中药化学试验技术Word文件下载.docx

中药化学试验技术Word文件下载.docx

《中药化学试验技术Word文件下载.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《中药化学试验技术Word文件下载.docx（34页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

展开剂——C6H6：

EtOH

显色剂——0.1%溴酚兰试液→黄色

4、酚类和鞣质

（1）FeCl3试剂：

+1%FeCl3试液→蓝、暗绿或蓝紫色

（2）三氯化铁-铁氰化钾试剂：

喷洒→蓝色斑点

（3）香草醛-盐酸试剂：

喷洒→红色（间苯二酚、间苯三酚）

（4）重氮盐试剂：

+对硝基苯胺、亚硝酸钠→红色

（5）薄层层析检查：

吸附剂——硅胶G或纤维素

展开剂——n-BuOH：

H2O；

15%HAc

显色剂——1%FeCl3试液

1%三氯化铁-1%铁氰化钾试液→蓝、绿或黑色

鞣质与酚类的区别：

+明胶——沉淀

上清液+1%FeCl3试液→蓝、暗绿或蓝紫色

5、糖和苷

（1）斐林试剂：

+硫酸铜、酒石酸钾钠——砖红色沉淀（还原糖）

（—）+1%HCl+NaOH沉淀（苷元）

△30min上清液（+）（多糖、苷）

（2）Molish反应：

+α-萘酚-浓硫酸→紫红色环

（3）银镜反应：

+0.1N硝酸银、5N氨水→银褐色（还原糖）

（4）薄层层析检查：

：

Pd：

显色剂——苯胺-邻苯二甲酸

6、皂苷

（1）泡末试验：

振摇→大量持续性泡末

+0.1MHCl二管泡末高度相同（三萜皂苷）

+0.1MNaOH碱管高于酸管（甾体皂苷）

（2）溶血试验：

+2%红血球悬浮液→溶血

（3）Lieberman—Burchard反应：

+醋酐-浓硫酸——紫红色（三萜皂苷）

黄-红-紫-污绿（甾体皂苷）

7、甾体

（1）Lieberman—Burchard反应：

+醋酐-浓硫酸→黄-红-紫-污绿

（2）氯仿-浓硫酸反应：

+氯仿-浓硫酸氯仿层→红或青色

硫酸层→绿色荧光

（3）五氯化锑或三氯化锑反应：

+SbCl3或SbCl5→红色

吸附剂——中性氧化铝或硅胶G

展开剂——C6H6-MeOH；

CHCl3-MeOH

显色剂——10%磷钼酸→蓝-蓝紫色

5%三氯化锑试液→红、棕红或绿色

8、黄酮

（1）盐酸-镁粉反应：

+HCl-Mg→红色

（2）三氯化铝反应：

+AlCl3→黄色

（3）浓氨水反应：

+NH3→亮黄或橙色

吸附剂——聚酰胺或硅胶G

展开剂——MeOH-H2O；

EtOH-H2O

显色剂——UV→亮黄或黄绿色荧光

1%三氯化铝试液→亮黄色

9、香豆素、内酯

（1）开闭环反应：

+1%NaOH→澄清+2%HCl→混浊

（2）异羟污酸铁反应：

+7%盐酸羟胺、10%KOH△+稀HCl、1%FeCl3→红色

（3）重氮盐试剂：

吸附剂——酸性硅胶G或硅胶G或酸性氧化铝

展开剂——甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5：

4：

1）

显色剂——UV→蓝色荧光

异羟污酸铁试液→红色

10、强心苷

（1）Kedde试剂：

+3，5-二硝基苯甲酸试液→紫红色

（2）Baljet试剂：

+碱性苦味酸试液→橙或橙红色

（3）Legal试剂：

+亚硝酰铁氰化钠试液→紫红色

（4）K-K反应：

+FeCl3/冰HAc、浓H2SO4→上层绿~蓝色（2-去氧糖）

界面红棕色

吸附剂——硅胶G或中性氧化铝

H2O（4：

1：

5）

显色剂——碱性3，5-二硝基苯甲酸试液→紫红色

碱性苦味酸试液→橙红色

11、蒽醌

（1）碱液反应：

+10%NaOH→红色+H2O2→红色不褪+H+→红色褪去

（2）醋酸镁反应：

+1%MgAc2→红色

展开剂——Pet：

EtOAc

显色剂——UV→黄色荧光

5%NaOH→红色

