公开课课题微生物的实验室培养PPT推荐.ppt

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分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加氮源不加氮源的无氮培养基的无氮培养基:

分离固氮菌分离固氮菌不加含碳不加含碳有机物的无碳培养基有机物的无碳培养基:

分离自养型微生物分离自养型微生物加入四环素、卡那霉素等抗生素的培养基加入四环素、卡那霉素等抗生素的培养基:

分离导入了目的基因的受体细胞分离导入了目的基因的受体细胞可抑制细菌、放线可抑制细菌、放线菌细胞壁主要成分菌细胞壁主要成分肽聚糖的合成肽聚糖的合成其细胞壁是由纤其细胞壁是由纤维素、几丁质、维素、几丁质、葡聚糖组成葡聚糖组成菌落菌落:

单个或少数细单个或少数细菌在固体培养菌在固体培养基上大量繁殖基上大量繁殖时，就会形成时，就会形成一个肉眼可见一个肉眼可见的，具有一定的，具有一定形态结构的子形态结构的子细胞群体，叫细胞群体，叫菌落菌落。

菌落是鉴定菌菌落是鉴定菌种的重要依据。

种的重要依据。

（二）无菌技术

（二）无菌技术1、无无菌菌技技术术围围绕绕着着如如何何避避免免杂杂菌菌的的污污染染展展开开，主主要要包包括以下四个方面括以下四个方面

（1）对对实实验验操操作作的的、操操作作者者的的，进进行行清洁和清洁和；

（2）将将用用于于微微生生物物培培养养的的器器皿皿、和和等等进进行行；

（3）为为避避免免周周围围环环境境中中微微生生物物的的污污染染，实实验验操操作作应应在在附近进行；

附近进行；

（4）实实验验操操作作时时应应避避免免已已经经灭灭菌菌处处理理的的材材料料用用具具与与相接触。

相接触。

空间空间衣着和手衣着和手消毒消毒接种用具接种用具培养基培养基灭菌灭菌酒精灯火焰酒精灯火焰2、消毒和灭菌、消毒和灭菌

（1）消消毒毒：

消消毒毒是是指指使使用用方方法法仅仅杀杀死死物物体体表表面面或或内内部部一一部部分分的的微微生生物物，（包包括括；

不不包包括括）芽芽孢孢和和孢孢子子，常常用用的的方方法有法有消毒法、消毒法、消毒法、消毒法、消消毒法。

毒法。

（2）灭灭菌菌：

灭灭菌菌是是指指使使用用杀杀死死物物体体内外内外，（包包括括，不不包包括括）芽芽孢孢和和孢孢子子，常用的方法有常用的方法有灭菌、灭菌、灭菌和灭菌和灭菌。

灭菌。

较为温和的物理或化学较为温和的物理或化学对人体有害对人体有害不包括不包括煮沸煮沸巴氏巴氏化学药剂化学药剂强烈的理化因素强烈的理化因素所有的微生物所有的微生物包括包括灼烧灼烧干热干热高压蒸汽高压蒸汽思思维维激激活活用用酒酒精精擦擦拭拭实实验验者者手手臂臂属属消消毒毒还还是是灭灭菌菌？

70%与与95%的酒精，哪一种效果更好？

为什么？

的酒精，哪一种效果更好？

提提示示酒酒精精擦擦拭拭属属化化学学消消毒毒，酒酒精精消消毒毒时时，70%的的酒酒精精杀杀菌菌效效果果最最好好。

原原因因是是：

浓浓度度过过高高，使使菌菌体体表表面面蛋蛋白白质质凝凝固固成成一一层层保保护护膜膜，乙醇分子不能渗入其中；

浓度过低，杀菌力减弱。

乙醇分子不能渗入其中；

消消毒和灭菌的区别毒和灭菌的区别条件条件结果结果常用的方法常用的方法消毒消毒较为温和的物较为温和的物理或化学方法理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物分对人体有害的微生物（不不包括芽孢和孢子包括芽孢和孢子）煮沸消毒法、巴氏消毒法、煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法紫外线或化学药物消毒法灭菌灭菌强烈的理化因强烈的理化因素素杀死物体内外所有的微生物，杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子包括芽孢和孢子灼烧灭菌、干热灭菌、高灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌压蒸汽灭菌消毒的方法：

