中主要使用了哪些生长素，生长素在离体培养中有何作用？

1.吲哚类，2.奈酸类，3.苯氧羧酸类，

生长素中常用的吲哚乙酸、萘乙酸、2，4-二氯苯氧乙酸、吲哚丁酸；

2-（3-氯-苯氧丙酸（3-CPA；

4-碘苯氧乙酸（ICPA。

植物组织培养中生长素一方面用于诱导愈伤组织的形成和生根，另一方面是与一定量的细胞分裂素配合共同诱导不定芽的分化、侧芽的萌发与生长以及某些植物胚状体的诱导。

6、在植物组织培养中，细胞分裂素有何作用？

在植物组织培养中细胞分裂素的主要功能是促进细胞的分裂和分化，打破顶端优势，诱导芽分化

与增殖，促进组织和器官的不定芽发育。

7、影响器官发生的因素有哪些？

（1外植体：

母体植株的遗传基础与生理状态，（2激素（激素调控理论），（3培养基种类和培养方法（物理因素，化学因素，（4环境条件（温度，光照

8、影响体细胞胚发生的因素有哪些？

（1、外源激素：

生长素特别是2，4-D；

（2培养基：

低无机盐浓度和较高的硝态氮浓度；

（3

基因型；

（4组织起源，距活体胚胎发育较近的组织和成熟及未成熟的胚胎在离体条件下更有利于细胞胚的诱导。

9、简述植物细胞脱分化的过程

启动阶段：

蛋白体的出现和细胞质增生；

演变阶段：

细胞核移向中央、质体转化成原质体；

脱分化终结期：

回复到分生细胞状态，细胞开始分裂

10、简述器官发生的过程

1.愈伤组织诱导，2.“生长中心”形成，3.器官原基和器官形成

11、培养基内加入活性炭的目的是什么？

应注意什么问题？

活性碳可以吸附非极性物质和色素等大分子物质，包括琼脂中所含的杂质、培养物分泌的酚和醌

类物质、蔗糖在高在压消毒时产生的5-羟甲糖醛、激素等。

12、何谓胚状体?

与合子胚有何异同?

