生物药物分析第五章作业答案Word文件下载.docx
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C.辣根过氧化物酶
D.H2O2-邻联甲苯胺
C
在酶免疫测定法中最常用的标记物：
辣根过氧化物酶（HRP），碱性磷酸酶（AP）。
所以答案为C。
5、单酶反应测定法无须测量下列哪种物质的含量5/79
A.底物
B.产物
C.辅酶
D.中间产物
单酶反应定量法需测量底物减少量、产物增加量和辅酶变化量。
6、还原性辅酶I和还原性辅酶II的特征性吸收峰为6/79
A.360nm
B.350nm
C.340nm
D.260nm
还原型辅酶I（NADH）和还原型辅酶II（NADPH）在340nm处有特征性吸收峰。
7、下列不可用作酶指示剂的是7/79
A.NAD
B.NADP
C.氧化型色素D
D.氧化型色素H
除NAD或NADP为辅酶的脱氢酶类被广泛用作指示剂以外，还有些酶可用作指示剂。
例如，参与某些色素氧化还原的酶就可用作指示剂。
其基本原理是用氧化酶氧化被测物，生成H2O2，而H2O2在过氧化物酶作用下，与4-氨基安替比林（还原型色素DH2）和酚类衍生物反应生成醌亚胺色素（氧化型色素D）。
8、含量微少物质可以使用下列哪种方法进行定量8/79
A.循环放大法
B.终点法
C.一般反应速度法
D.特殊反应速度法
酶循环放大法仍然利用酶对底物的专一性，使微量的底物“增幅放大”以达到定量分析目的。
9、下列不属于酶循环放大分析法的步骤是9/79
A.换反应
B.置换反应
C.循环反应
D.指示反应
酶循环放大分析法是一种超微量分析法，分三个步骤：
①转换反应,②循环反应,③指示反应。
10、在酶联免疫吸附测定法中，既能用于抗原测定又能用于抗体测定的类型是10/79
A.双抗体夹心法
B.竞争法
C.双抗原夹心法
D.间接法
在酶联免疫吸附测定法中，用于抗原测定的类型有双抗体夹心法、双位点一步法和竞争法；
而用于抗体测定的类型有间接法、双抗原夹心法和竞争法。
既能用于抗原测定又能用于抗体测定的类型是竞争法。
11、在一步法测定中，如果待检抗原浓度过高，大量过剩的抗原分别饱和结合固相McAb和酶标McAb，抑制夹心复合物的形成，会出现什么结果11/79
A.假阴性结果
B.阴性结果
C.假阳性结果
D.阳性结果
在一步法测定中，如果待检抗原浓度过高，大量过剩的抗原分别饱和结合固相McAb和酶标McAb，抑制夹心复合物的形成，从而出现假阴性结果，这种现象称为钩状效应（hookeffect）。
12、利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体的方法，通常称为12/79
B.双位点一步法
C.间接法
D.竞争法
间接法是检测抗体最常用的方法，其原理是利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，只要更换不同的固相抗原，就可以用一种酶标抗体检测各种与抗原相应的抗体。
13、小分子抗原或半抗原缺乏可作为双抗夹心法的2个或2个以上位点，可采用的测定方法是13/79
A.双位点一步法
B.间接法
C.双抗体夹心法
由于小分子抗原或半抗原缺乏可作为双抗夹心法的2个或2个以上位点，可采用竞争法进行测定。
竞争法均可用于抗原和抗体测定。
不能采用其它三种方法测定。
14、哪一项不属于常用酶联方法14/79
A.过碘酸钠法
B.二异氰酸甲苯法
D.戊二醛法
戊二醛法、过碘酸钠法、二异氰酸甲苯法、苯二马来酰亚胺法等常用酶联方法。
双抗原夹心法属于酶免疫测定法。
15、制备抗体酶结合物的方法通常采用15/79
A.戊二醛交联法
B.糖原染色法
C.免疫印迹法
D.酶偶联测定法
