符合GLP原则的小鼠和大鼠实验Word文件下载.docx

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每个研究人员都必须保存有效的记录。

动物内部运送一般需要超过×

个工作日的过程；

③啮齿类动物从任何一般的动物实验室传送到屏障系统实验室前，必须考虑经过6周检疫期：

④实验室负责人在运送前，必须保证每个笼具上都有紫色标签，并且确保笼具的卡片都正确地放好位置。

在运送前，机构工作人员先换笼，再将高压灭菌的袋子两层包裹以确保病原菌不能在运送过程中感染动物。

⑤小鼠和大鼠的笼子不能被放置在高压灭菌袋里超过lh，以免动物窒息而死；

笼子不能被暴露在低于15℃以下或40℃以上的温度环境下。

⑥笼子将被运送至设施适当的实验室。

被高压袋装的笼子和运输车在实验室进口处用消毒液彻底喷洒。

笼子在进口处从高压袋中取出，确认无误后，放上洁净的运输车后，经过清洁走廊迅速运入指定的实验室。

⑦动物从一个主要研究人运送到另一个主要研究人时，也许需要立即检查当前病原菌。

（4）健康状态：

。

①小鼠：

所有来源的小鼠在进入屏障系统前，都必须被证明没有仙台病毒、MHV病毒、PVM病毒、支原体、REO3、MVM病毒、GDV11、LCM病毒、EDIM病毒、鼠痘病毒、MPV病毒、病原细菌和寄生虫等。

