固相萃取专场交流会-_精品文档资料下载.pdf

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189-5913-38120591-87535163许维群许维群0591-87535173售后服务电话售后服务电话400-0592051一、样品前处理的必要性一、样品前处理的必要性1二、固相萃取方法的建立二、固相萃取方法的建立2三、固相萃取产品及应用三、固相萃取产品及应用3内容介绍一、样品前处理的必要性一、样品前处理的必要性1二、固相萃取方法的建立二、固相萃取方法的建立2三、固相萃取产品及应用三、固相萃取产品及应用3内容介绍食品安全领域环境领域汽车化工领域生命科学领域浓缩萃取净化浓缩萃取净化样品前处理的必要性经过固相萃取样品前处理的目的样品前处理的目的经过固相萃取净化前后比较净化前后比较将样品（溶剂相，含有被测物及杂质）在正压、负压、离心或重力条件下，通过含有固体吸附剂的萃取产品（包括萃取柱、萃取膜、萃取吸嘴等），使得被测组分（或者杂质相）被固体吸附剂吸附，最终通过具更高吸附强度的溶剂将被测物洗脱出来（除杂方法则只需要收集合并过柱液体），从而得到纯净的目标化合物进行分析检测的一种样品处理方法。

正压负压离心重力何为固相萃取？

何为固相萃取？

固相萃取相对于液-液萃取的优点固相萃取相对于液-液萃取的优点减少溶剂的消耗和废物的产生避免萃取过程中的乳化现象除杂能力强，易得纯净图谱提高检测限，增加灵敏度分析物的回收率高、重现性好操作简单,易于自动化优点优点2015-1-14固相萃取在相关标准中的应用一、样品前处理的必要性一、样品前处理的必要性1二、固相萃取方法的建立二、固相萃取方法的建立2三、固相萃取产品及应用三、固相萃取产品及应用3内容介绍：

夹杂成分：

夹杂成分预处理：

活化小柱过柱洗净将被保留的夹杂物质洗净洗脱回收被精致浓缩的分离目的成分：

目的成分+脱水（水分析）：

目的成分+脱水（水分析）常规固相萃取的方法常规固相萃取的方法12应用：

多用于多残留分析优点:

同时分析多种组分缺点：

属一阶净化，净化效果不如前2种策略多农残中有一定的应用基质分散-QuEChERS方法基质分散-QuEChERS方法2015-1-1413固相萃取流程的建立相关标准文献资料固相萃取小柱的建议操作流程方法优化通过pH值、洗脱强度调整，获得理想回收率和重现性固相萃取方法的建立固相萃取方法的建立固相萃取小柱的选择样品基质目标物质方法验证回收率、重现性验证固相萃取方法的建立一般有机化合物、药品食品添加物、环境污染物质等DNA,RNA萃取、精制蛋白质浓缩、磷酸化肽富集卤素、重金属、稀土类元素固相萃取小柱的选择目标物质的结构样品基质的成分作用机制目标物的官能团对应的作用机制目标物的官能团对应的SPE小柱小柱反相Pharma、PLS-3、RP-1C18、PH正相R-OH-COOHR-NH2NH2、Si、CN阳离子交换R4N+RNH3+CBA、MC-2、WCXSCX、MC-1、MPC阴离子交换RSO3-RCO2-NH2、MA-2、WAXSAX、MA-1、MAX、目标物的性质水溶性样品水、动物组织水性提取液、血样、尿样等有机溶剂样品与水互溶甲醇乙腈丙酮有机溶剂样品与水不互溶正己烷二氯甲烷乙酸乙酯反相反相RP-1、Pharma、PLS-3、C18等离子交换离子交换SAX、SCX、CBA、MPC等正相正相SI、FL、NH2等+水+正己烷离子交换离子交换SAX、SCX、CBA、MPC等样品基质基质和固相的选择事例NH3+NH2NH2CompoundSuggestedmechanismNon-polarPolarIonexchangeMatrixtypeSalinesolution盐分含量多的水试样OliveoilDrinkingwater盐分含量少的水试样油试样离子交换反相模式正相模式固相小柱规格的选择C18固相小柱的最大负载量，通常为填料量的5%2.5mg120uL5mg250uL10mg500uL25mg1.2mL100mg5mL50mg/1mL100mg/1mL200mg/3mL500mg/6mL2g/12mL最大负载量最少洗脱溶剂量*（2倍填料体积）样品对象硅胶基体固相萃取柱聚合物基体固相萃取柱样品对象硅胶基体固相萃取柱聚合物基体固相萃取柱动物源性食品6ml/500mg6ml/1g3ml/60mg6ml/150mg6ml/200mg地表水、饮用水等6ml/1g6ml/200mg生物样品，如血样、尿样等1ml/100mg3ml/200mg1ml/10mg1ml/30mg固相萃取流程的建立相关标准文献资料固相萃取小柱的建议操作流程固相萃取流程的建立-反相固相萃取流程的建立-反相【反相固相】InertSepCHInertSepC2InertSepC18InertSepC18InertSepC8（辛基+Si）（十八烷基+Si）（乙基+Si）（环己基+Si）InertSepPH（苯基+Si）作用机理NH2SO3-分子间引力硅胶母体固相硅胶母体固相保留：