12、挥发油、油脂

（1）油斑检查：

油斑挥发→挥发油；

油斑不消失→油脂或类脂

（2）磷钼酸反应：

喷洒5%磷钼酸试液→蓝色（油脂、三萜、甾醇）

第二章化合物结构与溶解性

中药中的化学成分十分复杂，一味中药中有少则几十种，多则几百种成分。

要对这些成分进行结构及活性等方面的研究，就必须首先进行提取及分离。

提取——就是用适当的溶剂将中药中的化学成分从组织细胞中溶解出来。

提取是分离的前提，正确的提取方法及正确的提取溶剂，对分得单体化合物非常关键。

尤其在近代，随着中药研究的增多，中药中含量较多成分的越来越少，越来越多的是含量越来越微成分的中药。

如若提取方法不当，则根本提不出中药中的微量成分。

需提取化合物的结构特性，是选择提取方法及提取溶剂的依据。

一般需通过预试验或查阅有关资料来了解，而化合物的极性大小与溶解性密切相关。

注意：

a、原植物品种鉴定

b、热不稳定化合物，避免高温下操作。

如蛋白质、环烯醚萜类……

酸、碱不稳定化合物，避免强酸、强碱下操作。

如香豆素……

易氧化化合物，避免提取时间过长，避光。

如Vc、延胡索乙素……

c、对未知成分，应综合考虑以上因素。

一、化合物结构与极性

化合物极性大小分类是相对概念，没有固定的概念。

极性大小在提取分离工作中常成为向导。

判断依据：

a、极性基团与非极性基团的性质与数量，多则大。

b、分子体积大小。

基团一样，分子大，极性小。

极性基团：

-COOH、

、—OH、—NH2……

中等极性基团：

—O—R、—COOR……

非极性基团：

烷基

eg：

glc＞环己烷

苯甲酸＞苯酚

环黄芪皂醇

4个-OH，分子大，为非极性物质黄芪皂苷甲

中等极性物质：

难溶于H20

可溶于EtOH、MeOH、BuOH…

酸性基团（-COOH、ph-OH）+OH-极性物质（成盐）

碱性基团（＞N-）+H+极性物质（成盐）

极性大小还与氢键极性变小

立体效应……有关

二、各种溶剂的性质

化学成分在各种溶剂中的溶解度直接与溶剂性质有关。

极性溶剂——H2O

溶剂中等极性溶剂（亲水性有机溶剂）——EtOH、MeOH、甲~丁醇、Me2CO…

非极性溶剂（亲脂性有机溶剂）——Et2O、CHCl3、C6H6、Pet、己烷

1、水优点：

价廉，易得，极性大（分子小、含O），无毒，易进植物细胞

缺点：

专属性差，特别是复方

蒸馏水或重蒸水——中性

自来水——pH5~6

2、亲水性有机溶剂：

甲、乙、丙、异丙、丁醇，丙酮

极性基团：

—OH、C=0（偶极矩大），分子小

甲~丙醇与水互溶

丁、戊醇与水混溶互饱和后分层，有—OH，但分子大（非极性部分增大）

丙酮即亲水，又亲脂

优点：

较价廉，毒性较小，易进入植物细胞

专属性差

3、亲脂性有机溶剂

只含C、H：

Pet、C6H6、正己烷、环己烷极性小

氯代烃：

CCl4、CHCl3、CH2Cl2

含C、H、O：

EtOAc（酯基）、Et2O（醚基）大

不溶于水或难溶于水

专属性强，挥发性大，易挥收

易燃（除CHCl3外），毒性较大，价贵，设备要求高，较难进入细胞

多用于分离纯化。

极性排列：

Pet〈C6H6〈CHCl3〈Et2O〈EtOAc〈n-BuOH〈Me2CO〈EtOH〈MeOH〈H2O

4、各种溶剂性能（P56）

三、化合物极性与溶解性

如何了解极性预试验

层析正相：

Rf大，极性小；

Rf小，极性大

葡萄糖、蔗糖…——水、醇

淀粉、多糖（OH多，但分子大）——热水

蛋白质酸碱二性——溶于水难溶于亲脂性溶剂

氨基酸——溶于水、醇

苷类——水（含糖）

苷元——非水、亲脂

游离生物碱——非水（大多）、亲脂+H+

季铵、N→O物——水极性分子，溶于水

大多遵循“相似相溶”的原则，但也是相对而言。

四、提取原理及影响因素

1、原理

过程：

溶剂→组织细胞→溶解可溶物→溶液（提取液）

原理：

浸湿→溶解→扩散

（1）浸湿：

溶剂附于中药粉末表面使之湿润，再通过毛细管和细胞间隙渗入细胞内。

