微生物实验报告答案Word文件下载.docx

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五、实验步骤：

1、取一个载玻片，将其洗净并沿一个方向擦拭干净，直至液体不再其上收缩为止；

将接种环整平，用灼烧过的接种环在混匀的菌种中取菌，按常规方法图片，应涂大，不宜过厚。

2、打开酒精灯，用火焰固定，不宜烤得太狠，否则菌种呈假阳性。

3、轻旋结晶紫染液滴管，将其旋出，滴加1滴草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位（轻晃使其完全覆盖），染色40s。

4、染色完成后倾去染液，水洗至流出水为无色。

5、将玻片上残留水用滤纸吸去，待其干燥。

6、在涂菌部位滴加碘液，覆盖1min。

7、媒染完成后，倾去碘液，水洗至流出水无色。

8、将玻片上残留水用滤纸吸去，待其干燥。

9、将载玻片放在白色笔记本上，用滴管滴加95%乙醇脱色，脱色30~40s，不宜脱色太狠，否则菌种呈假阴性。

10、脱色完成后立即用水洗去乙醇。

11、将玻片上残留水用滤纸吸去，待其干燥。

12、滴加番红复染液，染色4min。

13、染色完成后，水洗至流出水无色。

14、吸去残留水并晾干。

15、用显微镜观察并绘图。

用以上步骤完成：

大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的混合图片染色、大肠杆菌单独菌种染色、金黄色葡萄球菌单独菌种染色。