消毒的方法：

11、煮沸消毒法：

、煮沸消毒法：

100100煮沸煮沸556min6min22、巴氏消毒法：

、巴氏消毒法：

70707575下煮下煮30min30min或或8080下煮下煮15min15min33、用体积分数为、用体积分数为50%70%70%酒精溶液等进行皮肤消毒酒精溶液等进行皮肤消毒44、氯气消毒水源、氯气消毒水源55、紫外线消毒、紫外线消毒灭菌的方法：

灭菌的方法：

11、灼烧灭菌、灼烧灭菌22、干热灭菌：

、干热灭菌：

160160170170下加热下加热112h2h33、高压蒸气灭菌：

、高压蒸气灭菌：

100kPa100kPa、121121下维持下维持151530min30min3.3.常用的消毒与灭菌的方法：

常用的消毒与灭菌的方法：

是指用紫外线（能量）照射杀是指用紫外线（能量）照射杀灭微生物的方法，紫外线不仅灭微生物的方法，紫外线不仅能使核酸、蛋白质变性，而且能使核酸、蛋白质变性，而且能使空气中氧气产生微量臭氧，能使空气中氧气产生微量臭氧，从而达到共同杀菌作用。

从而达到共同杀菌作用。

11、灼烧灭菌：

、灼烧灭菌：

22、干热灭菌：

160160170170下加热下加热112h2h。

33、高压蒸气灭菌：

100kPa100kPa、121121条件下维持条件下维持151530min30min。

答：

无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。

（答：

（1）、（）、

（2）需要灭菌；

（）需要灭菌；

（3）需要消毒。

）需要消毒。

1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？

微生物污染外，还有什么目的？

2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。

请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。

如果需要，请选择合适的方法。

（1）培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿

（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手实验操作者的双手思考：

思考：

三、实验操作三、实验操作

（一）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）

（一）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）1.1.计算计算2.2.称量称量3.3.溶化溶化4.4.灭菌灭菌5.5.倒平板倒平板操作步骤：

操作步骤：

配方：

1000mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成培养基组分培养基组分提供的主要营养提供的主要营养牛肉膏牛肉膏5g碳源、氮源、磷酸盐和维生素碳源、氮源、磷酸盐和维生素蛋白胨蛋白胨10g碳源、氮源和维生素碳源、氮源和维生素NaCl5g无机盐无机盐H2O定容至定容至1000mL氢元素、氧元素氢元素、氧元素倒平板技倒平板技倒平板技倒平板技术术术术1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到5050左右时，才能左右时，才能用来倒平板。

你用什么办法来估计培养基的温度？

用来倒平板。

可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。

平板了。

2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？

为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？

通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。

讨论：

3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？

平板冷凝后，为什么要将平板倒置？

4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？

微生物吗？

平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后答：

平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。

以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。

空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的答：

空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。

微生物。

（二）纯化大肠杆菌

（二）纯化大肠杆菌接种方法有：

接种方法有：

平板划线法和稀释涂布平板法平板划线法和稀释涂布平板法平板划线法平板划线法:

通过接种环在琼脂固体培养基表面连通过接种环在琼脂固体培养基表面连续续划划线的操作线的操作,将聚集的菌将聚集的菌种种逐步稀释分散到培养基逐步稀释分散到培养基的表面的表面.在数次在数次划划线后线后,可以分离到由一个细胞繁殖而可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落这就是菌落.平板划线操作平板划线操作1.将接种环放在火焰上将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红灼烧，直到接种环烧红2.在火焰旁冷却接种环、在火焰旁冷却接种环、并打开棉塞并打开棉塞3.将试管口通过火焰。

将试管口通过火焰。

5.将试管口通过火焰，并塞将试管口通过火焰，并塞上棉花。

上棉花。

4.将已冷却的接种环伸入菌将已冷却的接种环伸入菌液中，沾取一环菌液。

液中，沾取一环菌液。

不能使用脱脂棉，不能使用脱脂棉，否则容易吸水，否则容易吸水，造成污染。

造成污染。

一旦划破，会造成划线不均匀，难以一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；

达到分离单菌落的目的；

二是存留在划破处的单个细胞无法形二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。

长，会形成一个条状的菌落。

6.左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。

注意不要划破培养基。

盖。

8.将平板倒将平板倒置，放入置，放入培养箱中培养箱中培养。

培养。

7.灼烧接种环，待灼烧接种环，待其冷却后，从第其冷却后，从第一区域划线的末一区域划线的末端开始往第二区端开始往第二区域内划线。

重复域内划