②大鼠：

所有来源的大鼠在进入屏障系统前，都必须被证明没有仙台病毒，KRV病毒、PVM病毒、支原体、RPV病毒、病原细菌和寄生虫等。

③特殊病原菌会被设施兽医在屏障系统内检测出来。

设施应该通知研究者所有新的病原菌发现或由于病原菌或供货商造成的可能损害。

三、接收动物的程序

（一）接收动物标准操作规程一实例之一

叙述从动物供应商接收动物的步骤，使其符合动物福利要求，同时对进入实验室的动物计算总数并编写目录，以便对动物的运送情况做出监督。

（1）动物在进入相关实验室之前，用次氯酸钠擦拭或喷洗运送动物的外包装。

（2）接收动物时，检查动物的体格状况、性别、周龄、来源等，并记录动物数目。

必要时记录动物的出生日期。

（3）保存运送动物箱子外的标签或发票，与实验记录存放在一起。

（4）保存专人证明的运送动物箱子总数的单据，与运送发票一起交给接收处。

（5）填写动物接收单／动物检疫单，包括有“开始检疫时间／适应期”等。

（6）将所有单据交给接收处。

（7）如果动物状况不佳或运送动物的箱子损坏，通知负责人将信息返回给动物供应商。

（二）接收动物标准操作规程一实例之二

叙述动物接收程序。

（1）所有的运送包括商业和非商业来源的动物，都必须定好运送时刻表，并在设施实验室备案。

为保证合理的安排，动物订购由代理货商和机构办公室的×

×

协调。

（2）所有运往屏障系统实验室的动物，都必须放在传递仓。

动物健康报告要全程伴随动物运输，并且最后归档。

（3）对于没有损坏的常规运输，所有箱子必须在屏障系统进口处，用消毒液整体喷洒，运进来的动物被放置在指定房间内。

（4）在动物饲养房间放置好干净的笼具并提供好食物和水后，箱子才在空气层流交换罩下打开，并把动物转移至干净笼具里。

（5）如果发现动物有明显疾病或身体异常，应该立即报告给兽医和研究人员。

（6）所有没有放在传递仓或损坏箱子中的动物，都不能进入屏障系统。

①箱子损坏和不适当的容器（未消毒）都被认为是污染了的容器，而不能进入屏障系统实验室，实验室兽医和研究人员共同决定怎样处置这些动物。

②从供货商那里购买的动物，在运输过程中损坏箱子的小鼠，必须立即以安乐死方式处死，除非有其他指示，因为大部分供货商会调换由于运输造成损失的动物。

机构会立即和供货商以及研究人员联系并通知这个问题。

③动物检疫或单独存放。

（三）接收动物标准操作规程——实例之三

叙述啮齿类动物接收程序。

（1）动物必须在许可的接收码头从卖方或交货人员处接收。

（2）必须检查盒子是否破坏（即盒子被打开、隔离过滤设备撕破、湿斑）。

（3）破坏的盒箱可以接收。

但是，损坏箱子中的动物不能直接放在屏障房间中。

这些动物用于实验操作或立即处死或放在隔离房中。

（4）装箱单和动物健康表格从箱子上取下，转寄给动物采购人员。

（5）箱子用Clidox彻底喷洒。

（6）装箱单上的信息（研究者、订单号、动物种属、性别、数量和年龄）必须和每周的运输计划表进行比较。

（7）出生日期及妊娠日期等信息必须添加在印刷前的笼具卡片上。

（8）没有订单或任何与订单不符的情况必须立即向管理者报告。

（9）管理者必须立即向动物采购人员报告任何订单问题。

（10）箱子要移到合适的饲养场所。

（11）箱子在移入屏障房舍之前，必须再次用Clidox彻底喷洒。

（四）动物接收后的标识程序

叙述接收动物的标识程序。

（1）接收动物后，立即给予动物临时编号。

（2）在实验开始前，实验的动物必须在耳朵上打上一个唯一的耳标识数字。

（3）动物耳朵上标识的数字，必须能确保在整个实验过程中都能够保留，所以标识位置必须尽量贴近头骨，穿过大部分的耳部软骨。

如在小鼠耳上做耳标识，标识必须两次穿过鼠耳。

如方法使用适当，耳标识一般不易丢失。

（4）进行耳标识编号的动物，应该在其笼具的标签上标识出耳标识号码。

四、啮齿动物检疫程序

叙述防止啮齿动物病菌传入已建立的啮齿动物群，建立啮齿类动物检疫的原则。

2．职责范围

（1）兽医在所有程序工作人员的协助下，负责动物的全面健康监测。

（2）副主任和项目协调员负责确保设施负责人执行所有操作。

（3）设施负责人确保所有的技术人员和动物管理员接受充分的训练，熟悉啮齿动物检疫程序。

3．程序内容

（1）从获得批准的商业供货者取得SPF／VAF群的啮齿动物，项目助理负责确保所需动物的当前健康状况是属于SPF／VAF群。

所有动物在使用前应该有7天时间的适应期。

（2）从未获得批准的来源，包括商业供货者和其他学术机构，无论是否有书面健康保证，都应该进行为期5周的检疫。

（3）只有指定人员可以进入检疫房和设施。

研究人员不得进入检疫区域。

（4）进入检疫房前应该戴一次性外套、手套和鞋套。

在检疫房内进行操作时，如要求在层流柜／工作台外打开微隔离器或通风笼，应该戴口罩和帽子。

工作结束，出房间之后，应该立即脱去保护性衣着，弃于生物安全的容器中。

出门之后，立即以Clidox或胶醛消毒剂喷撒鞋子及用肥皂洗手。

（5）接受检疫动物饲养在通风笼／架系统或可高温消毒的微隔离器中，与未检疫的动物（由指定的技术员最后使用）分房间放置。