能否附着于粉末，取决于溶剂和植物二方面性质

非极性溶剂难进入含水植物粉末

水难进入油脂性植物粉末，需先脱脂，如种子。

（2）溶解：

不同溶剂，溶解对象不一。

（3）扩散：

溶液渗透压增高，高浓度溶液向四周扩散，至细胞内外达平衡，

达饱和。

∴保持良好的浓度差是提高提取浸出效果关键

用渗透、连续回流，或定时换溶剂

2、影响因素

（1）粉碎度细——接触面大，效果好，

但过细药粉吸附力增强

同时大量细胞破坏，溶出成分↑

（2）温度高——溶剂分子运动加快，增加溶解扩散过程，效果好

但防止受热易破坏成分被破坏。

（3）时间长——提出多，过长无必要，搅拌可缩短时间

（4）提取溶剂（关键）选择不当，可一无所获。

如若对所替成分不了解，首选乙醇或水。

（5）pH值水pH小——提碱性成分

pH大——提酸性成分

非极性溶剂pH小——提酸性成分：

酚、酸

pH大——提碱性成分：

生物碱

五、常用提取溶剂

1、水——优点：

价廉、易得，无药理作用，渗透性强

鞣质、多糖、蛋白质大量溶出，后处理过滤、浓缩困难，易发霉

有热水、冷水、酸水、碱水

2、乙醇——优点：

可溶出大多数成分，不发霉（＞20%），易回收

mp78.8缺点：

易燃，禁直火

95%EtOH——生物碱、挥发油…

60~70%EtOH——皂苷、黄酮苷、蒽醌苷…

40~50%EtOH——强心苷、鞣质…

<

50%EtOH——生物碱盐…

3、丙酮——优点：

即亲水，又亲脂∴对极性小的成分也可溶解

mp56.2分子小，易进入植物细胞∴对含水或含油中药均可

易回收

易燃、价贵

4、酸、碱性有机溶剂

碱性成分——NH4OH、Na2CO3…湿润或直接H+/EtOH提取

酸性成分——HCl、H2SO4…湿润有机溶剂提取OH-/EtOH提取

六、各种提取方法及选择

（一）溶剂法

1、浸渍法：

水或有机溶剂用于受热易破坏成分

2、渗漉法：

3、煎煮法：

一般以水为溶剂，酸水、碱水则需考虑煎煮时浓度的改变

适于受热不易分解破坏的极性化合物，不太用

4、回流提取法：

有机溶剂提取，不适于受热易破坏成分

5、连续回流提取法：

低沸点有机溶剂提取，不适于受热易破坏成分

提取效率高，溶剂用量少

难于用于大量药材的提取

（二）蒸馏法用于挥发性成分，且与水不相混溶或难溶

共水蒸馏法需防药粉烧焦

水蒸气蒸馏法可避免药粉烧焦

收集馏出液，盐析或有机溶剂萃取

少量可以用挥发油测定器提取。

注意d<

1或d>

1

（三）升华法固体Δ气体冷固体

如樟木中樟脑、茶叶中咖啡因的提取

（四）超临界提取法（SFE）

优点：

a、提取效率高b、成分不被破坏（不需加热）

c、无残留溶剂d、可选择性分离

1、超临界流体（SF）：

处于临界温度（Tc）和临界压力（Pc）以上

介于气体和液体之间的流体

SF密度与液体相近，粘度与气体相近，扩散系数比液体大100倍，

∴对许多物质有很强的溶解能力。

SF：

CO2、SF6、C2H6、NH3、CCl2F2…

2、CO2（SF）

常用CO2，Tc=31.3。

C、无色、无毒、无味，不易燃，化学惰性，价廉。

a、选择性溶解：

超临界状态下，CO2对不同的物质溶解能力差别很大。

亲脂性低沸点成分（挥发油、烃、酯、醚…）——低压提取（<

104KPa）

强极性成分（糖、氨基酸…）——高压提取（>

4×

104KPa）

分子量越高，越难提，分子量200~400较易提。

b、提取压力、温度与溶解度：

在临界点附近，温度、压力的微小变化，都会使SF的性质产生明显改变。

CO2一般在35~40。

C左右。

c、夹带剂：

加入少量夹带剂，可改善溶解度。

良好的夹带剂：

提高溶解度，改善选择性，增加得率。

eg：

MeOH、EtOH、Me2CO…

3、提取过程

4、应用

发现SFE近百年，上世纪50年代初进入试验阶段，如从石油中脱沥青；

70年代，国外已有从植物中提取化学成分得应用，如从咖啡豆中提取咖啡因，烟草中提取尼古丁…