以疏水性相互作用（难溶于水），保留水等极性溶剂中的低极性物质。

洗脱：

用低极性溶剂进行洗脱。

低极性溶剂高极性溶剂水通液速度、pH、有机溶剂含有量通液速度、确认容量状况固相脱水、洗脱液脱水含浸时间和洗脱速度浓缩温度（正好在样品干固前）活化活化、平衡、平衡上上样样清洗清洗脱水脱水洗脱洗脱浓缩浓缩反相固相萃取的操作流程活化/平衡溶剂的置换高极性溶高极性溶剂剂细孔细孔细孔细孔细孔细孔低极性溶剂细孔细孔细孔细孔细孔细孔低极性溶剂低极性溶剂高极性溶高极性溶剂剂甲醇活化平衡水清洗除去干扰物，保留目标物纯水清洗除去极性物质、盐类有机溶剂水清洗増加清洗强度注意目标物不要漏出注意目标物不要漏出杂质杂质目标物目标物洗脱洗脱目标物，不要引入干扰物洗脱液中有机相的比例洗脱液的体积洗脱液中有机相的比例洗脱液的体积注意不要引入保留过强的干扰物注意不要引入保留过强的干扰物氢键力氢键力OONCNCOOHOHOOHOHOHHOHH硅胶母体固相硅胶母体固相保留：

保留：

在在低极性溶剂中低极性溶剂中，通过，通过极性相互作极性相互作用（用（氢键力氢键力、电偶与电偶电偶与电偶相互作用相互作用等等），保留保留目的目的成分成分。

或通过或通过静电引力保留静电引力保留目的目的成分成分。

用用极性溶剂洗脱。

极性溶剂洗脱。

通过通过静电引力静电引力使使保留成分洗脱。

保留成分洗脱。

【极性固相】InertSepCN（氰丙基+Si）InertSep2OH（二醇基+Si）（硅胶）InertSepSIInertSepAL（氧化铝）（硅酸镁）InertSepFLInertSepFL-PR作用机理固相萃取流程的建立-正相固相萃取流程的建立-正相27活化用低极性溶剂进行活化用低极性溶剂进行活化对于固相而言，能够保留极性物质的这些小孔是空的，（活化就是）将这些小孔用低极性的溶剂填满。

像水这样的高极性物质与其他极性物质混合在一起的时候通过这些小孔的时候，再现性就会变差，保留能力下降。

低极性溶剂低极性溶剂水进入的话28上样主要是用低极性溶剂处理后的样品上样洗浄上样上样保持无极性物质极性物质29使用更强极性的溶剂将目标物洗出10丙酮/己烷洗脱30洗脱（分步）多种样品步骤（10乙酸乙酯/己烷）步骤（10丙酮/乙腈）0246810Time（min）02468101214mAU0246810Time（min）02468101214mAU0246810Time（min）02468101214mAU0246810Time（min）02468101214mAU离子交换固相：