（6）所有笼具和水瓶在进出房间之后，都应该高温消毒。

确保所有设备按高温消毒程序和消毒效果确认程序实施。

（7）脏污的微隔离器在移出房间、进行高温消毒之前，应用指示胶带封闭，放在灭菌袋中。

如果笼具不移出房间消毒，不需要使用指示胶带和灭菌袋。

（8）工作台面在使用前后，应该应Clidox或胶醛消毒剂净化，并用酒精擦拭。

（9）进入检疫室的动物，由一名兽医负责确保按检疫程序进行，进行健康评估、分析测试结果，如果一切都成功完成，将动物解除检疫。

兽医由程序助理委派，由指定的动物管理员协助收集样本。

（10）在检疫的第l、3、5周，兽医对检疫动物进行评估。

如果是群居，从每个微隔离器中选取代表动物，检查其毛皮是否有体外寄生虫，并以玻璃纸带测试会阴部发现体内寄生虫。

如果评估了代表动物，在第3和第5周应选取不同的动物进行随后的测试。

通过粪漂浮检测每个微隔离器中动物的体内寄生虫，代表动物通过在第3周末的血清测试评估。

如果结果为阳性，兽医应与主要研究人讨论制订计划，保证没有排除名单上的寄生虫，确保显性基因型的传递。

（11）理想的情况是，在检疫的第3周之后，对每个微隔离器的一个免疫学成熟的代表动物进行血清测试。

。

（12）动物的血清测试包括对下述的抗体检测：

副流感病毒类型I、冠状病毒、肺尖支原体、副粘病毒、细小病毒、脊髓灰质炎病毒、3型呼吸道肠道病毒、腺病毒1型。

此外，还应对小鼠测试腺病毒2型、痘病毒、轮状病毒、乳多空病毒、对大鼠检测汉他病毒、CAR菌和泰泽病原体。

额外的健康评估应咨询兽医，与研究人员商量后进行。

（13）所有的治疗和评估，作为这些程序的结果应记录在啮齿动物检疫纪录中。

（14）程序助理为每个检疫动物群建立一份啮齿动物检疫记录，表格首栏包括指定的兽医名、主要的实验员、IACUC协议号、电话号码、来源／机构、健康状况史，以及根据主任和副主任规定的从其他机构接收、运输动物要求制定的特殊检疫措施。

此记录提供给检疫机构的设施经理，同时提交动物抵达表，并抄送指定的兽医。

（15）在检疫设施内收到动物之后，设施经理应立即填写啮齿动物检疫记录表，标明抵达日、检疫地点、动物数量，以及如何居住。

设施经理然后通知兽医，动物已进入检疫、动物到达时的状况，以便在适当的时间安排健康检查。

（16）在处理和检测完成之后，应填写啮齿动物检疫记录表。

在为期5周的检疫期末尾，所有检测成功完成之后，兽医应分析啮齿动物的检疫结果，决定是否解除检疫。

只有兽医在记录表上签字之后，才能将动物解除检疫。

（17）检疫设施的设施经理通知主要研究人检疫动物已获准解除检疫、确认新的安置地并协调动物的运输。

此情况应记录于啮齿动物检疫记录表。

（18）原始的啮齿动物检疫记录表送交程序协调员，填写动物运输记纪录。

检疫设施保留一份副本，另一份副本随动物前往新安置地，并放入房间日志。

（19）在检疫期结束之前，如有要求获得检疫动物进行安乐死和分离组织，必须经主任和副主任批准，且应基于动物的健康史、最初机构的健康史，以及组织存放、分析地点的健康史。

（20）在检疫期结束之前，如有要求将检疫动物进行繁殖，必须经主任和副主任批准，且应基于动物的健康史、最初机构的健康史，获得动物的可能性，以及获得检疫空间的可能性。

（21）经主任和副主任批准，可实施额外的检疫要求和程序。

五、健康监测程序

（一）健康监护程序

叙述确保实验动物的质量要求的程序。

（1）每日健康检查。

①动物管理人员每天都必须对屏障系统每个笼子进行笼旁观察，按照房间安排，工作人员应该仔细观察是否过于拥挤、打架和疾病。

笼子每天检查瓶子漏水、水量较少和饲料不足，这些问题在发现后及时纠正，如果这些问题是实验人员发现的，应该立即纠正并通知工作人员。

②用粉红色标签注明疾病动物，并通知兽医，同时，动物管理人员应提供一份动物疾病报告，并拷贝一份给实验室主管。

工作人员评价动物疾病情况，将粉红色标签换成蓝色标签，注明发病数量，并符合疾病报告，联系主要研究人获取更多信息。

在取得兽医同意前不得移走粉红色标签，除非动物已经被移离。

③按照检查，笼子上的蓝色标签标记着动物被治疗和／或被观察的情况。

兽医一直关注动物情况直到临床体征消失。

如果由主要研究人观察动物健康并提供治疗，蓝色标签可以在疾病消失后由主要研究人移除。

④绿色标签是实验人员按照实验需要，由兽医进行手术后治疗的而粘贴的标签。

兽医必须立即通知主要研究人。

⑤黄色标签是用于特殊的饲养情况如“加入药物的水”：

标签上应记录开始和处理日期，并通知实验室主管。

⑥所有的彩色标签在情况确认时应除去。

⑦兽医有责任对屏障系统内动物进行笼旁观察和治疗，并且和主要研究人交流，确保动物的健康和福利，请快速友好地面对兽医的交流。

⑧主要研究人只有在记录批准后，才能给动物禁食，笼子里面没有食物需要一个特殊的卡片（暂时放在永久卡片前面），标明起始日期和结束日期以及禁食时间，如果笼子上卡片记录不完整，工作人员将移除卡片并开始喂食，一旦禁食日期结束，主要研究人有责任将食物加上，但是，工作人员每日笼旁观察时要检查。