制备抗体酶结合物方法通常有戊二醛交联法、过碘酸盐氧化法和标记抗体鉴定法。
16、戊二醛法中结合物可用硫酸铵沉淀法进行提纯，透析后，将在4℃预冷的中性饱和硫酸铵溶液按1：
1（V/V）比例，在搅拌下缓慢加入结合物中，并在4℃静置16/79
A.15min
B.30min
C.1h
D.2h
结合物可用硫酸铵沉淀法进行提纯。
方法：
透析后，将在4℃预冷的中性饱和硫酸铵溶液按1：
1（V/V）比例，在搅拌下缓慢加入结合物中，并在4℃静置30min。
17、过碘酸钠法中需要的缓冲液是17/79
A.乙基汞化硫代水杨酸钠缓冲液
B.磷酸盐缓冲液
C.碳酸盐缓冲液
D.硼酸盐缓冲液
灭活过碘酸钠后需要用0.01mol/LpH9.5的碳酸盐缓冲液在4℃透析三天。
18、二异氰酸甲苯法不适于哪种酶的酶联标记18/79
A.葡萄糖氧化酶
B.酸性磷酸酶
C.半乳糖苷酶
D.碱性磷酸酶
二异氰酸甲苯法可用于葡萄糖氧化酶、碱性或酸性磷酸酶的酶联标记，但不适于半乳糖苷酶。
19、制作ELISA固体载体的最常用物质为19/79
A.聚丙烯
B.聚氯乙烯
C.聚乙烯
D.聚苯乙烯
聚苯乙烯是制作ELISA固体载体的最常用物质，因其对抗原或抗体蛋白质具有较强的吸附性能，而且还能保留抗原或抗体的免疫活性，再加之其价格便宜和易于制成多种样式，因此被普遍采用，所以答案为D。
20、微量反应板的国际标准板形为20/79
A.8×
12
B.12×
C.8×
8
D.8×
16
国际标准板形为8×
12的孔板，共96个孔，可方便进行大样本检测和便于酶标仪等比色计检测。
21、终止HRP酶反应常采用21/79
A.强酸
B.强碱
C.Tris-HCl缓冲液
D.PBS
HRP在酸性条件下会丧失酶活性，因此，常采用强酸终止HRP酶反应。
22、测定酶与抗体或抗原结合物的活性采用22/79
A.PCR
B.高效液相色谱法
C.免疫电泳技术
D.分光光度计测定
一般采用免疫电泳技术测定酶与抗体或抗原结合物的活性。
23、下列不属于用作免疫标记技术的酶的特性的是23/79
A.纯化容易
B.底物反应后产物不易检测
C.比活力高
D.分子量不大
虽然酶的种类很多，但可用作免疫标记技术的酶是有限的。
其要求条件：
①酶的来源和纯化容易，可制备高纯度的酶制剂；
②性质稳定，比活力高；
③与抗原或抗体分子共价键结合后仍保持原活性；
④相应底物来源方便，易于制备和保存，反应速度快，反应后产物易检测；
⑤分子量不宜太大，若分子量太大则难于进入组织细胞内，从而影响组织化学免疫定位或酶免疫电镜技术对超显微结构的定位。
24、下列哪种方法最适用于氨苄西林的酶联免疫测定24/79
A.液相竞争型ELISA法
B.双抗体竞争ELISA法
C.聚苯乙烯微量反应板法
D.放射免疫测定法
双抗体竞争ELISA法适用于氨苄西林的酶联免疫测定。
25、既是胰岛素的酶联免疫测定原理又是蛇毒的酶联免疫测定原理的是25/79
A.双抗体夹心ELISA法
B.液相竞争型ELISA法
双抗体夹心ELISA法既是胰岛素的酶联免疫测定原理又是蛇毒的酶联免疫测定原理。
26、下列试剂中不会对蛇毒造成破坏，仍可保持免疫原性的是26/79
C.还原剂
D.重金属盐类
蛇毒可被强酸、强碱、氧化剂（高锰酸钾等）、还原剂（亚硫酸氢钠）等破坏，遇甲醛、乙醇、酚类和重金属盐类等则失活变性或失去毒性，但仍可保持免疫原性。
所以答案为D
判断题
27、酶联免疫法通过加入酶的特异性底物而发生显色反应，通过颜色深浅检测和分析待测样品抗原或抗体的含量来对待测样品的含量进行分析。
27/79
A.正确B.错误
酶联免疫法就是利用经酶标记的抗原或抗体使二者发生特异性反应，然后加入酶的特异性底物而发生显色反应，根据颜色深浅检测和分析待测样品中抗原或抗体的含量，从而达到对待测样品的含量分析目的。