六、注意事项：

1、选用活跃生长期菌种染色，老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性。

2、图片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性。

3、脱色是革兰氏染色是否成功的关键，脱色不够造成假阳性，脱色过度造成假阴性。

七、实验结果与讨论：

1、结果：

绘出高倍镜下观察的菌体图像。

2、思考题：

（1）写出常见的革兰氏阳性菌与阴性菌，包括致病菌。

（2）革兰氏染色的原理是什么？

印象因素有哪些？

（3）如何验证你的染色结果是否正确？

【篇二：

微生物实验报告一】

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学生实验报告

院（部）生物科学与工程学院姓名学号

专业生物工程班级

同组人员

课程名称微生物学类实验实验名称产酶微生物的分离、纯化与选育实验日期2013.11批阅日期成绩教师签字

北方民族大学教务处制

产酶微生物的分离、纯化与选育

实验意义：

酶是生物体内进行生物化学反应的催化剂，在生物体中已发现的酶有2500多种。

由于酶促反应的特异性强，反应温和，安全无毒，环境污染少，在洗涤剂、皮革、纺织、诊断、制药等领域具有广泛的应用价值。

能由工业生产的50多种酶制剂蛋白酶、淀粉酶等，大部分是由霉菌、细菌、链霉菌和酵母菌生产的。

通过本实验，学会从自然界中分离产酶微生物的方法，军中的纯化技术及其高产菌的选育技术。

1.蛋白酶产生菌的分离与纯化

1.1实验目的：

学习从自然界中分离蛋白酶产生菌并纯化。

1.2实验原理

许多细菌和霉菌产生蛋白酶，细菌中的芽孢杆菌是常见的蛋白酶产生菌。

本实验将土壤样品（或其他样品）悬液加热处理，杀死非芽孢细菌及其他微生物后进行划线分离得到芽孢杆菌，将其接种到酪蛋白平板进行培养，根据酪蛋白平板的水解圈作初筛。

也可直接将细菌或霉菌接种到酪蛋白平板进行培养，分离筛选其他蛋白酶产生菌。

1.3实验仪器与材料

土壤样品或其他富含蛋白质的样品、牛肉膏蛋白胨培养基平板、酪蛋白平板、无菌水（带玻璃珠）、芽孢染色液；

显微镜、恒温水浴锅、酒精灯、接种针、游标卡尺、无菌移液管、无菌试管、量筒等。

1.4实验方法与步骤

1.4.1配制酪素培养基：

牛肉膏0.3g、nacl0.5g，酪素1.0g，琼脂2.0g，蒸馏水100ml左右，调节ph7.6-8.0。

1.4.2配制土壤样品：

1）采集土壤样品，用无菌水制备1：

10土壤悬液。

2）取1：

10土壤悬液5ml，然后将悬液按10、10、10、10梯度稀释，注入试管中。

-1-2-3-4

3）将这些试管放入75-80℃水浴中热处理10min，以杀死非芽孢细菌。

1.4.3灭菌与接种：

1）将培养基灭菌处理。

1.4.4.蛋白酶产生菌的纯化：

1）根据酪蛋白平板的水解圈作初筛，挑选出单菌落的蛋白酶产生菌。

2）将挑选出的单菌落用平板划线法接种到牛肉膏蛋白胨培养基上，然后将平板倒置放于培养箱中24—48h。

1.4.5芽孢杆菌的染色判断

1）挑去菌落涂片固定。

2）滴加1——2滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。

3）用木夹夹住载玻片在火焰上加热，使染液冒蒸汽但勿沸腾，切忌使染液蒸干，必要时可添加少许染液

4）倾去染液，待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。

5）用番红水溶液复染1分钟，水洗至水为无色。

6）待干燥后，置油镜观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色。

1.4.6蛋白酶产生菌的保存培养：

1）用斜面划线法，取纯化鉴定后的菌种接种于斜面上，放于培养箱中24—48h。

2）将培养后的菌种置于冰箱中保存。

1.5实验结果：

在含酪蛋白的平板上，产蛋白酶的芽孢杆菌可形成蛋白质水解圈。

自然界中分离的微生物各菌株间产蛋白酶活力有很大差异，有些芽孢杆菌酶活力超过4000u/ml。

1）描述你所分离的蛋白酶产生菌的菌落特征和个体形态特征；

答：

第一组：

a:

原液培养基表面出现大面积菌落，难以挑出所需单一菌落；

b:

10培养基表面菌落较多，但未发现与所需菌落相关特征；

c:

10培养基表面基本未出现菌落：

d:

10、10均发现与所需菌落特征相符的菌落，继续培养待进一步纯化。

第二组：

a：

原液培养基表面出现大面积菌落，难以区分-2-3-4-1

b:

10培养基表面基本未出现菌落

10、10培养基表面均发现与所需菌落特征相符的菌落，继续培养待进一步纯化

2）报告你所分离的蛋白酶产生菌的初筛（水解圈与菌苔直径的比值）结果。

求的平均hc值=1.7-1-2-4-3

1.6注意事项

1）土壤悬液加热处理的温度和时间应准确控制；

2）点接含酪蛋白的平板时，接种量及接种面积要基本相同。

1.7分析与讨论

在酪蛋白平板上水解圈与菌落直径比值大的菌落，其蛋白酶活力不一定大，因此，对初筛选出的水解圈与菌落直径比值大的菌落要进行发酵培养，进一步对发酵液进行酶活力测定。

1.8思考题

1）对所筛选的菌株如何进一步提高酶活力？

请写出设想和方案；

选用蛋白酶产量较高的原始菌种，扩大培养后，采用低浓度的菌悬液，进行紫外线时间梯度照射，选取一个突变率较高，成活率也较高的时间，大批量的进行紫外照射诱变，然后在明胶固体培养基平板上筛选水解圈较大的菌株接种，培养后测定水解酶活性，进一步筛选出高产菌株。