⑨这些特殊卡片也可用作标明药用食物或水以及其他长期特殊饲养要求的笼子。

这种卡片用于这种目的时必须通知实验室主管。

（2）亚临床感染。

①许多啮齿类动物病原菌都是静息状态，有很少或没有明显临床表现。

经常这种亚临床感染，首先表现在实验记录里的非预期改变。

②一旦动物健康发现疑问（如发病率或死亡率增高、行为改变等），实验人员应立即通知兽医，以便得到及时纠正。

（3）死亡动物。

①动物管理人员在发现死亡动物后，应该立即通知主要研究人，另外，应完成动物死亡报告，将动物包裹放在指定冰箱里，并附上相应的粉红色报告拷贝。

②如果动物饲养工作人员发现动物有非预期原因的濒死或死亡动物（不是由实验引起），主要研究人和兽医应该讨论原因。

如果主要研究人发现笼子里面有死亡动物，应贴上棕色标签并通知动物饲养人员，在这种情况下死亡动物应该包裹后和相应死亡证明一起放进冰箱。

③存放死亡动物的冰箱放在所有屏障系统内，如果动物尸体在48h内没有取走，应该被清理。

研究人员应该让动物饲养人员注意到特殊的病变组织以便做病理分析。

（4）健康监护（哨兵小鼠动物）。

①哨兵小鼠动物放在屏障系统里，每季度由设施诊断试验室检查，以确定动物群体是否健康。

另外一群哨兵小鼠动物每隔6周进行一次特殊检查。

设施分配和维护所有小鼠房间里的SPF哨兵小鼠动物（ICR品系小鼠），这种品系的动物对偶发病原菌污染能产生更高滴度抗体。

②在每个小鼠房间里，哨兵小鼠动物放在低位的架子上的笼具里，盖上过滤盖子。

哨兵小鼠动物放在装有实验动物换笼后的垫料混合物的笼具里，哨兵小鼠动物笼具应该标记上由鲜绿或鲜红的标记笼具卡片，这些笼具除了设施工作人员外谁都不能碰。

③大多数情况下，哨兵小鼠动物应该在放入4个月后检查，更换哨兵小鼠动物应该在检测前，哨兵小鼠动物提前一个月放入房间。

④每个季度对哨兵小鼠动物的检查，都需收集血液样本，取出主要组织并用福尔马林浸泡，除了有下列明显疾病证据者不用进一步检查。

如果有证据表明是Tyzzer’s疾病、缠绕杆菌属、肠源细菌感染等应对肝和肠做组织病理检查，小鸡支原体、Sentai病毒、鼠肝病毒等应该用ELISA进行血清学检查。