在离体植物细胞、组织或器官培养过程中,由一个或一些体细胞,经过胚胎发生和发育过程,形成的与合子胚结构相类似的中间繁殖体。

与合子胚相比体细胞胚子叶不规范，胚小、含水量高、对脱水敏感、没有休眠

13、胚状体的发育大约要经过哪几个时期？

体细胞胚的大多首先起源于一个胚性细胞，胚性细胞经过一次分裂形成二细胞原胚，最后经过球性胚、鱼雷形胚、心形胚和子叶形胚形成胚状体。

14、离体培养条件下，胚状体产生有几种方式？

（1）直接途径：

即不经过愈伤组织阶段，从外植体直接产生体细胞胚；

（2）间接方式：

外植体

首先诱导产生愈伤组织，再在愈伤组织上产生体细胞胚。

15、离体培养条件下，茎、芽和根的再生方式大致有几种？

在组织培养中，通过茎芽和根而再生植株的方式大致有3种：

1•先芽后根：

多数植物；

2.先根后芽：

颠茄；

3.在不同部位分别形成芽和根，最后通过微管组织联系形成再生植株。

16、长期培养物形态发生潜力丧失的原因是什么？

1.由于细胞或组织内激素关系的改变成的。

当改变外部的处理条件时这种内在潜力能得到恢复。

2.经过长期培养后，由于培养细胞中发生染色体结构、数目变异、基因突变、染色体重排、DNA

的甲基化等自发体细胞变异，这种由遗传原因造成的形态发生潜力丧失是不可逆的。

第三章基本设备和基本技术

一、基本概念

1、灭菌是指用物理或化学的方法，杀死或者去除物品上所有生活的微生物的方法。

2、消毒是指用消毒剂对活的植物材料进行处理，以杀死其上所有生活的微生物的方法。

3、继代周期从接种培养开始到下一次接种继代所经历的时间（周或天）

4、生长曲线在一个继代周期内中间繁殖体生长变化的曲线

5、接种经表面消毒的试验材料按不同的要求经过剪切和整理后，移至培养基上培养的过程。

6、启始脱分化时间外植体接种到第一个外植体开始形成中间繁殖体所经历的时间

二、判断题

1、接种器械一般采用照射灭菌。

（x）

2、IAA通常采用湿热灭菌。

（x）

3、紫外照射灭菌的时间为5h。

（x）

4、油污严重的器皿应采用酸洗法。

（x）

5、过滤灭菌微孔滤膜的直径以0.22」m为宜。

6、用于灭菌的抗生素浓度通常为40-50mg/L。

7、采用氯化汞对外植体进行消毒，时间越长越好。

（x）&

大量元素一般用感量为0.001g天平称量。

（x

9、培养室通常采用紫外线灭菌。

三、问答题

1、怎样洗涤污染的培养瓶？

p25

3、简述高压灭菌锅的工作原理和使用方法.原理是通过较强的蒸汽压力及高温使蛋白质变性，从而杀灭微生物。

4、简述MS培养基中铁盐母液的配制方法。

配法是将5.57克的硫酸亚铁和7.45克的乙二胺四乙酸二钠分别溶于蒸馏水中，加热溶解，然后两者混合，冷却后定容至1升,再加热制成稳定溶液，用时每配1升培养基取5毫升。

5、生长素和细胞分裂素母液如何制备？

生长素类（NAA、IBA等）先用1—2毫升95%酒精将其溶

解,然后缓缓加入蒸馏水定容。

细胞分裂素类（6—BAKT等）先用少量（0.5—1当量浓度盐酸）,然后

缓缓加入蒸馏水定容,倒入瓶内,存于冰箱。

如发现贮存后又产生沉淀,可加温使之溶解后再用。

6、简述固体培养基的制备过程。

（1）量取母液

（2）称取琼脂、蔗糖和其他相关物质（3）溶化

琼脂，加母液、蔗糖和其他相关物质（4）加水约至所需体积（5）调酸碱度（6）定容（7）分装

7、已知所有激素母液浓度为0.5mg/ml，问：

欲配制MS+6-BA2mg/L+KT1mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖2.5%+琼脂0.5%的培养基400ml，应取6-BA、KT和NAA母液各多少ml，称取蔗糖和琼脂各多少g?

若配制MS+2,4-D1mg/L+蔗糖3%+琼脂0.5%的培养基250ml，则应吸取2,4-D多少ml，称取蔗糖和琼脂各多少g？

8、目前，常用的培养基种类有哪些?

各有什么特点?

p47

9、配制培养基时，为什么要先配母液？

如何配制母液？

p50

10、怎样进行外植体的消毒？

消毒：

消毒液浸泡；

冲洗：

无均水冲洗;

材料内部带菌处理

11、如何减少接种过程中造成的污染？

•环境无菌控制•呼吸控•交叉污染控制•接种动作快

12、简述超净工作台的工作原理和使用方法原理是以过滤装置净化空气，在操作者和操作台之间形成无菌风幕，保证台面及其上空呈无菌空间,同时紫外光灯可以杀灭台面上的微生物防止交叉污染。