选择性高123451234512345123451234512345HPLCconditionHPLCconditionColumn:

InertsilODS-3,5m4.6mmx150mmEluent:

48%CH3CN（0.7%KH2PO4+0.17%SDS,pH4.5）FlowRate:

1.0mL/minCol.Temp:

40Detection:

UV230nmSample:

1.心得静,2.美托洛尔,3.普萘洛尔,4.黄连素,5.UrineUrine（橙色）、STD（紫色）SPESCXSPE固相萃取流程的建立-离子交换固相萃取流程的建立-离子交换尿液中碱性物质的前处理例多虑平32pKapH时，解离度50%pKa2pKa-2碱性化合物解离酸性化合物解离碱性化合物非解离酸性化合物非解离化合物的解离、非解离的平衡点上样：

离子交换基团与目的物同时处于解离的状态，在离子强度低的溶液中，形成离子对。

（pKa,pKb）洗脱：

官能团又或者使目的物质处于非解离的状态，选择性高的抗衡离子进行交换，高离子强度溶剂洗脱。

吸附剂（CBA）目的物质结构COOHpKa=4.8NH3+pKa=10.610.7R975311311-COOH（非解离）-NH4（非解离）-COO-NH3+解离原理静电引力CBACOO-NH3+pH=7保留R保留CBACOOHNH3+pH=3以下洗脱R洗脱HHH方法优化通过pH值溶剂强度等根据标准/推荐流程确认基本流程穿透试验的数据取得洗脱溶剂的数据确认添加低，中，高浓度比较线性添加空白样品进行回收率试验具体研究例子的介绍2015-1-14使用固相评价的对比数据组是什么？

响应值STDBTF2F3W1W2F1F4F5化合物评价是指，如图BT、W、F某一个片段存在问题，又或者小柱对其进行了吸附，导致回收率低使用固相萃取评价方法能够提高成功率反相固相萃取例子2015-1-14ElutionPatternofEmporeDiskPlateC18SD0.0010.0020.0030.0040.0050.0060.0070.0080.0090.00BreakThroughWash1Wash2Elute1Elute2FractionC18SDCatechinC18SDProcyanidinB2C18SDEpicatechin穿透洗浄液洗浄液洗脱第一片段洗脱第二片段固相的研究例C18固相的研究例C18方法验证回收率、重现性验证检出限精密度准确度加标回收率方法精密度如作为执行标准,还需要6家具有资质的单位验证一、样品前处理的必要性一、样品前处理的必要性1二、固相萃取方法的建立二、固相萃取方法的建立2三、固相萃取产品及应用三、固相萃取产品及应用3内容介绍项目名称项目名称SPE小柱小柱乳制品中三聚氰胺含量测定InertSep/WondaSepMPC3ml/60mg猪肉中-受体激动剂的分析InertSep/WondaSepMPC3ml/60mg动物肌肉/水产品/蜂蜜中四环素土霉素金霉素残留分析InertSepPharma3ml/60mg动物源食品中13种磺胺类药物多残留分析InertSep/WondaSepMPC3ml/60mg鸡肉组织中硝基呋喃及其代谢物分析InertSepPharma3cc/60mg水产品中孔雀石绿和结晶紫分析WondaSepMPC3ml/60mg蜂蜜/牛奶/禽肉中青霉素类抗生素分析InertSep/WondaSepC186ml/500mg辣椒产品中苏丹红分析InertsepAl2O3B（碱性氧化铝）6ml/500mg坚果花生等样品中黄曲霉毒素G1G2B1B2分析InertSepVRA专用小柱水果蔬菜中有机氯分析InerstSep/WondaSepFL6ml/1g水果蔬菜中氨基甲酸酯