分析化学-高效液相色谱法PPT格式课件下载.ppt

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紫外检测器最小检测限可达测器最小检测限可达101099gg，而荧光检测器最，而荧光检测器最小检测限可达小检测限可达10101212gg。

仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章高效液相色谱法高效液相色谱法与气相色谱法相比与气相色谱法相比u不受试样的挥发性和热稳定性的限制，应不受试样的挥发性和热稳定性的限制，应用范围广；

用范围广；

u可选用各种溶剂作为流动相，对分离的选可选用各种溶剂作为流动相，对分离的选择性有很大作用，选择性高；

择性有很大作用，选择性高；

u一般在室温条件下进行分离，不需要高柱一般在室温条件下进行分离，不需要高柱温。

温。

仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章高效液相色谱法高效液相色谱法第一节第一节高效液相色谱法的主要类型高效液相色谱法的主要类型和原理和原理一、主要类型主要类型四类基本类型色谱法四类基本类型色谱法分配色谱法（分配色谱法（partitionchromatographypartitionchromatography）吸附色谱法（吸附色谱法（adsorptionadsorptionchromatographychromatography）离子交换色谱法（离子交换色谱法（IECIEC）空间排阻色谱法（空间排阻色谱法（SECSEC）仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章高效液相色谱法高效液相色谱法第一节第一节高效液相色谱法的主要类型和高效液相色谱法的主要类型和原理原理一、一、主要类型主要类型四类基本类型色谱法四类基本类型色谱法分配色谱法（分配色谱法（partitionchromatographypartitionchromatography）吸附色谱法（吸附色谱法（adsorptionchromatographyadsorptionchromatography）离子交换色谱法（离子交换色谱法（IECIEC）空间排阻色谱法（空间排阻色谱法（SECSEC）化学键合相色谱法化学键合相色谱法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章高效液相色谱法高效液相色谱法其他色谱类型其他色谱类型u亲合色谱法亲合色谱法（affinitychromatographyaffinitychromatography；

ACAC）u手性色谱法手性色谱法（chiralchromatographychiralchromatography；

CCCC）u胶束色谱法胶束色谱法（micellarchromatographymicellarchromatography；

MCMC）u电色谱法电色谱法（electrochromatographyelectrochromatography；

ECEC）仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章高效液相色谱法高效液相色谱法二、化学键合相色谱法u以化学键合相为固定相的色谱法，简称键合以化学键合相为固定相的色谱法，简称键合相色谱法相色谱法（bondedphasechromatography（bondedphasechromatography；

BPC）BPC）u化学键合相：

采用化学反应的方法将官能团化学键合相：

采用化学反应的方法将官能团键合在载体表面所形成的固定相键合在载体表面所形成的固定相仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章高效液相色谱法高效液相色谱法优点：

优点：

u固定相的均一性和稳定性好，在使用过程固定相的均一性和稳定性好，在使用过程中不易流失，使用周期长；

中不易流失，使用周期长；

u柱效高；

重现性好；

柱效高；

u能使用的流动相和键合相的种类多，分离能使用的流动相和键合相的种类多，分离的选择性高的选择性高正相（正相（normalphasenormalphase，NPNP）和反相）和反相（reversedphasereversedphase，RPRP）键合相色谱法）键合相色谱法：

根据化学键合相与流动相极性的相对强弱根据化学键合相与流动相极性的相对强弱仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章高效液相色谱法高效液相色谱法

（一）正相键合相色谱法

（一）正相键合相色谱法u固定相：

固定相：

极性键合相极性键合相如氰基（如氰基（CNCN）、氨基（）、氨基（NHNH22）或二羟基）或二羟基键合硅胶。

（经典：

水饱和的硅胶）键合硅胶。

水饱和的硅胶）u流动相：

流动相：

非极性或弱极性溶剂加极性调整剂非极性或弱极性溶剂加极性调整剂如烷烃加醇类。

（与水不混溶的溶剂）如烷烃加醇类。

（与水不混溶的溶剂）u适用范围：

适用范围：

溶于有机溶剂的极性至中等极性溶于有机溶剂的极性至中等极性的分子型化合物的分子型化合物如一些在硅胶柱上分离的物质如一些在硅胶柱上分离的物质仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章高效液相色谱法高效液相色谱法正相键合相色谱法正相键合相色谱法u分离机制？