13、怎样管理培养室？

（1）消毒杀菌

（2）温度和湿度控制（3）光照控制（4）污染材料的处

理

14、怎样对初代培养进行观察的记录？

15、现要研究活性炭对芽分化的影响，怎样进行实验设计？

16、简述采用紫外线灭菌的原理和方法。

P25

17、简述过滤灭菌的原理和方法。

P27

第四章培养方法

一、名词解释

1.分批培养

2.连续培养是在培养过程中不断加入培养基，使培养液中的营养物质能够连续得到补充的培养方法

3.半连续培养是介于成批培养和连续培养之间的一种培养方法。

是在完成成批培养一个周期后，

只从反应器中取出大部分的细胞悬浮液，保留小部分细胞悬浮液作为下一次培养的种子细胞，然后加入新鲜培养基进行培养的方法。

4、固体培养在培养基中加入一定量的凝固剂（如琼脂、明胶等）形成固体培养基，将植物的植物器官、组织、细胞或原生质体接种于培养基上（中）的组织培养方法。

5、静止液体培养是指在培养基中不加入凝固剂，而直接将培养物接种到液体中或其他支持物上进行培养的方法。

6、悬浮培养是指将离体的细胞或小细胞团悬浮在液体培养基中进行培养的方法。

7、光自养培养是指培养容器中的植物在人工光照条件下，吸收CO2进行光合作用，通过完全自养的方法进行生长和繁殖的方法。

1、培养方法是影响植物组织培养效率的重要因素。

2、固体培养是组织培养中最常用的方法。

3、静止液体培养易使培养物玻璃化。

4、悬浮培养只能用于细胞培养。

（x）

5、光自养培养因不需糖，因而减少了污染。

1、固体培养和悬浮培养的优缺点。

•适合于各种外植体和组织培养

的各个阶段•有利于气体交换•防止或减少玻璃化•不利于代谢物的扩散

•可用于组织培养的诱导、繁殖和分化阶段•增加培养物与液体接触面，促进营养吸收•利于代谢物的扩散•有利于气体交换•需要一定的设备

2、研究培养方法有何重要意义？

培养方法是影响植物组织培养效率的重要因素培养方法研究推动植物细胞工程研究的进步

3、静止液体培养的特点是什么？

•可用于组织培养的各个阶段•减少成本（浅层液体培养）•利于代谢物的扩散，减小自体抑制效应•扩大营养接触面•不利于气体交换•易诱导玻璃化

4、悬浮培养有什么作用？

能够提供大量均一的悬浮细胞

5、试比较成批培养和联系培养的特点。

6、光自养培养的特点是什么？

是植物组织培养的一种创新，也是环境控制技术和生物技术的结合。

它采用环境控制的手段，用二氧化碳代替糖来作为植物体的碳源，通过人工控制，提供适宜植株生长的光、温、水、气、营养等条件，以促进植株的光合作用。

其适用范围涵盖所有植物的微繁殖。

第五章薄层培养和单细胞培养

1、薄层细胞培养：

从外植体的表皮撕下数层细胞于合适的培养基上进行的离体培养；

现也将外植体横切成1mm厚的薄片

2、单细胞培养：

指从植物器官，愈伤组织或细胞悬浮培养液中游离出单个细胞，于无菌条件下，进行体外培养，使其繁殖，生长，发育的一门技术。

3、平板培养法：

将悬浮培养的细胞接种到一薄层固体培养基中进行培养的技术。

4、最低有效密度：

在植物悬浮培养液中，使悬浮培养细胞能够增殖的最少接种量。

5、看护培养法：

指用一块愈伤组织或植物离体组织看护单细胞使其生长并增殖的一种单细胞培养方法。

6、植板率：

长出的细胞团的单细胞在接种细胞中所占的百分比数。

1、细胞培养周期是指一定起始密度的单细胞，从开始培养到细胞数目和总重量停止增长的过程。

2、薄层细胞培养是从外植体的表皮撕下数层细胞于合适的培养基上进行的离体培养。

3、能被酚臧红花染成红色的细胞为活细胞。

（x）——死细胞

4、细胞密度是影响细胞培养的重要因素。

5、Gelrite是悬浮剂，而Ficoll是凝固剂。

（x）

1、为什么要进行单细胞培养？

1.建立单细胞无性系（cellline）2.排除体细胞干扰3.观察单细胞如何进行分裂、分化、生长及发育，为大规模培养作准备

2、薄层培养有什么特点？

1.薄层培养细胞组织结构简单2.对调控因子敏感3.培养容易成功

3、怎样进行薄层培养？

外植体t外植体消毒t切取或分离材料t接入培养基中培养t结果观察

4、制备单细胞的方法有哪些？

机械分离法酶解法愈伤组织诱导法

1.从培养愈伤组织中游离单细胞，通过反复继代使愈伤增殖并提高其松散性；

2.机械研磨法；

3.果胶酶分离法

5、简述从愈伤组织中游离单细胞的步骤

600〜800mg生长旺盛的愈伤组织宀250mL含30〜40mL培养基的三角瓶中宀90〜130r/min连续振荡培养2〜3周t用100〜130目网过滤除去大的细胞团t滤液离心收集游离细胞，弃上清液t加入适当体积的培养基使细胞悬浮