2）蛋白酶有哪些方面的应用。

蛋白酶广泛存在于动物内脏、植物茎叶、果实和微生物中。

微生物蛋白酶，主要由霉菌、细菌，其次由酵母、放线菌生产。

2.产酶微生物菌种的选育

生物的遗传信息的改变是通过基因突变、基因重组和基因转移来进行的。

基因突变，又称点突变（pointmutation），包括自发突变和诱发突变，前者是未经人为施加诱变剂处理而发生的突变，后者是经人为施加诱变剂处理而获得的突变。

两种突变都是由于一个或几个碱基的增加、缺失或置换而引起的，因此本质相同，不同的只是诱发突变的频率比自发突变的频率要高得多。

这一部分的实验是以紫外线为例介绍了物理因素对微生物的诱变作用。

本实验中，学生将筛选出的蛋白酶的产生菌株作为出发菌株通过紫外线即物理因素对微生物的诱变作用，对以上菌株进行选育工作。

特以蛋白酶产生菌株作为出发菌株，经过紫外线的

诱变作用，根据透明圈直径与菌落直径的比值，可初步确定蛋白酶的高产菌株为例来介绍本实验内容。

2.1实验目的通过实验观察紫外线和亚硝基胍等理化因素对微生物的诱变效应，并掌握基本方法。

2.2实验原理

基因突变可分为自发突变和诱发突变。

许多物理因素、化学因素和生物因素对微生物都有诱变作用，这些能使突变率提高到自发突变水平以上的因素称为诱变剂。

紫外线（uv）是一种最常用的物理诱变因素。

它的主要作用是使dna双链之间或同一条链上两个相邻的胸腺嘧啶间形成二聚体，阻碍双链的分开、复制和碱基的正常配对，从而引起突变。

紫外线照射引起的dna损伤，可由光复活酶的作用进行修复，使胸腺嘧啶二聚体解开恢复原状。

因此，为了避免光复活，用紫外线照射处理以及处理后的操作应在红光下进行，并且照射处理后的微生物放在暗处培养。

本实验分别以紫外线作为单因子诱变剂处理产生蛋白酶的菌株，根据试验菌诱变后在蛋白酶培养基上透明圈直径的大小来指示诱变效应。

一般来说，透明圈越大，蛋白酶活性越强。

2.3实验仪器与材料

筛选出的蛋白酶的产生菌株、酪素培养基、无菌生理盐水、无菌水试管等；

1ml无菌吸管、玻璃涂棒、血细胞计数板、显微镜、紫外线等（15w）、磁力搅拌器、台式离心机、震荡混合器等。

2.4实验方法与步骤

1）菌悬液的制备：

①取培养48小时生长旺盛的出发菌株斜面4-5支，用10ml无菌生理盐水将菌苔洗下，倒入盛有玻璃珠的小三角烧瓶中，振荡30分钟，以打碎菌块。

②用显微镜直接计数法计数，调整细胞浓度为每毫升10个。

2）平板制作：

将酪素培养基溶化后，冷至55℃左右时倒平板18套，凝固后待用。

8

【篇三：

微生物生理生化反应实验报告】

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姓名系年级2011级生科2班组别四

科目微生物学实验题目微生物的生理生化反应

微生物的生理生化反应

一、【实验目的】

1.证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。

2.掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。

3.了解糖发酵的原理和在肠细菌坚定中的重要作用。

4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。

5.了解吲哚和甲基红试验的原理以及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。

二、【实验仪器与试剂】

菌种：

枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、普通变形杆菌、产气肠杆菌培养基：

培养基：

固体淀粉培养基、固体油脂培养基（大分子水解试验）；

葡萄糖发酵培养基、乳糖

发酵培养基（内装有倒置的德汉氏小管）（糖发酵试验）；

蛋白胨水培养基（吲哚试验）；

葡萄糖蛋白胨水培养基；

试剂：

卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水、

仪器：

酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管

三、【实验原理】

1.在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢，代谢过程主要是酶促反应过程，由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。

2.淀粉的水解：

由于微生物对淀粉这种大分子物质不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用.胞外酶主要为水解酶,通过加水裂解大的物质为较小的化合物,使其能被运输至细胞内.如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精,双糖和单糖；

而淀粉遇碘液会产生蓝色，因此能分泌胞外淀粉酶的微生物，则能利用其周围的淀粉，在淀粉培养基上培养用碘处理其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈，据此可分辨微生物能否产生淀粉酶。

3.油脂的水解：

在油脂培养基上接种细菌，培养一段时间后观察菌苔的颜色，若出现红色斑点，则说明此中菌可产生分解油脂的酶。

4.糖发酵试验：

糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应,在肠道细菌的鉴定上尤为重要.绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源,但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异.有些细菌能分解某种糖产生有机酸（如乳酸,醋酸,丙酸等）和气体（如氢气,甲烷,二氧化碳等）;

有些细菌只产酸不产气.例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气。

产酸后再加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且德汉氏小管中会收集到一部分气体。

若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管中无气体。

5.imvc实验主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌。

（1）吲哚试验：

是用来检测吲哚的产生，在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白

胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。

但并非所有的微生物都具有分解色氨酸产生吲哚的能力，所以吲哚实验可以作为一个生物化学检测

的指标。

大肠杆菌吲哚反应阳性，产气肠杆菌为阴性。

（2）甲基红试验（mr）：

某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者进而被分解产生甲酸，

乙酸和乳酸等多种有机酸，培养基就会变酸，使加入培养基中的甲基红指示剂由橙黄色转变为红色，即甲基红反应。

大肠杆菌为阳性，产气肠杆菌为阴性。

四、【实验步骤】1.淀粉水解实验

（1）倒平板：

按照淀粉培养基配方配制固体淀粉培养基，灭菌，待培养基冷却至50℃左右，在酒精

灯火焰旁倒平板，每组两个平板。

（2）用记号笔在平板底部划成四部分。

（3）接种：

在无菌操作台上，将枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌分别在不

同的部分点种，如图一所示，注意仅用接种针接触极少面积的培养基，在平板的反面对应部分贴上标签，标签上分别写上菌名，以免混淆。

（4）培养：

将平板倒置，在28℃温箱中培养两天。

（5）观察：

取出培养基，观察各种细菌的生长情况，打开平板盖子，滴入少量卢戈氏碘液于平板中，

轻轻旋转平板，使碘液均匀铺满整个平板，观察培养皿中菌落周围是否有无色透明圈，若有无色透明圈出现，说明淀粉已经被水解，为阳性，反之则为阴性。

记录实验结果。

图一：

淀粉水解试验接种示意图图二：

油脂水解试验接种示意图2.油脂水解试验

按照油脂培养基配方配制固体油脂培养基，灭菌，待培养基冷却至50℃左右，充分振荡，

使油脂均匀分布，在酒精灯火焰下倒平板，每组两个平板。

（2）用记号笔在在平板底部划成四部分。

在无菌操作台上将枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌分别划十字线接种于平板相对应部分的中心，如图二所示，并贴好标签，标签上注明菌种的名称。