分离机制？

分配：

把有机键合层作为一个液膜看待，溶质在两相分配：

把有机键合层作为一个液膜看待，溶质在两相的溶解的溶解吸附：

溶质与键合极性基团间的诱导、氢键和定向作吸附：

溶质与键合极性基团间的诱导、氢键和定向作用用u分离选择性分离选择性：

极性强的组分极性强的组分kk大，后洗脱出柱。

大，后洗脱出柱。

流动相的极性增强，洗脱能力增加，使组分流动相的极性增强，洗脱能力增加，使组分kk减小，减小，ttRR减小。

减小。

仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章高效液相色谱法高效液相色谱法

（二）反相键合相色谱法

（二）反相键合相色谱法u固定相固定相：

非极性键合相：

非极性键合相如十八烷基硅烷（如十八烷基硅烷（CC1818，ODSODS）、辛烷基（）、辛烷基（CC88）键）键合硅胶合硅胶u流动相流动相：

水水为基础溶剂，加入一定量与水混溶为基础溶剂，加入一定量与水混溶的极性调整剂的极性调整剂常用甲醇水、乙腈水等常用甲醇水、乙腈水等应用：

最广应用：

最广非极性至中等极性的组分，非极性至中等极性的组分，（还有有机酸、碱及盐等）（还有有机酸、碱及盐等）仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章高效液相色谱法高效液相色谱法保留机制保留机制疏溶剂疏溶剂（solvophobicsolvophobictheorytheory）溶质的保留主要是溶质溶质的保留主要是溶质分子与极性溶剂分子间分子与极性溶剂分子间的的排斥力排斥力，促使溶质分促使溶质分子与键合相的烃基发生子与键合相的烃基发生疏水缔合疏水缔合。

不是溶质分子与键合相不是溶质分子与键合相间的色散力。

间的色散力。

仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章高效液相色谱法高效液相色谱法反相键合相色谱法反相键合相色谱法u保留行为的主要影响因素保留行为的主要影响因素11、溶质的分子结构（极性）、溶质的分子结构（极性）极性越弱，疏水性越强，极性越弱，疏水性越强，kk越大，越大，ttRR也越大也越大。

同系物碳数越多，极性越弱，同系物碳数越多，极性越弱，kk越大；

越大；

引入极性取代基，降低疏水性，引入极性取代基，降低疏水性，kk值变小。

值变小。

仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章高效液相色谱法高效液相色谱法22、固定相、固定相键合烷基的疏水性随键合烷基的疏水性随碳链的延长碳链的延长而增而增加，溶质的加，溶质的kk也增大。

也增大。

硅胶表面硅胶表面键合烷基的浓度越大键合烷基的浓度越大，则溶则溶质的质的kk越大越大。

反相键合相色谱法反相键合相色谱法u保留行为的主要影响因素保留行为的主要影响因素仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章高效液相色谱法高效液相色谱法反相键合相色谱法反相键合相色谱法u保留行为的主要影响因素保留行为的主要影响因素33、流动相、流动相极性越强，洗脱能力越弱，使溶质的极性越强，洗脱能力越弱，使溶质的kk越大越大溶剂种类溶剂种类：

水为弱溶剂，醇为强溶剂：

水为弱溶剂，醇为强溶剂溶剂比例溶剂比例：

水的比例增加，使：

水的比例增加，使kk增大增大中性盐的加入中性盐的加入：

使中性溶质的：

使中性溶质的kk增大增大pHpH：

影响弱酸、弱减的离解：

影响弱酸、弱减的离解流动相的流动相的pHpH降低，弱酸降低，弱酸kk增大，增大，ttRR增大；

增大；

弱碱弱碱kk变小。

变小。

仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章高效液相色谱法高效液相色谱法u离子抑制色谱法（离子抑制色谱法（ionsuppressionionsuppressionchromatographychromatography；

ISCISC）u用少量弱酸、弱碱或缓冲溶液，调节流动相的用少量弱酸、弱碱或缓冲溶液，调节流动相的pHpH，抑制有机弱酸、弱碱的离解，增加疏水缔，抑制有机弱酸、弱碱的离解，增加疏水缔合作用，使合作用，使kk变大。

变大。

u适用于适用于3p3pKKa7a7的弱酸、的弱酸、7p7pKKa8a8的弱碱的弱碱反相键合相色谱法反相键合相色谱法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章高效液相色谱法高效液相色谱法把离子对试剂加入到含水流动相中，组把离子对试剂加入到含水流动相中，组分离子在流动相中与离子对试剂的反离分离子在流动相中与离子对试剂的反离子（子（counterioncounterion）生成）生成中性离子对中性离子对，增加溶质与非极性固定相的作用，使增加溶质与非极性固定相的作用，使kk增加，改善分离效果。

增加，改善分离效果。

（三）反相离子对色谱法（三）反相离子对色谱法pairedionpairedionchromatographychromatography；

PICPICionpairchromatographyionpairchromatography；

IPCIPC仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章高效液相色谱法高效液相色谱法反相离子对色谱法反相离子对色谱法离子对模型离子对模型33+（）+3s3（+固定相固定相+（）+B）+B+H+BHRSONaRSO+Na+BHRSORSO）BH离子对mB+ABAmA（s流动相流动相通式通式仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章高效液相色谱法高效液相色谱法影响容量因子的因素影响容量因子的因素离子对试剂的种类和浓度离子对试剂的种类和浓度：

碳链长度增加，：

碳链长度增加，溶质的溶质的kk增大；

在一定范围内试剂的浓度升高，增大；

在一定范围内试剂的浓度升高，溶质的溶质的kk增大增大流动相的流动相的pHpH：

有利于组分和离子对试剂离子：

有利于组分和离子对试剂离子化时（离子对的形成），组分的化时（离子对的形成），组分的kk