所以正确。
28、终点法相比反应速度法可以不受酶反应特异性的限制。
28/79
与终点法的比较，反应速度法不受酶反应特异性的限制。
所以错误。
29、一般反应速度法需根据底物、辅酶和酶抑制剂改变反应的pH和温度。
29/79
一般反应速度法：
在一定的pH和温度条件下测定底物、辅酶或酶抑制剂的量。
30、特殊反应速度法可用于分析底物复合物的产量。
30/79
特殊反应速度法主要用于可发生酶偶联反应和可循环再生物质的测定。
31、酶联免疫吸附测定法可用于测定组织活细胞表面的抗原固相酶免疫测定。
31/79
固相酶免疫测定包括酶联免疫吸附测定法和酶免疫组织化学技术，前者用于可溶性抗原或抗体的测定，后者用于测定组织或细胞表面的抗原固相酶免疫测定。
32、循环反应是酶循环放大分析的关键，虽然现已报道的循环反应有20余种，但实用价值较大的有NAD循环、NADP循环和辅酶A循环。
32/79
循环反应是酶循环放大分析的关键，虽然已报道的循环反应有20余种，但实用价值较大的有NAD循环、NADP循环和辅酶A循环。
33、酶循环放大分析法的灵敏度远远超过比色法、荧光法和放射性元素法。
33/79
酶循环放大分析法的灵敏度远远超过比色法、荧光法和放射性元素法。
34、在目前采用的酶循环放大分析法中所用的循环反应的循环率均已超过2000次/h。
34/79
在目前采用的酶循环放大分析法中所用的循环反应的循环率均已超过20000次/h。
35、酶循环放大法仍然利用酶对底物的专一性。
35/79
酶循环放大法仍然利用酶对底物的专一性。
36、酶联免疫吸附测定法（ELISA）只可用于测定抗原。
36/79
酶联免疫吸附测定法（ELISA）的应用范围最广泛，既可用于测定抗原，也可用于测定抗体。
37、利用双抗体夹心法时，在加待检样品（抗原）和经孵育形成固相抗原抗体复合物后无需再洗涤直接进行检测。
37/79
在利用双抗体夹心法进行抗原或抗体检测过程中，加入待检样品（抗原），孵育，使样品中的抗原与固相载体上的抗体充分反应，形成固相抗原抗体复合物，洗涤除去未结合的抗原和其他杂质。
38、在双位点一步法测定中，在检测前，需要将待检样品进行适当稀释或降低抗体试剂的亲和力、浓度、纯度等，避免出现钩状效应。
38/79
利用双位点一步法检测前，需要将待检样品进行适当稀释或提高抗体试剂的亲和力、浓度、纯度等。
39、在利用酶免疫测定法中的竞争法时，同时加入待检样品（抗原）和酶标抗原，孵育，使两者与固相抗体竞争结合。
39/79
在利用竞争法测定时，形成固相抗体后同时加入待检样品（抗原）和酶标抗原，孵育，使两者与固相抗体竞争结合，洗涤除去未结合物。
加底物显色，根据颜色深浅对待检抗原进行定性或定量。
40、经过碘酸钠法酶联后的免疫球蛋白，在使用前为消除特异性染色可用肝粉吸收。
40/79
用过碘酸钠法酶联冻存，使用前可用肝粉吸收，消除特异性染色。
41、二异氰酸甲苯（TDI）性质活泼，可以使酶与蛋白质或其他抗原的羟基发生偶联。
41/79
二异氰酸甲苯（TDI）性质活泼，可以使酶与蛋白质或其他抗原的羟基发生偶联。
另外，TDI能与端基为羟基的树脂（如聚酯，聚醚）发生交联，可提高微孔板的吸附能力。
42、苯二马来酰亚胺（PDM）也是一种较好的交联剂，可使酶与蛋白质或其他抗原的羟基发生反应，从而发生偶联。
42/79
苯二马来酰亚胺（PDM）也是一种较好的交联剂，可使酶与蛋白质或其他抗原的巯基发生反应，从而发生偶联。
不是羟基。
43、在对ELISA板吸附性能进行检测时，一般每孔的吸光度值误差在±
5%范围内，否则视为不合格。
43/79
在使用微量反应板前要进行检测，即在反应板的每个小孔加入同一份的抗原或抗体，通过底物显色后用分光光度计测定每一孔中反应液的吸光度值，一般每孔的吸光度值误差要求在±