取出平板，观察菌苔颜色，如果出现红斑点，说明脂肪水解，为阳性反应。

3.葡萄糖发酵实验

（1）培养基的配制：

按照糖发酵培养基配置葡萄糖发酵培养基，分装至试管中，用胶头滴管往德汉氏

小管中注满培养基，再把德汉氏小管倒置放入试管中，注意不要让德汉氏小管中进入空气，每组五只试管，灭菌。

（2）接种：

待培养基冷却至常温时，在无菌操作台上，取葡萄糖发酵培养基试管2支接入大肠杆菌，

再取两只接入普通变形杆菌，接种后轻摇试管，使其均匀，防止倒置的小管进入气泡，第五支不接种，作为对照。

在各试管外壁上贴上标签，标签上分别标明发酵培养基的名称和所接种的细菌菌名。

（3）培养：

把接种后的试管放在试管架上，把试管连同试管架放入培养箱中于28℃下培养两天。

（4）观察：

观察各试管颜色变化及德汉氏小管中有无气泡，并记录实验结果。

4.乳糖发酵实验

按照糖发酵培养基配置乳糖发酵培养基，分装至试管中，用胶头滴管往德汉氏小

管中注满培养基，再把德汉氏小管倒置放入试管中，注意不要让德汉氏小管中进入空气，每组五只试管，灭菌。

待培养基冷却至常温时，在无菌操作台上，取乳糖发酵培养基试管2支接入大肠杆菌，再

取两只接入普通变形杆菌，接种后轻摇试管，使其均匀，防止倒置的小管进入气泡第五支不接种，作为对照。

5.吲哚试验

按照蛋白胨水培养基配方配制培养基，分装至试管中，每组五只试管，在高压蒸气

锅内灭菌。

待培养基冷却后，在无菌操作台上将大肠杆菌接入2支蛋白胨水培养基，产气肠杆菌接入2

支蛋白胨水培养基，剩余一只试管不接种，作为空白对照，贴好标签。

往培养后的蛋白胨水培养基内加入3~4滴乙醚，摇动数次，静置1min，待乙醚上升后，沿试

管避徐徐加入2滴吲哚试剂。

在乙醚和培养物之间产生红色环状物为阳性反应。

观察加入试剂后试管内的颜色反应并记录实验结果。

6.甲基红试验

按照葡萄糖蛋白胨水培养基配方配制培养基，分装至试管中，每组五只试管，在高

压蒸气锅内灭菌。

待培养基冷却后，在无菌操作台上将大肠杆菌接入2支葡萄糖蛋白胨水培养基，产气肠杆菌

接入2支葡萄糖蛋白胨水培养基，剩余一只试管不接种，作为空白对照，贴好标签。

培养两天后后，将每支葡萄糖蛋白胨水培养基培养物内加入2滴甲基红试剂，培养基变为红

色者为阳性，变为黄色者为阴性。

观察试管内的颜色变化，并记录实验结果。

五、【实验结果及分析】

实验结果记录

淀粉水解试验:

油脂水解试验:

葡萄糖发酵培养基：

乳糖发酵培养基:

表4.乳糖发酵试验结果（“+”表示阳性，“—”表示阴性）

吲哚试验:

甲基红试验:

六、【注意事项】

1.淀粉水解试验中，观察各种细菌生长情况时，滴入少量卢戈氏碘液于平板中，应轻轻旋转平板，使碘

液均匀铺满整个平板。

2.油脂水解试验中，制备固体油脂培养基时，应充分摇荡，使油脂均匀分布。

3.接种前要用记号笔做好标记，接种时要对号接种，以免接错菌种，造成混乱。

4.糖发酵试验中，接种后要轻缓摇动试管，使其均匀，防止倒置的小管进入气泡。

否则会造成假象，得出错误的结果。

5.吲哚试验中，注意加入3~4滴乙醚，摇动数次，静置1min，待乙醚上升后，再沿试管壁徐徐加入2滴吲哚试剂。

否则就会观察不到在乙醚和培养物之间产生的红色环状物。

6.甲基红试验中，应该注意甲基红试剂不要加得太多，以免出现假阳性。

7.在使用酒精灯时要特别注意，避免酒精灯爆炸。

8.接种均在无菌条件下操作，接种完毕以后用灭菌好的棉花塞住管口防止污染。

七、【思考题】

1.你怎么样解释淀粉酶是胞外酶而非胞内酶？

淀粉是大分子物质，进入细胞十分困难，甚至需要触及高耗能的胞吞作用。

因而通过胞外酶的作