消毒剂消毒效力及有效期验证方案Word文档格式.docx
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序号
名称
消毒对象
消毒方法
有效期
1
75%乙醇
用于设备表面、器具与手消毒。
采用擦拭或喷洒方式
密闭保存D级:
30天
2
0、1%新洁尔灭溶液
用于地面、墙面、器具、工作服、清洁布、拖布与洁净鞋的消毒
采用擦拭或浸泡方式
3
0、2%的新洁尔灭溶液
用于水池与地漏的消毒
用于液封
4
0、5%醋酸氯己定溶液
5
0、1%醋酸氯己定溶液
用于工作服、清洁布、拖布与洁净鞋的消毒
采用浸泡方式
2.2.
为了确认消毒剂的消毒效力,通过实验室考察部分与现场考察部分分别进行验证。
其中,用定量悬浮试验法与表面实验法进行实验室考察试验部分。
洁净区设施表面材质基本都就是不锈钢与玻璃两种,故表面试验法选用不锈钢载片与玻璃裁片模拟洁净区设施表面进行验证试验。
两种试验方法作用的消毒剂见表。
试验方法
消毒剂
表面实验法
定量悬浮试验法
0、3%的新洁尔灭溶液
6
现场考察试验部分选择车间（D级）的配液间、灌装间设备表面消毒前与消毒后分别进行取样,测定其微生物数量。
3.
确认前准备
3.1.
验证用试剂与材料
3.1.1.
菌种
序列号
金黄色葡萄球菌
[CMCC（B）26003]
大肠埃希菌
[CMCC（B）44102]
枯草杆菌芽孢
[CMCC（B）63501]
白色念珠菌
[CMCC（F）98001]
3.1.2.
培养基
备注
营养琼脂培养基
培养基经121℃,20min灭菌备用
营养肉汤培养基
胰酪大豆胨琼脂培养基
胰酪大豆胨培养基
大豆酪蛋白琼脂培养基接触碟（编号:
BZW12085）
规格:
:
φ55mm,取样面积为25m2
玫瑰红钠琼脂培养接触碟
（编号:
BZW15129）
3.1.3.
消毒剂名称
中与剂
1%卵磷脂+0、1%聚山梨酯80
中与剂经121℃,20min灭菌备用。
消毒液拟定选用的中与剂
3.1.4.
稀释液
0、9%无菌氯化钠溶液（NS）
3.1.5.
器具及设备
无菌移液管
锥形瓶
无菌试管
恒温水浴锅
恒温恒湿培养箱
3.2.
验证用试剂与材料记录见附录1。
4.
消毒剂消毒效力试验
4.1.
中与剂鉴定试验
4.1.1.
试验目的
通过该试验,确认所用的中与剂对对应的消毒剂有良好的中与作用,对试验用菌剂及其恢复期培养示范有害或不良影响。
4.1.2.
菌液的制备及计数
4.1.2.1.
金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌工作菌液的制备
接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中,30～35℃培养18～24小时。
取上述培养物用0、9％无菌氯化钠溶液做10倍系列稀释成1×
108~5×
108CFU/ml的工作菌液（如肉汤培养物的浓度已为1×
108CFU/ml,可不再用0、9％无菌氯化钠溶液稀释）。
计数时,将1×
108CFU/ml的工作菌液10倍系列稀释成含50～100CFU/ml菌液,并同时采用营养琼脂培养基30～35℃培养2天计数。
计算该稀释级的平均菌落数,将计数结果换算成每毫升浓菌液的菌落数。
4.1.2.2.
白色念珠菌工作菌液的制备
接种白色念珠菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中,23～28℃培养24～48小时。
108CFU/ml的工作菌液10倍系列稀释成含50～100CFU/ml菌液,并同时采用改良马丁琼脂培养基23～28℃培养3天计数。
4.1.3.
鉴定试验操作
4.1.3.1.
配制75%乙醇、0、1%新洁尔灭溶液、0、2%新洁尔灭溶液、40mg/L的二氧化氯、60mg/L的二氧化氯,具体操作执行《清洁剂与消毒剂管理》。
将配置好的消毒剂置20℃±
1℃恒温水浴锅中备用。
4.1.3.2.
