精品食物中膳食纤维的测定Word文档下载推荐.docx

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如下处理：

（1）在灰化炉525℃灰化过夜。

炉温降至130℃以下取出坩埚。

（2）用真空装置移出硅藻土和灰质。

（3）室温下用2%清洗溶液浸泡1小时。

（4）用水和去离子水冲洗坩埚；

然后用15ml丙酮冲洗然后风干。

（5）在干燥的坩埚中加0.5g硅藻土，在130℃烘干恒重。

（6）在干燥器中冷却1小时，记录坩埚加硅藻土重量，精确至0.1mg。

3.3真空装置：

（1）真空泵或抽气机作为控制装置。

（2）1L的厚壁抽滤瓶。

（3）与抽滤瓶相配套的橡皮圈。

3.4振荡水浴箱：

（1）自动控温使温度能保持在98±

2℃。

（2）恒温控制在60℃。

3.5天平：

分析级，精确至±

0.1mg。

3.6马福炉：

温度控制在525±

5℃。

3.7干燥箱：

温度控制在105和130±

3℃。

3.8干燥器：

用二氧化硅或同等的干燥剂。

干燥剂两周一次在130℃烘干过夜。

3.9PH计：

注意温控，用pH4.0、7.0和10.0缓冲液标化。

3.10移液管及套头：

容量100μl和5ml。

3.11分配器或量筒：

（1）15±

0.5ml，供分配78%的乙醇，95%的乙醇以及丙酮。

（2）40±

0.5ml，供分配缓冲液。

3.12.磁力搅拌器和搅拌棒。

4.试剂

全过程使用去离子水，试剂不加说明均为分析纯试剂

4.1乙醇溶液：

（1）85%：

加895ml95%乙醇在1L量筒中，用水稀释至刻度。

（2）78%：

加821ml95%乙醇在1L量筒中，用水稀释至刻度。

4.2丙酮：

4.3供分析用酶：

在0-5℃下储存。

（1）热稳定α-淀粉酶溶液：

Cat.No.A3306，SigmaChemicalCo.，St.Louis，MO63178，或Termamyl300L，Cat.No.361-6282，Novo-Nordisk，Bagsvaerd，Denmark，或等效的酶。