10%范围内，视为合格。
44、在抗原最适浓度测定过程中，测定吸光度以能产生吸光度为0.8的稀释度作为抗原的最适浓度。
44/79
在测定抗原吸光度时，以能产生吸光度为1的稀释度作为抗原的最适浓度。
45、包被好的ELISA板在低温下可放置一段时间也不失去免疫活性。
45/79
包被好的ELISA板在低温下可放置一段时间也不失去免疫活性。
46、均相酶免疫测定主要用于小分子抗原或半抗原的定量测定。
46/79
均相酶免疫测定主要用于小分子抗原或半抗原的定量测定。
47、在进行液相或均相酶免疫测定中均需要分离出酶标记物。
47/79
在均相酶免疫测定法中，酶标抗原抗体复合物中的酶会降低或失去活性，因此，测定该反应系统中的酶活性便可测出其免疫水平，而不需要分离出酶标记物。
48、蛇毒的酶联免疫测定方法包括ELISA双抗体夹心法、聚苯乙烯微量反应板法。
48/79
蛇毒的酶联免疫测定方法包括ELISA双抗体夹心法、聚苯乙烯微量反应板法。
49、酶学技术仅适用于大分子生物药物的分析。
49/79
酶学技术在小分子生物药物和大分子生物药物的分析中均可加以应用。
50、ELISA双抗体夹心法不适用于白细胞介素-2（IL-2）的酶联免疫测定。
50/79
白细胞介素-2（IL-2）的酶联免疫测定方法包括四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法、放射免疫测定（RIA）法、ELISA双抗体夹心法。
51、白细胞介素-2在临床上广泛应用于肿瘤治疗。
51/79
白细胞介素-2在临床上广泛应用于肿瘤治疗。
52、均相法：
经酶标记的抗原或抗体二者发生特异性反应后，酶标志物存在（酶标记的抗原－抗体复合物）和。
52/79
结合态,游离态
均相法：
经酶标记的抗原或抗体二者发生特异性反应后，酶标志物存在结合态（酶标记的抗原－抗体复合物）和游离态。
不需要将结合态与游离态的酶标记物分离便可进行测定。
填空题
53、酶免疫组织化学技术可用于测定。
53/79
组织或细胞表面的抗原
54、在用作偶联指示剂的酶中，应用最普遍的是以和为辅酶的脱氢酶类。
54/79
NAD,NADP
在用作偶联指示剂的酶中，应用最普遍的是以NAD或NADP为辅酶的脱氢酶类。
55、酶扩大免疫测定技术中半抗原与酶结合形成酶标半抗原，其半抗原和酶的活性，当酶标半抗原与抗体结合后，抗体与酶密切接触，使酶的活性中心受到影响，酶的活性被。
55/79
保留,抑制
酶扩大免疫测定技术是由美国SYVA公司最先研制成功的，主要用于小分子抗原或半抗原的测定，在药物测定中应用普遍。
其设计原理：
半抗原与酶结合形成酶标半抗原，保留其半抗原和酶的活性，当酶标半抗原与抗体结合后，抗体与酶密切接触，使酶的活性中心受到影响，酶的活性被抑制。
56、酶扩大免疫测定技术中待检半抗原量与酶标半抗原-抗体复合物量成比，与酶活性成比。
56/79
反,正
待检半抗原量与酶标半抗原-抗体复合物量成反比，与酶活性成正比，即待检半抗原量越多，酶标半抗原抗体复合物形成量越少，使酶的活性保持在较高水平。
反之，酶活性较低。
57、ELISA载体有三种形式：
、和。
57/79
小试管,小珠,微量反应板
ELISA载体的三种形式：
小试管、小珠和微量反应板。
58、包被（coating）是指将抗原或抗体连接到上的过程。
58/79
固相载体
包被（coating）是指将抗原或抗体连接到固相载体上的过程。
59、当β-半乳糖苷酶（Gal）用于酶免疫标记技术时底物常用，当脲酶用于酶免疫标记技术时底物是。
59/79
4-甲基伞基-β-D-半乳糖苷,尿素
Gal的底物常用4-甲基伞基-β-D-半乳糖苷，其产物是4-甲基伞酮，具有荧光性，可用荧光计测量。