有时用漂浮法对粪便样本检查寄生虫。

用培养基检查呼吸道病原菌。

还要用透明胶纸法检查蛲虫以及粪便和毛皮检查。

⑤每隔4个月重复上述工作。

（5）健康监护（哨兵大鼠动物）。

①像哨兵小鼠动物一样，设施应在每个大鼠房间里分配和维护SPF哨兵大鼠动物（SD品系）。

②大鼠的检查同小鼠。

⑨每隔4个月重复上述工作。

（6）报告。

①常规的哨兵动物检查，由设施填写并拷贝一份放在动物房f-ld2~旁边。

②如果一个哨兵动物病原菌检查结果呈阳性，那么需检查更多样本，保留房间里的哨兵动物，进行血清学和组织病理学检查。

③如果实验人员在动物房内发现哨兵动物有阳性症状，应该通知实验室工作人员并进行相关测试，该房间被隔离，并尽量减少出入，直到更多的检测进行。

在完成实验室里其他房间检测后，最后才能进入最受怀疑的房间，一旦进入最受怀疑的房间后，该人员不得在当天进入其他房间。

④如果病原菌感染不止涉及一个房间，所有研究人员都将得到通知，并安排结束实验。

兽医将确定多间房间感染的顺序。

⑤怀疑感染的房间的脏笼具、物品、饲料等，应该先在房间内包裹后，才能按正常笼子程序进行处理。

如果怀疑感染了蛲虫或虱子（螨虫），应该先包裹后，才能按正常笼具程序进行处理。

⑥注意：

如果实验人员要处死被怀疑感染或确定感染后三周内的动物，他们应该采集动物血清，以备分析。

⑦将撰写附加的规程贴在动物动物房门上，如果屏障系统已经或怀疑被破坏。

⑧确定感染后，将隔离动物房内的动物处死或立即去除。

（7）供货商的监督。

①被同意的动物商业供货商，应该被设施诊断实验室监督。

②如果供货商提供的动物发现偶发的病原菌，应该通知实验人员和供货商，并隔离动物，进行进一步检查，如果有必要，应该处死动物。

③所有供货商监督报告，由设施办公室归档。

（8）环境卫生规程的质量保证。

①消毒锅应该每天进行检查，保证正常运转。

每个季度将生物学指示交到诊断实验室，以确保对消毒效果的监测。

②结果应该由设施记录和保存，设施在必要的时候，可以抽查洗笼具水的温度、去污剂残留、消毒锅或其他规程。

（9）HAVC和温度监测。

①每间动物房都应该由电脑监测温度和湿度。

差异应该被管理人员记录和更正。

如果必要，每日的指标应该被电脑记录。

②每周检查动物饲养房间的空气流向，以保证空气流向的维护。

③设施的预防性维护报告，应该由设施办公室归档。

（10）动物饲养设施诊断试验室。

以下方式可以作为屏障系统动物疾病状况诊断：

①内部诊断服务，a．API；

b．寄生虫学；

c．ELISA；

d．真菌检查；

e．组织病理学。

②外部诊断服务：

a．×

诊断实验室；

b．×

实验室。

六、哨兵动物健康监测

（一）SPF屏障系统动物健康监测的SOP

该程序详述了SPF设施的哨兵动物检测要求。

该检测内容将确保屏障系统程序有效运行，且能够将病原体隔绝在外，该程序还确保了动物顺利运送到其他研究机构。

2．范围

该程序适用于实施哨兵动物程序的兽医技术人员。

3．程序

（1）每年进行3次健康检测或每4个月进行一次。

必要时，可以进行额外的检测，但是，费用由主要研究者承担。

（2）订购6～8周龄、无病毒抗体的CD-1SPF单一性别小鼠（或者是其他的免疫活性相当的品系）作为哨兵动物。

（3）如果可能，可以使用现有的免疫活性研究动物，以监测该动物所在房间的健康状况，但是，需要获得主要研究者的许可。

①这些动物不曾用于任何研究，不是非生育期的动物，并且动物年龄不超过1岁；

②最好是6～8周的幼龄动物。

（4）哨兵动物的检疫期最少需要2周。

①在微生物隔离笼具中饲养哨兵动物；

②每天接触其他的动物房间前，应该首先穿着洁净的防护服进入检疫房间；

③动物到达的第一天，对l～2只备用的哨兵小鼠处以安乐死；

④采集动物的血样（心脏穿刺），尸检和进行胶带试验；

⑤使用基本的检测方法，对送检的血样进行血清学检测；

⑥临床兽医得到检查结果后，判断被检疫的动物是否合格。

