实验一使用高倍显微镜观察几种细胞讲解Word文档格式.docx

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（4）换成40X物镜观察，注意细胞及细胞内物质结构，画图。

3、动物血液临时装片的制作及观察（除了不用切片，其他类似）

4、动物神经细胞永久装片的观察。

五、考点提示：

1、松针的叶面结构是什么样的？

2、动物细胞的结构是什么样的？

与植物细胞又什么不同？

3、显微镜的物镜倍数愈大，视野的亮度如何？

物体的大小如何？

4、如何调节焦距？

5、如何才能使切片尽量的薄？

切片的厚薄对显微镜下观察的效果有什么影响。

实验二：

检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质

一、实验目的：

尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质，阐明实验原理—颜色反应，识记和区分用于可溶性还原糖、脂肪、蛋白质鉴定的试剂及产生的特定颜色，初步掌握鉴定上述化合物的基本方法，学会描述实验现象，掌握NaOH溶液和CuSO4溶液的使用方法。

二、实验原理：

某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物，产生特定的颜色反应。

1、生物组织中普遍存在的可溶性糖类较多，有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖。

前三种糖的分子内都含有游离的具还原性的半缩醛羟基，因此叫做还原糖；

蔗糖分子内没有，为非还原糖。

实验中所用的斐林试剂，只能鉴定生物组织中可溶性还原糖，而不能鉴定可溶性非还原糖。

．

O可溶性还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖）与斐林试剂发生作用，可生成砖红色的Cu2

沉淀。

如：

2+—O+H葡萄糖酸+CuO↓（砖红色）葡萄糖+2Cu+4OH加热222+CuO，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。

Cu即被还原成2→砖红色沉淀浅蓝色用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液变化过程为：

→棕色。

或淀粉遇碘变蓝色（直链）紫（红）色（支链）、脂肪和类脂（磷脂、糖脂、固醇脂等）统称为脂类。

它是构成人体组织的正常成分，不2溶于水而易溶于酒精、乙醚、氯仿等脂溶剂中。

在化学组成上，脂类属于脂肪酸的酯或与这些酯有关的物质。

脂类的主要功能是氧化供能。

脂肪主要存积于脂肪组织中，并以油滴状的微粒存在脂肪细胞浆内。

在病理检验中，脂类染色法最常用以证明脂肪变性，脂肪栓子以及肿瘤的鉴别。

脂类染等。

脂色使用最广泛的染料是苏丹染料，最常用的有苏丹Ⅲ，苏丹Ⅳ，苏丹黑及油红O肪被染色，实际上是苏丹染料被脂肪溶解吸附而呈现染料的颜色。

经研究认为组织中脂℃质在液态或半液态时，对苏丹染料着色效果最好。

根据这一原理，适当提高温度（37-60℃）对组织切片染色效果是有好处的。

脂类染色，用冰冻或石蜡切片，以水溶性封固剂封固，如甘油、明胶和阿拉伯糖胶等。

脂肪可以被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色或橙红色（或被苏丹Ⅳ染液染成红色），胆脂素呈淡红色，脂肪酸不着色，细胞核呈蓝色。

、蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应。

（蛋白质分子中含有很多肽键，在碱性32+CuNaOH溶液中能与双缩脲试剂中的作用，产生紫色反应。

）

三、实验材料：

1、做可溶性还原性糖鉴定实验，应选含糖高，颜色为白色的植物组织，如苹果、梨。

（因为组织的颜色较浅，易于观察。

）经试验比较，颜色反应的明显程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。

2、做脂肪的鉴定实验。

应选富含脂肪的种子，以花生种子为最好，实验前一般要浸泡3~4小时（也可用蓖麻种子）。

3、做蛋白质的鉴定实验，可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清。

4、淀粉的鉴定：

马铃薯匀浆。

四、实验用具：

双面刀片、试管（最好用刻度试管）、试管夹、试管架、大小烧杯、小量筒、滴管、酒精灯、三脚架、石棉网、火柴、载玻片、盖玻片、毛笔、吸水纸、显微镜

五、实验试剂：

1．斐林试剂（包括甲液：

质量浓度为0.1g/mLNaOH溶液和乙液：

质量浓度为溶液）

2．苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液

3．双缩脲试剂（包括A液：

质量浓度为0.1g/mLNaOH溶液和B液：

质量浓度为CuSO溶液）44．体积分数为50%的酒精溶液

5．碘液

6．蒸馏水

六、方法步骤：

一、可溶性糖的鉴定

操作方法

注意问题

1.制备组织样液。

（去皮、切块、研磨、过滤）

苹果或梨组织液必须临时制备。

因苹果多酚氧化酶含量高，组织液很易被氧化成褐色，将产生的颜色掩盖。

2.取1支试管，向试管内注组织样液。

2mL入

新制的向试管内注入3.1mL斐林试剂，振荡。

应将组成斐林试剂的甲液、乙液才将甲、使用前储存，配制、分别

斐林试剂很不稳定，液混合保存时，生成的

0.05g/mLCuS0.01g/mL甲Cu

乙液等量混匀成斐林试剂；

乙液分别加入苹果切勿将甲液、组织样液中进行检测。

OH）（成黑色乙液分别加入时可能会甲、与组织样液发生反应，无CuOH

0C4.试管放在盛有50-65温水的大烧杯中，加热约2分钟，观察到溶液颜色：

浅蓝砖红色（沉色→棕色→淀）

最好用试管夹夹住试管上部，使试管底部不触及烧杯底部，试管口不朝向实验者。

也可用酒精灯对试管直接加热。

防止试管内的溶液冲出试管，造成烫伤；

缩短实验时间。

二、脂肪的鉴定

花生种子浸泡、去皮、切下一些子叶薄片，将薄片放在载玻片的水滴中，用吸水纸吸去装片中的水。

干种子要浸泡3~4小时，新花生的浸泡时间可缩短。

因为浸泡时间短，不易切片；

浸泡时间过长，组织较软，切片不易成形。

切片要尽可能薄些，便于观察。

在子叶薄片上滴2~3滴苏丹Ⅲ或苏1分钟。

丹Ⅳ染液，染色

染色时间不宜过长。

用吸水纸吸去薄片周围染液，用50%酒精洗去浮色，吸去酒精。

酒精用于洗去浮色，不洗去浮色，会影响对橘黄色脂肪滴的观察。

同时，酒精是脂溶性溶剂，可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴。

用吸水纸吸去薄片周围酒精，滴上滴蒸馏水，盖上盖玻片。

1~2

滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡。

低倍镜下找到花生子叶薄片的最橘黄色薄处，可看到细胞中有染成圆形小颗粒。

或红色

装片不宜久放。

时间一长，油滴会溶解在乙醇中。

三、蛋白质的鉴定

操作方法注意问题

黄豆浸泡制备组织样液。

磨成浆，也可购新鲜豆浆以（浸泡、去皮研磨、过滤。

）节约实验时间。

鉴定。

加样液约2ml先加储BA液和液也要分开配制，NaOH于试管白质反应提供一个碱性的环B液后加存。

鉴定时，中，加入双缩脲试剂A摇匀；

先加A液再加入双缩脲试剂B3~4B、液。

境。