（2）蛋白酶：

Cat.No.P3910，SigmaChemicalCo.，或等效的。

当天用MES/TRIS缓冲液中现配50mg/ml酶溶液。

（3）淀粉葡糖苷酶溶液：

Cat.No.AMGA9913，SigmaChemicalCo.，或等效的。

4.4硅藻土：

酸洗（Celite545AW，No.C8656，SigmaChemicalCo.，或等效的）。

4.5洗涤液：

两者挑一。

（1）铬酸：

120g重铬酸钠Na2Cr2O7·

2H2O，1000ml蒸馏水和1600ml浓硫酸。

（2）实验室用液体清洁剂，预备急需清洗的（Micro，InternationalProductsCorp.，Trenton，NJ08016，或等效的）。

用水配制2%溶液。

4.6MES-TRIS缓冲液：

0.05mol/L，温度在24℃时pH值为8.2。

（1）MES：

2-（N-吗啉代）磺酸基乙烷（No.M-8250，SigmaChemicalCo.或等效的）。

（2）TRIS：

三羟（羟甲基）氨基甲烷（No.T-1503，SigmaChemicalCo.或等效的）。

在1.7L的蒸馏水中溶解19.52gMES和12.2gTRIS，用6mol/LNaOH调pH到8.2，用水定容至2L。

（注意：

24℃时的pH为8.2，但是，如果缓冲液温度在20℃，pH就为8.3，如果温度在28℃，pH为8.1。

为了使温度在20-28℃之间，需根据温度调整pH值。

）

4.7盐酸溶液：

0.561mol//L，加93.5ml6mol/L盐酸到700ml水中，用水定容至1L。

5.操作方法

5.1.样品制备：

（1）固体样品：

如果样品粒度＞0.5mm，研磨后过0.3-0.5mm（40-60目）筛。

（2）高脂肪样品：

如果脂肪含量＞10%，用石油醚去脂。

每克样品用25ml，每次提取完静置一会儿再小心将烧杯倾斜，慢慢将石油醚倒出，共洗三次。

（3）高碳水化合物样品：

如果样品干重含糖＞50%，用85%乙醇去除糖份，每克样品每次10ml，共洗三次轻轻倒出，然后在40℃烘箱中不时翻搅干燥过夜，并研磨过0.5mm筛。

5.2.样品消化

（1）准确称取双份1.000±

0.005g样品（M1和M2），置于高脚烧杯中。

（2）在每个烧杯中加入40ml

MES-TRIS缓冲液，在磁力搅拌器上搅拌直到样品完全分散。

（防止团块形成，使受试物与酶能充分接触）。

（3）用热稳定的淀粉酶进行酶解处理：

加100μl热稳定的淀粉酶溶液，低速搅拌。

用铝箔片将烧杯盖住，在95-100℃水浴中反应30分钟。

（起始的水浴温度应达到95℃）。

（4）冷却：

所有烧杯从水浴中移出，凉至60℃。

打开铝箔盖，用刮勺将烧杯边缘的网状物以及烧杯底部的胶状物刮离，以使样品能够完全的酶解。

用10ml蒸馏水冲洗烧杯壁和刮勺。

（5）用蛋白酶进行酶解处理：

在每个烧杯中各加入100μl蛋白酶溶液。

用铝箔盖住，在60℃持续摇动反应30分钟（开始时的水浴温度应达60℃），使之充分反应。

（6）pH值测定：

30分钟后，打开铝箔盖，搅拌中加入5ml0.561mol/LHCL至烧杯中。

60℃时用1mol/LNaOH溶液或1mol/LHCL溶液调最终pH为4.0-4.7。

当溶液为60℃时检测和调整pH，因为在较低温度时pH会偏高。

（7）用淀粉葡糖苷酶溶液酶解处理：

搅拌同时加100μl淀粉葡糖苷酶溶液。

用铝箔盖住，在60℃持续振摇反应30分钟，温度应恒定在60℃。

5.3测定

5.3.1.总的膳食纤维测定

（1）用乙醇沉淀膳食纤维：

在每份样品中，加入预热至60℃的95%乙醇225ml，乙醇与样品的体积比为4∶1。

室温下沉淀1小时。

（2）过滤装置：

用15ml78%乙醇将硅藻土湿润和重新分布在已称重的坩埚中。

用适度的抽力把坩埚中的硅藻土吸到玻板上。

（3）酶解过滤，用78%乙醇和刮勺转移所有内容物微粒到坩埚中。

如果一些样品形成胶质，用刮勺破坏表面，以加速过滤。

（4）抽真空，分别用15ml的78%乙醇，95%乙醇和丙酮冲洗残渣各2次，将坩埚内的残渣抽干后在105℃烘干过夜。

将坩埚置干燥器中冷却至室温。

坩埚重量，包括膳食纤维残渣和硅藻土，精确称至0.1mg。

减去坩埚和硅藻土的干重，计算残渣重。

（5）蛋白质和灰分的测定:

取成对的样品中的一份测定蛋白质，用本书前述或GB-960.52方法测定。

用（N×

6.25作为蛋白质的转换系数）。

分析灰分时用平行样的第二份在525℃灼烧5小时，在干燥器中冷却，精确称至0.1mg，减去坩埚和硅藻土的重量，即为灰分重量。

5.3.2.不溶性膳食纤维测定：

（1）称适量样品按5.2进行酶解，过滤前用3ml水湿润和重新分布硅藻土在预先处理好的坩埚上，保持抽气使坩埚中的硅藻土抽成均匀的一层。

（2）过滤并冲洗烧杯，用10ml70℃水洗残渣2次，然后再过滤并用水洗，转移到600ml高脚烧杯，保留用以测定可溶性膳食纤维，按5.3.3。

（3）用抽滤装置，分别用15ml78%乙醇，95%乙醇和丙酮各冲洗残渣2次。

应及时用78%乙醇、95%乙醇和丙酮冲洗残渣否则可造成不溶性膳食纤维数值的增大。

（4）按5.3.1.5用双份样品测定蛋白质和灰分。

5.3.3.可溶性膳食纤维测定：

（1）将不溶性膳食纤维过滤后的滤液收集到600ml高脚烧杯中，对比烧杯和滤过液，估计容积。

（2）加约滤出液4倍量已预热至60℃的95%乙醇。

或者将滤液和洗过残渣的蒸馏水的混合液调至80g，再加入预热至60℃的95%乙醇320ml。

（3）室温下沉淀1小时。

下面按5.3.1测定总膳食纤维，从"

湿润和重新分布硅藻土……"

。

6.计算

TDF、IDF、SDF均用同一公式计算

膳食纤维（DF，g/100g）测定：

DF={[（R1+R2）/2]-P-A}/[（M1+M2）/2]×

100

式中：

R1和R2=双份样品残留物重量（mg）

P和A=分别为蛋白质和灰分重量（mg）

M1和M2=样品重量（mg）