70年代末，SFE在食品中的应用增多，如从啤酒花中提取酒精已形成生产规模；

80年代，SFE越来越多的用于香料的提取，如从菊花、米兰、栀子花、玫瑰中提取香料；

肉桂、胡椒、薄荷中提取香辛成分…

90年代，开始从植物药中提取成分，如蛇床子、茵陈蒿、桑白皮、紫草、月见草…中提取成分。

第三章各种分离材料的性能

中药化学研究的诸多成果，与分离材料的不断创新发展，关系十分密切。

分离材料选择的正确与否，直接影响分离效果。

尤其是近年来，随着科学技术的飞速发展，新型分离材料不断出现，使以前一直认为不易分离的化合物（eg.鞣质、多糖、蛋白质…）可以得到分离。

如大孔吸附树脂的应用，使得水溶性化合物的去杂大大简化；

反相硅胶及其它键合硅胶的出现，使得在分离异构体及水溶性化合物方面有独到之处。

这一章主要讲各种分离材料的性能、特点及适用范围。

一、层析纸

1、组成：

纤维素（β14苷键吡喃葡萄糖）

2、性质：

干燥纸——6~7%的水，氢键与纤维素上-OH结合

水饱和的纸——20~35%的水

3、规格性能

国产层析纸的性能与规格

型号标重厚度吸水性灰分展速备注

（g/m2）（mm）（30min水上升mm）（%）

1900.17150~1200.08快速

2900.16120~910.08中速相当于Whaldmann1号

3900.1590~600.08慢速

41800.34151~1210.08快速

51800.32120~910.08中速相当于Whaldmann3号

61800.3090~600.08慢速

4、适用范围a、分离亲水性化合物：

糖类、苷类、氨基酸、有机酸…

b、常用于亲水性成分的定性（因载量小），与标准物对照

c、摸索萃取条件

d、判断化合物极性大小

二、氧化铝

1、组成碱性氧化铝（pH9）

中性氧化铝（pH7.5）

酸性氧化铝（pH2~3）

100~160目——柱层>

200目柱层需加压

160~200目——软板TLC

>

200目——硬板TLC

2、活度：

含水量越少，吸附力越强，活度越小

含水量（%）0361015

活度（级）IIIIIIIVV

3、应用

碱性氧化铝——分离生物碱和甾族化合物，不适于醛、酮、酯、有机酸

中性氧化铝——分离中性、碱性亲脂性化合物，不适于酸性成分

酸性氧化铝——分离有机酸类，不适于碱性成分

缺点：

吸附力强，成分损失大

常与成分发生反应，如络合、氧化、消除及异构化…

三、活性炭

属非极性吸附剂（与Al203、SiO2相反），来源充足、价格便宜

1、

类型粉状活性炭：

比表面积大，吸附力强，流速慢，层析需加压

颗粒状活性炭：

比表面积小，吸附力弱，流速快，易于控制。

∴常用

锦纶活性炭：

以锦纶为粘合剂，将粉状活性炭制成颗粒状

比表面积介于前二者之间，但吸附力最弱（∵加入锦纶，一方面减少比表面积，一方面锦纶与活性炭之间吸附）

2、分离范围

粉状活性炭——对活性炭吸附较弱物质（极性较大成分），

常拌入30~40%硅藻土，增加流速。

颗粒状活性炭——中等极性成分

锦纶活性炭——极性较小成分

主要用于柱层分离及色素和非极性杂质的吸附。

四、大孔吸附树脂

应用时间较短，其性能及分离条件还在不断摸索之中。

1、特性

白色球形颗粒，粒度20~60目，不溶于酸、碱、有机溶剂

非极性——苯乙烯型

中极性——2-甲基丙烯酸酯型

孔径——小球间平均距离（A。

）

比表面积——小球表面积总和（m2/g）

2、分类

根据孔径、比表面积分类

部分大孔吸附树脂性能

型号厂名极性树脂结构比表面积（m2/g）孔径（A。

D2南开大学非极性乙基苯乙烯382133

D6………46673

D8………71266

DS2……苯乙烯64259

DM2……2-甲基苯乙烯26624

D101天津制胶厂……400100

AmbertitXAD-1Rohmbaa（美）…苯乙烯100200

XAD-2………33090

XAD-3………52644

XAD-4………75050

