工业微生物学实验精彩试题附解析汇报生物工程生物技术制药工程天津科技大学03Word格式文档下载.docx

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2.鉴别培养基

3.无菌操作

4.大肠菌群:

5.细菌菌落总数:

二、填空题（共20分，每空0.5分）

1.根据显微镜物镜与标本之间的介质的性质不同,物镜可分为物镜和油浸系物镜.前者是指物镜与标本之间的介质是。

后者是指物镜与标本之间的介质是一种和玻璃折光率相近的，实验中使用油浸系物镜最常用的放大倍数是。

利用油镜进行细菌的形态观察,实验结束后,要用擦镜纸蘸取擦拭油镜镜头。

2.配制好的培养基要立即进行,经灭菌的培养基要放入培养箱中做,以确定培养基是否可用。

3.培养基按其来源主要分为培养基,培养基和培养基。

4.实验室中常用的干热灭菌方法有两种,如接种工具一般采用灭菌法,玻璃器皿常采用灭菌法,具体做法是将玻璃器皿放入。

5.微生物的接种方法有很多,对于细菌来讲,要在平板上获得单个的菌落,通常使用接种方式为。

接种后的平板一般要倒置于培养箱中进行培养,其倒置培养的原因是。

6.革兰氏染色的一般过程主要包括,固定,,,,，水洗和镜检等步骤。

在操作过程中,最关键的步骤是。

经革兰氏染色后,大肠杆菌被染成色,八叠球菌被染成色。

7.请写出以下菌种的拉丁学名:

大肠杆菌,枯草芽孢杆菌,酿酒酵母。

8.显微测微尺主要由测微尺和测微尺组成.在进行细胞大小测定之前,测微尺要先进行标定。

9.测定酵母细胞死亡率时,所用的染料是,染色2-3分钟后,于显微镜下观察,其中变蓝的细胞为细胞。

10.麦氏计数板的规格为，在麦氏计数板一个滴加稀释10倍的样品,按对角线方位,左上,右上,左下,右下四个大格的细胞数分别为64个,100个,80个,96个.则每毫升菌液中所含的酵母细胞数为。

11.霉菌菌丝观察主要利用作介质。

12.在显微镜下易于观察到霉菌的无性孢子,其中毛霉和根霉的无性孢子是,青霉和曲霉的无性孢子是。

13.在细菌生理生化实验中,三糖铁高层琼脂中含有的糖主要有葡萄糖,蔗糖,乳糖三种糖.其中,是另外两种糖含量的1/10倍.其斜面含有指示剂酚红,它在pH小于6.8时为黄色,大于8.4时为红色,伤寒沙门氏菌在该培养基中生长一定时间后,其斜面的颜色为色,大肠杆菌为色。

14.在进行酵母菌细胞出芽率测定的时候,芽体数10个,酵母细胞数为40个,则该样品中酵母细胞的出芽率为。

三、选择题（共8分每题1分）

1.配制固体培养基时所用凝固剂含量一般为（），半固体培养基常用凝固剂含量一般为（）。

A．1.5%-2%B.5%-7%C.0.6%-0.8%D.15%-20%

2.干热灭菌常用的灭菌温度是（），灭菌时间为4-6小时。

A.120℃B.121℃C.140℃D.115℃

3.下列培养基中，哪种培养基不是培养酵母常用的培养基（）？

A.麦芽汁培养基B.马铃薯葡萄糖琼脂培养基

C.YEPD培养基D.牛肉膏蛋白胨培养基

4.下列最适于霉菌生长的培养温度为（）

A．28℃B.35℃

C.25℃D.37℃

5.实验过程中，霉菌的接种工具一般为（），接种方式为（）。

A.接种针B.接种钩C.划直线D.点接

6.明胶液化实验，明胶的水解是由于细菌所产生的（）的作用。

A.脂肪酶B.纤维素酶C.蛋白酶D.淀粉酶

7.斜面试管的标签应贴在斜面的正上方，距管口（）处。

A.1cm-1.5cmB.1.5cm-2cmC.2cm-2.5cmD.2.5cm-3cm

8.下列霉菌中有足细胞的霉菌为（）。

A.毛霉B.青霉C.根霉D.曲霉

三、问答题（共52分）

1.简要说明湿热灭菌为什么比干热灭菌更加有效?

（6分）

2.以大肠杆菌和产气肠杆菌为例，说明其在VP实验与MR实验中的结果为什么刚好相反（7分）

3.在啤酒生产过程中,常需要检测发酵液中的酵母细胞浓度,简述不同的计数方法并说明其优缺点（10分）

.