（5）哨兵动物暴露于SPF设施的污染垫料中。

①收集SPF中各个房间的污染笼具，每个笼具上标记笼具来源的房间号码，将这些笼具应用于检疫房间中的哨兵动物；

②每个微生物隔离笼具中放入一匙的污染垫料；

③哨兵动物的笼具上标记相应的SPF动物房间号码；

④4～6周的时间里，将来自SPF中各个笼具的新鲜污染垫料持续地添加在一个洁净的哨兵动物笼具中；

⑤确定哨兵动物笼具中的污染垫料来自相应的SPF房间（根据编号判断）。

（6）4～6周时处死哨兵动物。

①使用CO2的方法或给予过量戊巴比妥的方法对动物实施安乐死；

②通过心脏穿刺的方法采血；

③采集每只哨兵动物笼具的直肠排泄物，在无菌条件（使用消毒的手套和钳子）下进行幽门螺杆菌的测试。

收集每个房间中的所有样本（比如所有的8只哨兵动物）汇聚成l组样本；

④在动物的肛周区域和两肩之间的毛发区域，进行胶带试验：

⑤检查盲肠内容物是否有可见的蠕虫⑥处死动物后，观察是否有大体的异常情况，保存动物尸体并向兽医报告。

（7）送检血清样本进行血清学检测。

每年对SPF屏障系统进行3次检测（比如每4个月一次），每次检测的血清学结果不同，检测顺序将包括：

①全面检测。

②选择项目的检测。

③基本项目的检测a．全面检测包括以下病原体的检测：

小鼠细小病毒、小鼠肝炎病毒、肺部支原体、小鼠弧小病毒、小鼠肺炎病毒、仙台病毒、脑脊髓炎病毒、幼龄小鼠流行性痢疾、淋巴细胞性脉络丛脑炎病毒、纤毛杆菌、鼠痘病毒、K病毒、小鼠腺病毒、小鼠巨细胞病毒、多瘤病毒、呼吸道肠道病毒和幽门螺杆菌；

b．选择项目的检测包括以下内容：

小鼠肝炎病毒、幼龄小鼠流行性痢疾、小鼠细小病毒、小鼠肺炎病毒和脑脊髓炎病毒：

c．基本项目的检测包括以下内容：

小鼠细小病毒、小鼠肝炎病毒、小鼠肺炎病毒、脑脊髓炎病毒、仙台病毒和肺支原体。

（8）寄生虫与细菌：

①另外，应该每年3次对哨兵动物进行体内和体外寄生虫（毛发螨虫和蛲虫）的检查；

②每年一次，应用PCR方法，检查大便样本是否存在幽门螺杆菌的感染。

（9）健康报告：

①按照试验设施的位置和房间号码报告检测结果；

②向临床兽医提交最终的检测报告，兽医将解释检测结果，并且可能推荐进一步的检测项目；

临床兽医将检测结果通知给主要研究者。

（10）更新哨兵动物的资料。

（11）按照房间号码归档哨兵动物报告表的结果，归档资料存放于档案室的档案柜中，在归档的文件柜上附相应的标签。

（二）动物健康监视标准操作规程一哨兵动物健康监视

建立一种机制，以防护在设施饲养的种属免受细菌和病毒性鼠类病原体以及内外寄生虫的侵害。

本SOP特别针对小鼠、大鼠和仓鼠哨兵动物的健康监视。

本规程适用于所有参与哨兵动物监视项目的兽医及技术员。

3．规程（该规程将每年执行两次，全面检测与基本筛查轮流进行）

（1）用于进行健康监视程序的动物，可以通过两种途径获得，一种是来自本单位的繁殖群体，放置在本动物室内，用于哨兵动物监视及检测。

另一种是可以购买哨兵动物，并放置在房间内，用于该项目实施。

从允许的供应商获取的动物，在设施饲养6周或更短时间时，可以不参与健康监视程序。

（2）购买哨兵动物放置在动物房内。

①购买6～8周龄的任何性别的SPF无病毒抗体的CD大鼠和CD-l小鼠（或等同的远交系杂交、免疫耐受品系），用作哨兵动物。

②哨兵动物应用的性别和品系，根据饲养在特定房间的哨兵动物而定。

③哨兵动物至少隔离检疫两周。

a．将哨兵动物饲养在数字微隔离笼中；

b．每天在接触任何其他动物房之前，穿上干净保护袍，首先进入隔离房；

c．应用的基本筛查，将血液送去进行血清学检测；

d．保持动物在隔离状态，一直到获取检测结果，并且临床兽医认为合格：

e．一旦确认动物无病原体，将其转移到各自的动物饲养室；

f．将哨兵动物放在有微隔离帽容器中运输。

④将动物放置在饲养房间中的顶端及敞开的塑料笼具中，每个笼具中放一只动物，均匀地分布于房内各个角落。

最好用较低层的架子，因为空气传播的病原体会由于重力下沉。

⑤在饲养100只以上动物的室内