脲酶的底物是尿素，经水解后生成的NH3，改变溶液的pH值，用pH指示剂溴甲酚紫进行显色测定。
60、相较于通常采用的滴定分析法、紫外分光光度法等方法对氨苄西林进行含量测定，酶免疫测定法的优势在于其较强。
60/79
特异性
相较于通常采用的滴定分析法、紫外分光光度法等方法对氨苄西林进行含量测定，酶免疫测定法的优势在于其特异性较强。
61、如果所用酶的专一性不强，同时样品中还夹杂有可作为它们底物的其他物质，这时单用一种酶很难进行定量，需要再偶联一个酶，通过才能实现区别定量。
61/79
偶联酶的专一性
如果所用酶的专一性不强，同时样品中还夹杂有可作为它们底物的其他物质，这时单用一种酶很难进行定量，需要再偶联一个酶，通过介偶联酶的专一性才能实现区别定量。
62、酶免疫测定法中竞争法测定是将待检抗原和酶标抗原与相应固相抗体竞争结合，样品中抗原，与固相抗体结合的酶标抗原就，与底物反应生成的颜色。
62/79
越多,越少,越浅
竞争法的测定原理:
将待检抗原和酶标抗原与相应固相抗体竞争结合，样品中抗原越多，与固相抗体结合的酶标抗原就越少，与底物反应生成的颜色越浅。
因此，根据颜色深浅可进行定量测定。
63、戊二醛是一种双功能团试剂，可使与或其他类型发生偶联作用。
63/79
酶,蛋白质,抗原的氨基
戊二醛是一种双功能团试剂，可使酶与蛋白质或其他类型抗原的氨基发生偶联作用。
64、过碘酸钠可将HRP分子表面糖基中的邻二羟基氧化成活泼的，可与蛋白质上的氨基形成而结合。
64/79
醛基,Schiff碱
过碘酸钠可将HRP分子表面糖基中的邻二羟基氧化成活泼的醛基，可与蛋白质上的氨基形成Schiff碱而结合。
65、二异氰酸甲苯法酶联，孵育，透析过夜；
离心去除可能形成的微量沉淀物后，通过SephadexG200柱，分份收集，测定和处吸光度，冻存。
65/79
280nm,403nm
离心去除可能形成的微量沉淀物后，通过SephadexG200柱（预先用碳酸盐缓冲液在4℃平衡），分份收集，测定280nm和403nm处吸光度，冻存。
66、MBAE和MCAE的马来酰亚氨基远比PDM（苯二马来酰亚胺）稳定，与的反应更快。
66/79
巯基
MBAE和MCAE的马来酰亚氨基远比PDM稳定，与巯基的反应更快。
67、酶学技术在生物药物定量分析中的应用优势越来越明显，尤其酶对底物的和高效催化等生物学特性是其他分析技术所无法比拟的。
专一性
酶学技术在生物药物定量分析中的应用优势越来越明显，尤其酶对底物的专一性和高效催化、抗原抗体免疫反应的特异性等生物学特性，是其他分析技术所无法比拟的。
68、蛇毒的酶联免疫测定原理为固相的抗蛇毒抗体和蛇毒、酶标记的抗蛇毒抗体反应形成结合物，经后进行定量分析。
底物显色
蛇毒的酶联免疫测定原理为固相的抗蛇毒抗体和蛇毒、酶标记的抗蛇毒抗体反应形成结合物，经底物显色后进行定量分析。
69、白细胞介素-2（IL-2）的酶联免疫测定中，需通过绘制求出样品中的IL-2浓度。
标准曲线
白细胞介素-2（IL-2）的酶联免疫测定中，需通过绘制标准曲线求出样品中的IL-2浓度。
70、白细胞介素-2是由产生的淋巴因子，可增强机体免疫力。
70/79
T细胞
白细胞介素-2是由T细胞产生的淋巴因子，可增强机体免疫力。
71、酶免疫测定法的原理是和对特异性抗体发生竞争结合反应。
71/79
酶标记抗原,非酶标记抗原
酶免疫测定法酶标记抗原和非酶标抗原对特异性抗体发生竞争结合反应。
72、酶联免疫吸附测定法可用于测定。
72/79
可溶性抗原或抗体
73、酶循环放大分析法定量限度可达。
73/79
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