6、怎样进行平板培养？

（1.）单细胞悬浮液的制备

（2）调节细胞密度（3）培养基和凝固剂选择，浇平板

（4）接种培养做好标记

7、简述影响单细胞培养的因素。

1、条件培养基的作用；

2.细胞密度；

3.生长激素；

4.挥发性物质的影响；

5.适当的PH值，提高培养基中铁的含量等

第六章植物原生质体培养

1、植物原生质体：

原生质体（protoplast）是指除去细胞壁的裸细胞

2、植物原生质体培养：

原生质体培养是指将原生质体放在人工配制的培养基上和人工控制的条件下培养成再生植株的过程。

3、亚原生质体：

不完整的原生质体经物理化学处理得到的小原生质体。

4、微小原生质体亚原中具薄层细胞质和完整细胞核的部分

5、微核原生质体亚原中具薄层细胞质和部分细胞核的部分

6、胞质体：

即无细胞核，只有细胞质的原生质体

1、原生质体起始材料的特性和生理状态是决定原生质体质量的重要因素之一。

（V）

2、用沉降法纯化原生质体常引起原生质体破碎，这是因为高渗溶液的作用。

3、对分离原生质体的材料进行低温预处理的目的是为了提高原生质体的产量。

4、植物原生质体是观察大分子吸收和转移的良好材料。

（V）

5、机械法适合于从分生组织细胞中分离原生质体。

（X）

6、分离原生质体的酶液中加入氯化钙是为了稳定原生质膜。

7、在原生质体分离和培养中，蔗糖是一种广泛使用的渗透压调节剂。

8、酶解处理一般在光照条件下进行。

（X）

9、分离原生质体的原始细胞状态影响其脱分化的进行。

10、一般认为原生质体出芽与培养基成分有密切关系。

1．何谓原生质体，原生质体作为遗传饰变和生理生化研究的材料有何特点？

原生质体（protoplast）是指除去细胞壁的裸细胞

是体细胞杂交育种的材料是转基因的良好受体

是开展基础理论研究的良好材料是分离细胞器的良好材料

2．简述酶法分离植物原生质体的基本原理。

植物细胞壁由纤维素，半纤维素，果胶质等组成，通过用酶把原生质体外的细胞壁分解，便能得到

完整的原生质体。

3．简述两步法分离植物原生质体的程序。

先用果胶酶离析植物组织，使植物组织从组织细胞中分离出来，然后手机细胞经洗涤后用纤维素酶解离细胞壁，最后获得原生质体。

4．如何纯化原生质体并鉴定其活力?

P2725．与其它组织、细胞培养相比，原生质体培养有何特点?

是体细胞杂交育种的材料是转基因的良好受体是开展基础理论研究的良好材料是分离细胞器的良好材料

6．简述X平板法培养植物原生质体的原理和方法。

为了减少一部恩细胞和组织所产生的有害物质对其他存活细胞的影响，将一定量的活性炭加到培养基，以改善细胞或组织的生长与细胞群落的形成。

将固体平板分成四块，在2和4中加入储备培养基（含1%活性炭），1和3不加活性炭培养原生质体。

7．简述几种原生质体培养方法的特点。

固体：

培养基用琼脂固化，灭菌后在45度植入原生质体。

生长速度慢，容易观察培养效果和生长情况。

液体利用液体培养基培养，通气性好，排泄物容易扩散，易于补加培养基，易于转移，一旦有污染就导致实验失败。

混合两相：

兼顾以上。

8．简述影响植物原生质体培养的因素。

植物种类，原生质体活力，原生质体起始密度，渗透调节，原生质体粘连，培养条件和方法。

9．简述渗透剂在植物原生质游离中的作用。

使酶能较快地发挥作用而原生质体有维持在一定渗透压下，使之不涨破不收缩。

10.生质体培养的应用。

体细胞杂交，遗传转化以及细胞器转移，无性系变异的良好体系，分离植物细胞器的理想材料，基础研究的实验系统。

第七章植物胚胎培养

1、离体胚培养：

胚培养就是采用人工的方法将胚从种子中分离出来，在人工培养的条件下，使

其他发育成正常植株。

2、成熟胚培养

3、幼胚培养

4、早熟萌发：

幼胚接种后，离体胚不继续进行胚性生长，而是在培养基上迅速发成幼苗

5、植物胚乳组织培养

6、胚性发育：

幼胚接种到培养基上以后，仍然按照在活体内的发育方式发育，最后形成成熟胚

（有时甚至可能类似种子），然后再按种子萌发途径出苗形成完整植株

1、胚培养可用于克服杂种不活性。

2、早熟萌发的胚一般能形成许多植株。

3、幼胚培养的初期需在黑暗条件下进行。

4、胚乳培养的再生植株都是三倍体。

（X）

5、游离胚乳核时期和成熟胚乳时期是胚乳培养的最佳时期。

1．何谓胚培养？

简述胚培养的意义。

胚培养就是采用