A会导致滴，摇匀，溶液变紫色。

沉淀，而失效。

。

溶液不能多加CuSO4否则CuSO应的真实颜色。

蛋清要先稀释。

如果稀释不够，在实验中蛋可用蛋清代替豆浆。

清粘在试管壁，与双缩脲试剂反应后会粘固在试管内壁．

下分970~Cu和水生成天，容易2与溶液，C液混装或同时加入2Cu（OH）变C的蓝色会遮盖

上，使反应不容易彻底，并且试管也不易洗干净。

附：

淀粉的检测和观察待测组织样液，2ml用试管取滴碘液，观2向试管内滴加察颜色变化。

碘液不要滴太多

以免影响颜色观察

七、考点提示：

葡萄糖、果糖、麦芽糖都是还原性糖；

淀粉、答：

1、常见还原性糖与非还原性糖有哪些？

蔗糖、纤维素都是非还原性糖。

梨、苹果、含糖量较高、颜色为白色或近于白色，如：

2、还原性糖植物组织取材条件？

答：

白色甘蓝叶、白萝卜等。

加石英砂是为了使研磨更充答：

、研磨中为何要加石英砂？

不加石英砂对实验有何影响？

3分。

不加石英砂会使组织样液中还原性糖减少，使鉴定时溶液颜色变化不明显。

产答：

混合后使用；

4、斐林试剂甲、乙两液的使用方法？

混合的目的？

为何要现混现用？

生氢氧化铜；

氢氧化铜不稳定。

棕色砖红色。

5、还原性糖中加入斐林试剂后，溶液颜色变化的顺序为？

答：

浅蓝色

只有很薄的切片，才能透光，而用于显微镜的观察。

6、花生种子切片为何要薄？

、转动细准焦螺旋时，若花生切片的细胞总有一部分清晰，另一部分模糊，其原因一般是7答：

切片的厚薄不均匀。

什么？

洗去浮色。

8、脂肪鉴定中乙醇作用？

9、双缩脲试剂A、B两液是否混合后用？

先加A液的目的怎样通过对比看颜色变化？

不能混合；

先加A液的目的是使溶液呈碱性；

先留出一些大豆组织样液做对比。

实验三：

观察DNA和RNA在细胞中的分布

一、实验原理：

1、真核细胞的DNA主要分布在细胞核内，RNA主要分布在细胞质中。

2、甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿对DNA亲和力强，使DNA显现出绿色，而吡罗红对RNA的亲和力强，使RNA呈现出红色。

用甲基绿、吡罗红的混合染色剂将细胞染色，可同时显示DNA和RNA在细胞中的分布。

3、盐酸的作用

①盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂的跨膜运输；

②盐酸使染色体中的DNA与蛋白质分离，便于DNA与染色剂的结合

人的口腔上皮细胞、洋葱鳞片叶表皮细胞三、实验用具：

大小烧杯、温度计、滴管、消毒牙签、载玻片、盖玻片、铁架台、

石棉网、火柴、酒精灯、吸水纸、显微镜四、方法步骤：

1、取材

①滴：

在洁净的载玻片上滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液；

②刮：

用消毒牙签在口腔内侧壁上轻轻地刮几下；

③涂：

将牙签上的碎屑涂抹在载玻片的生理盐水中；

④烘：

将涂有口腔上皮细胞的载玻片在酒精灯的火焰上烘干。

2、水解

的盐酸的小烧杯中，进行材料的水解；

8%质量分数为30ml解：

将烘干的载玻片放入装有①．

②保：

将小烧杯放入装有30℃温水的大烧杯中保温5分钟。

3、冲洗涂片

①冲：

用缓缓的蒸馏水冲洗载玻片10秒钟；

②吸：

用吸水纸吸去载玻片上的水分。

4、染色

①染：

用2滴吡罗红甲基绿混合染色剂滴在载玻片上，染色5分钟；

吸去多余染色剂；

③盖：

盖上盖玻片。

5、观察

①低：

在低倍物镜下，寻找染色均匀，色泽浅的区域，移至视野中央，将物像调节清晰；

②高：

转到高倍物镜，调节细准焦螺旋，观察细胞核和细胞质的染色情况。

1、取口腔上皮细胞之前，应先漱口，以避免装片中出现太多的杂质；

2、取洋葱表皮细胞时，尽量避免材料上带有叶肉组织细胞；

3、冲洗载玻片时水的流速要尽量慢，切忌直接用水龙头冲洗；

4、用酒精灯烘烤载玻片时，不要只集中于材料处，而应将载玻片在火焰上来回移动，使载玻片均匀受热，以