XAD-5………41568

XAD-7…中极性2-甲基丙烯酸酯45080

XAD-8………140250

DiaionHP-10Organos（日）非极性苯乙烯400小

HP-20………600大

HP-30………500~600大

HP-40………600~700小

3、原理

吸附——范德华力或氢键

筛选——本身多孔性结构决定，即分子量大小

水溶性化合物分离纯化

近年：

皂苷、生物碱…

五、聚酰胺

1、种类：

锦纶6—聚己内酰胺

锦纶66—己二酸和己二胺聚合而成

2、适用范围：

黄酮、酚类、醌类、有机酸等

不可用于鞣质，吸附力特强，成为不可逆物质，但可吸附除去

六、

层析硅胶O

——Si——O——Si——

1、普通硅胶：

骨架表面存在Si—OH。

多，则吸附力强，

Si—OH吸水，则吸附力下降。

105-120。

C可除水，重现活性。

>

200。

C，Si-OH

硅氧烷基（去OH作用）

柱层：

100~160目，200~300目

薄层：

10~40μ，加压可用于柱层

2、闪式硅胶

八十年代初兴起。

粒度：

40~60μ，微球形，粒度均匀，展开速度快，效果理想。

3、键合硅胶

不同的有机基团通过化学反应键合到硅胶表面。

非极性键合硅胶

极性键合硅胶

离子型键合硅胶

a.非极性键合硅胶（反相硅胶）：

硅胶表面键合极性很小的烷基。

e.f十八烷基、辛烷基、苯基烷等

极性大的成分：

吸附能力弱，先下

极性小的成分：

吸附能力强，后下

b.极性键合硅胶：

键合CN、NH3、双OH等

一般作正相层析

c、离子型键合硅胶：

键合各种离子交换基团

酸性基团：

-SO3H、-COOH、-CH2COOH…

碱性基团：

-CH2NH2、-CH2N（CH3）3Cl…

二性基团：

—CH（COOH）-CH2-CH2-NH2…

—（CH2）3O-CH2-CH（OH）-CH2-NH2…

七、离子交换树脂

阳离子交换树脂强酸型（—SO3H）

弱酸型（—COOH）

阴离子交换树脂强碱型—N（CH3）3·

X

—N（CH3）2（C2H4OH）·

弱碱型—NR2

—NHR

—NH2

1、性能

a、交换容量：

取决于可交换基团的多少

毫克当量/g——每g树脂所能交换的离子的毫克当量数

b、交联度：

交联剂在总重量中所占重量百分数

交联度越大，网孔越小

c、溶胀性：

在水中体积增大

在有机溶剂中收缩。

e.gEtOH、Et2O……

d、型变膨胀性：

e.gN+变成H+，树脂体积也变化

2、类型及性质P94

3、离子交换纤维素

阳离子交换纤维素：

酸性基团接在纤维素或葡聚糖凝胶上。

阴离子交换纤维素：

碱性基团接在纤维素或葡聚糖凝胶上。

适用：

提纯蛋白质、核酸、酸性或碱性多糖

类型：

P96

八、凝胶分子筛

葡聚糖凝胶分子筛

琼脂糖凝胶分子筛

聚丙烯酰胺凝胶分子筛

各种离子交换凝胶

葡聚糖和甘油通过醚键相交链的多孔网状结构。

不溶于水、有机溶剂、盐

在碱或弱酸液中稳定，强酸水解

交链度大、网孔小，吸水时膨胀越大

商品G后面数字—吸水量×

10

用于——多糖、肽、蛋白质分离

商品LH-20、LH-60（羟丙基化）——可用于小分子（M〈500）的分离，如黄酮、皂苷等。

2、分类及性能

葡聚糖凝胶的性质

型号吸水量床体积分离范围（分子量）最少溶胀时间（h）

（ml/g）（ml/g）肽、蛋白质多糖室温沸水浴

G-101.0±

0.12~3＜700＜70031

G-151.5±

0.22.5~3.5＜1500＜150031

G-252.5±

0.24~61000~5000100~500062

G-505.0±

0.39~111500~30000500~1000062

G-757.5±

0.512~153000~700001000~50000243

G-10010.0±

1.015~204000~1500001000~100000485

G-15015.0±