分组操作
试验分组及稀释操作方法简表
组号
混合液A
混匀作用
10min
混合液B
取混合液B或混合液B的稀释级溶液0、5ml平板计数（2皿/组）
取0、5ml工作菌液加入下列溶液中
取混合液A0、5ml加入下列溶液
消毒剂4、5ml
稀释液4、5ml
混合液B、10-1
中与剂4、5ml
10-2、10-3
中与产物4、5ml（消毒液与中与剂比例为1:
1）
10-2、0-3
稀释液与中与剂各1、0ml注入无菌平皿中,各制备2皿。
具体操作
●第1组
观察消毒液对试验菌有无杀灭或抑制能力。
操作:
取消毒剂4、5ml+工作菌液0、5ml,混匀作用10min后,取混合液0、5ml+稀释液4、5ml,混匀作用10min,取0、5ml注皿,平行制备2皿。
金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌用营养琼脂培养基,倒置30～35℃培养3天计数;
白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基,倒置23～28℃培养5天计数计数。
●第2组
观察残留消毒剂被中与后受到消毒剂作用后的试验菌就是否恢复生长。
取消毒剂4、5ml+工作菌液0、5ml,混匀作用10min后,取混合液0、5ml+中与剂4、5ml,混匀作用10min,用稀释液稀释成10-1。
分别取未稀释溶液（混合液0、5mll+中与剂4、5ml的混合液）及10-10、5ml注皿,各平行制备2皿。
金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌用营养琼脂培养基,倒置于30～35℃培养3天计数;
白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基,倒置于23～28℃培养5天计数。
●第3组
观察中与剂就是否有抑菌性
取中与剂4、5ml+工作菌液0、5ml,混匀作用10min,取混合液0、5mll+稀释液4、5ml,混匀作用10min后,用稀释液进行10倍系列稀释成10-2、10-3。
取相应稀释级0、5ml注皿,各稀释级平行制备2皿。
白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基,倒置30～35℃培养3天计数计数。
●第4组
观察中与产物,或未被完全中与残留消毒剂对试验菌的生长繁殖就是否有影响。
取消毒剂与中与剂1:
1的混合液4、5ml+工作菌液0、5ml,混匀作用10min,取混合液0、5mll+稀释液4、5ml,混匀作用10min后,用稀释液进行10倍系列稀释成10-2、10-3。
白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基,倒置30～35℃培养3天计。
●第5组
作菌落数对照用
取稀释液4、5ml+工作菌液0、5ml,混匀作用10min,取混合液0、5mll+稀释液4、5ml,混匀作用10min后,用稀释液进行10倍系列稀释成10-2、10-3。
白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基,倒置30～35℃培养3天计数。
●第6组
作为阴性对照用
分别取稀释液与中与剂各1、0ml注入无菌平皿中,各制备2皿。
4.1.3.3.
结果判断
试验结果应符合下列全部条件,判断所选中与剂合格。
●第1组无菌生长,或仅有少数试验菌菌落生长。
●第2组菌落数比第1组菌落数多,但比第3、4、5组菌落数少,且符合下表要求
第1组平板平均菌落数
第2组平板平均菌落数
〉5
x
〉（x+5）
y
〉（y+0、5y）
●第3、4、5组有相似菌落数生长,其每组间菌落数误差率不超过15%。
计算公式如下:
（3组间菌落平均数-各组菌落平均数）的绝对值之与
误差率＝————————————————————————×
100％
3×
3组间菌落平均数
●第6组无菌生长。
否则,说明试剂有污染,应重新进行试验。
4.1.4.
中与剂鉴定试验记录见附录2。
4.2.
定量悬浮试验
4.2.1.
由于0、2%的新洁尔灭溶液、0、1%新洁尔灭溶液、60mg/L二氧化氯溶液、0、5%醋酸氯己定溶液、0、1%醋酸氯己定溶液就是通过浸泡或液封消毒,通过定量悬浮试验,确定其消毒效力就是否符合要求。
4.2.2.
试验操作
4.2.2.1.
配制0、2%的新洁尔灭溶液、0、1%新洁尔灭溶液、60mg/L二氧化氯溶液、0、5%醋酸氯己定溶液、0、1%醋酸氯己定溶液,操作执行《清洁剂与消毒剂管理》。
4.2.2.2.
由于0、2%的新洁尔灭溶液、0、1%新洁尔灭溶液中低效消毒剂,且不能杀灭芽孢,故定量悬浮试验用菌为金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌。
0、5%醋酸氯己定溶液、0、1%醋酸氯己定溶液为高效消毒剂,能杀灭芽孢,故定量悬浮试验用菌枯金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、枯草芽孢杆菌。
4.2.2.3.
将菌液制备成1×
108CFU/ml的工作
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