4.简述目镜测微尺的标定过程。

（10分）

5.以假丝酵母为例,说明小室培养的操作过程.（7分）

6.现有绿茶一瓶,简要说明该产品中的细菌菌落总数的检验程序及测定过程.（12）

试题解析

1.显微镜分辨力

指显微镜分辨被检物体细微结构的能力,也就是判断两个物体点之间最短距离的本领,以R表示.计算公式为:

R=λ/（2N.A）=λ/[2n·

sin（α/2）]

一类含有某种代产物指示剂的培养基,微生物在这类培养基上生长后,分泌的代产物与指示剂起反应产生某种明显的特征性变化,根据这种变化将该种微生物与其它微生物区分开来.

指用灭过菌的接种工具,在无菌条件下,接种含菌材料于灭过菌的培养基上,这一过程叫无菌操作.

4.大肠菌群

大肠菌群系指一群在37℃,24小时能发酵乳糖,产酸,产气,需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌

5.细菌菌落总数

被检样品经过处理后,在一定条件下培养后,所得1克或1mL检样中所含细菌的菌落总数.

1.根据显微镜物镜与标本之间的介质的性质不同,物镜可分为干燥系物镜和油浸系物镜.前者是指物镜与标本之间的介质是空气。

后者是指物镜与标本之间的介质是一种和玻璃折光率相近的香柏油，实验中使用油浸系物镜最常用的放大倍数是100倍。

利用油镜进行细菌的形态观察,实验结束后,要用擦镜纸蘸取二甲苯擦拭油镜镜头。

2.配制好的培养基要立即进行湿热灭菌,经灭菌的培养基要放入培养箱中做无菌检查，以确定培养基是否可用。

3.培养基按其来源主要分为天然培养基,合成培养基和半合成培养基。

4.实验室中常用的干热灭菌方法有两种,如接种工具一般采用灼烧灭菌法,玻璃器皿常采用干热灭菌法,具体做法是将玻璃器皿放入干热灭菌箱。

5.微生物的接种方法有很多,对于细菌来讲,要在平板上获得单个的菌落,通常使用接种方式为三区划线。

接种后的平板一般要倒置于培养箱中进行培养,其倒置培养的原因是防止冷凝水冲走菌落。

6.革兰氏染色的一般过程主要包括制片,固定,结晶紫初染,碘液媒染,乙醇脱色,番红复染，水洗和镜检等步骤。

在操作过程中,最关键的步骤是脱色。

经革兰氏染色后,大肠杆菌被染成红色,八叠球菌被染成紫色。

大肠杆菌E.coli,枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis,酿酒酵母Saccharomycescerevisiae。

8.显微测微尺主要由目镜测微尺和镜台测微尺组成.在进行细胞大小测定之前,目镜测微尺要先进行标定。

9.测定酵母细胞死亡率时,所用的染料是美蓝染液,染色2-3分钟,于显微镜下观察,其中变蓝的细胞为死细胞。

10.麦氏计数板的规格为16×

25，在麦氏计数板一个滴加稀释10倍的样品,按对角线方位,左上,右上,左下,右下四个大格的细胞数分别为64个,100个,80个,96个.则本次检测的酵母细胞浓度为1.4×

107个/mL。

11.霉菌菌丝观察主要利用乳酸苯酚油作介质。

12.在显微镜下易于观察到霉菌的无性孢子,其中毛霉和根霉的无性孢子是孢子囊孢子,青霉和曲霉的无性孢子是分生孢子。

13.在细菌生理生化实验中,三糖铁高层琼脂中含有的糖主要有葡萄糖,蔗糖,乳糖三种糖.其中,葡萄糖是另外两种糖含量的1/10倍.其斜面含有指示剂酚红,它在pH小于6.8时为黄色,大于8.4时为红色,伤寒沙门氏菌在该培养基中生长一定时间后,其斜面的颜色为红色,大肠杆菌为黄色。

14.在进行酵母菌细胞出芽率测定的时候,芽体数10个,酵母细胞数为40个,则该样品中酵母细胞的出芽率为25%。

1.配制固体培养基时所用凝固剂含量一般为（A），半固体培养基常用凝固剂含量一般为（C）。

2.干热灭菌常用的灭菌温度是（C），灭菌时间为4-6小时。

3.下列培养基中，哪种培养基不是培养酵母常用的培养基（D）？

4.下列最适于霉菌生长的培养温度为（A）。

5.实验过程中，霉菌的接种工具一般为（B），接种方式为（D）。

6.明胶液化实验，明胶的水解是由于细菌所产生的（C）的作用。

7.斜面试管的标签应贴在斜面的正上方，距管口（D）处。

8.下列霉菌中有足细胞的霉菌为（D）。

四、问答题（共52分）

在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，其原因有三：

一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低（2分），二是湿热的穿透力比干热大（2分）；

三是湿热的蒸汽有潜热存在，每1克水在100℃时，由气态变为液态时可放出2．26kJ（千焦）的热量。

这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力（2分）。

3.以大肠杆菌和产气肠杆菌为例，说明其在VP实验与MR实验中的结果为什么刚好相反（7分）

多数细菌能够分解葡萄糖,但分解葡萄糖的途径和产物却不完全相同。

（2分）例如大肠杆菌能够利用分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸继续代可进一步生成其它的有机酸,大肠杆菌所产生的酸能使培养基的pH降到4.2或更低,从而使甲基红指示剂变成红色,显示MR试验阳性（2分）.而产气肠杆菌在在利用葡萄糖生成丙酮酸后,一部分丙酮酸脱羧生成中性的乙酰甲基甲醇,在强碱性环境中,被空气中氧气氧化,生成双乙酰,双乙酰与蛋白胨中的精氨酸胍基作用生成红色化合物,V-P试验结果为阳性（2分）.而大肠杆菌不能生成中性化合物,因此V-P试验阴性（1分）,而产气肠杆菌中的丙酮酸不能进一步分解生成大量的有机酸,因此MR试验阴性（1分）.

4.在啤酒生产过程中,常需要检测发酵液中的酵母细胞浓度,简述不同的计数方法,过程,并说明其优缺点（10分）

①直接计数法（1分）,主要利用血球计数板进行计数,计数结果即包括活细胞数,也包括死细胞数（2分）.优点:

快速,简便;

缺点:

难以确切知道活细胞数（2分）.

②间接计数法（1分）,也称活细胞计数法,主要是将样品稀释,利用倾注法倒平板,先将稀释过的样品倒在平皿,然后将冷却至45℃的培养基注入平皿,轻轻摇匀,使之混和（2分）.优点是反映真实,缺点是耗时太长,且易有人为误差（2分）.

5.简述目镜测微尺的标定过程（10分）

（1）把接目镜的上透镜旋开，将目镜测微尺轻轻放入接目镜中隔板上，使有刻度的一面朝下。

（2）将镜台测微尺放在显微镜的载物台上，使有刻度的一面朝上。

（3）先用低倍镜观察，对准焦距，待看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度相平行，并使二尺左边的一条线重合，向右寻找另外二尺相重合的直线。

（4）记录两条重合刻度间的目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。

（5）目镜测微尺每格长度的计算：

按下面的公式计算。

（每步2分）

6.以假丝酵母为例,说明小室培养的操作过程.（7分）

①取一培养皿,放一层吸20%的甘油或水的滤纸,其上放一玻璃U形管;

（1分）

②从酒精浸泡的干净载玻片中有镊子夹取一块,燃烧灭菌,放在U形管上;

③首先将PDA半固体培养基溶化,冷却至45℃并保温,取假丝酵母一环按液体接种方式接种于其,用酒精消毒的玻璃棒蘸取一滴已接种假丝酵母的PDA,迅速滴到已灭过菌的载玻片上,侍凝固后,用火焰烧过的盖玻片轻盖于其上,轻压,要求中央培养基直径不大于0.5cm,盖玻片和载玻片之间的距离不超过0.5mm.制好片后,盖好皿盖.（4分）

④于28℃培养,培养过程中使滤纸湿润.（1分）

7.现有绿茶一瓶,简要说明该样品的大肠菌群测定程序.（12）

①将样品稀释,取其中的三个稀释度接乳糖胆盐发酵管

②乳糖胆盐发酵实验将被检样品接种于乳糖胆盐发酵管中,如果不产气,则用为肠菌群阴性,如果产气,则继续进行检验.

③分离培养将产气的发酵管分别划线接种到EMB平板上,置37℃培养24小时,挑取紫红色,具有金属光泽的可疑菌落进行革兰氏染色,同时将对应的菌落接种到乳糖复发酵管进行复发酵.

④复发酵证实实验将复发酵管置37℃培养24小时,观察产气情况,凡是在乳糖发酵管产气,革兰氏染色为无芽孢杆菌,即报告为大肠菌群阳性.

（每步3分）