荧光测试文档格式.doc
《荧光测试文档格式.doc》由会员分享,可在线阅读,更多相关《荧光测试文档格式.doc(4页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
是指发光的某一谱线或谱带的强度随激发光波长(或频率)变化的曲线。
横坐标为激发光波长,纵坐标为发光相对强度。
激发光谱反映不同波长的光激发材料产生发光的效果。
即表示发光的某一谱线或谱带可以被什么波长的光激发、激发的本领是高还是低;
也表示用不同波长的光激发材料时,使材料发出某一波长光的效率。
3.余辉衰减曲线
是指激发停止后发光强度随时间变化的曲线。
横坐标为时间,纵坐标为发光强度(或相对发光强度)。
二、测试仪器
激发光谱、发射光谱及余辉衰减曲线的测试采用日本岛津RF-5301PC型荧光分光光度计。
从150W氙灯光源发出的紫外和可见光经过激发单色器分光后,再经分束器照到样品表面,样品受到该激发光照射后发出的荧光经发射单色器分光,再经荧光端光电倍增管倍增后由探测器接收。
另有一个光电倍增管位于监测端,用以倍增激发单色器分出的经分束后的激发光。
注意:
选做钨灯光源激发光谱、发射光谱测试的同学应采用天津港东WGY-10型荧光分光光度计。
光源发出的紫外-可见光或者红外光经过激发单色器分光后,照到荧光池中的被测样品上,样品受到该激发光照射后发出的荧光经发射单色器分光,由光电倍增管转换成相应电信号,再经放大器放大反馈进入A/D转换单元,将模拟电信号转换成相应数字信号,并通过显示器或打印机显示和记录被测样品谱图。
三、样品制备
1.粉末试样
粉末试样可适当添加不影响光谱特性的粘结剂(也可不添加粘结剂),置于样品台凹槽中,压实、用载玻片碾平,固定到样品座中。
2.块状试样
块状试样可以直接用双面胶粘结在样品台上,固定到样品座中。
3.液体试样
液体试样应放入专用的液体样品槽中,固定到样品座中。
四、测试过程
RF-5301PC荧光分光光度计测试发射、激发光谱及余辉衰减曲线
先开机:
打开Xe灯开关和主机开关。
开电脑。
双击电脑桌面的“RFPC”程序快捷键进入测试程序,会出现初始化界面,仪器依次检测ROM、RAM、EEPROM激发狭缝、发射狭缝、激发单色器、发射单色器和基线,初始化完成后,进入到测试界面。
1.发射光谱的测试
第一步:
参数设置。
点击Configure设置/Parameter参数,进行测试参数设置:
(1)第一行为光谱类型。
选择“Emission”发射光谱
(2)第二行为激发波长。
输入激发波长(可以查找数据)
(3)第三行为发光波长范围。
输入扫描的起始波长和终止波长(对于未知样,也可选择可见光全波段400~760nm,一般范围:
激发波长加二倍狭缝宽——二倍激发波长减去二倍狭缝宽)
(4)第四行为记录范围。
输入纵坐标的最小和最大显示值
(5)第五行为扫描速度。
由快至慢有6种速度选择
(6)第七行为狭缝宽度。
可分别选择激发和发射狭缝宽度,(对于发光较弱的样品,测试时可以适当增大狭缝宽度。
)
(7)第八行为测试灵敏度选框。
(8)第九行为响应时间选框,由快至慢有9种速度选择
(9)参数设置完成后,点击“OK”。
第二步:
光谱测试。
点击屏幕右下角“Start”按钮,开始发射光谱测试。
测试完成后,屏幕会自动弹出一个保存界面:
上栏可输入文件名称,下栏可输入注解,若输入注解,则该注解将会在打印出的报告中显示出来。
输入文件名后,点击“Save”保存。
这种保存只是临时保存,关机后将消失。
永久保存需使用File/Saveas,选择存储路径和文件夹,点击“SaveAs”保存。
保存后的文件,扩展名是“.SPC”,只能用“RF-5301PC”程序打开。
若想将测试结果转换为数据,以利于使用其他软件作图和编辑,需进行数据转换。
第三步:
自动寻峰。
对于测试所得的发射光谱,程序能够进行自动寻峰。
步骤是:
点击Manipulate操作/选择Peakpick/鼠标左键点住屏幕下方弹出的窗口,上拉,调整窗口大小,即可读出峰值。
第四步:
数据转换。
点击File/Datatranslation/AscIIExport/则询问转换哪个通道?
选择通道后,点击OK,则数据转换过程完成。
转换后的扩展名为“.ASC”的文件自动保存在了C盘/RFPC文件夹/Data子夹中。
第五步:
数据处理。
打开Origin软件,点击工具菜单中的“导入ASC码文件”快捷键,按照路径寻找我们刚刚转换的扩展名为“.ASC”的文件,点击“打开”,则数据被导入。
点击屏幕下方的“直线”工具,即可完成作图。
调整横、纵坐标的字号。
输入横、纵坐标名称和单位。
数据处理完成后,可直接复制到Word文件中。
2.激发光谱的测试
(1)在光谱类型选框中,选择“Excitation”激发光谱,选择后,下面几行选项随之变化。
(2)第二行为监测的发光波长。
(通常,选择发射光谱的峰值位置作为监测波长。
)
(3)第三行为激发波长范围。
输入扫描的起始波长和终止波长(通常终止波长应小于发射光谱的短波边,但允许有适量交叉)
(4)以下“记录范围”、“扫描速度”、“狭缝宽度”、“灵敏度”及“响应时间”的设置,与发射光谱测试时的设置相类似。
(5)参数设置完成后,点击“OK”。
点击屏幕右下角“Start”按钮,开始激发光谱测试。
测试完成后,自动寻峰、数据转换、数据处理的操作与发射光谱相类似。
3.余辉衰减曲线的测试
点击“AcquireMode”,在下拉菜单中选择“TimeCourse”模式,进行测试参数设置。
其中,参数设置对话框上半部分:
激发波长(最大激发)、监测发光波长(最大发射)、狭缝宽度、灵敏度、响应时间及记录范围的设置与发射光谱、激发光谱测试时的设置相类似。
参数设置对话框下半部分:
反应时间是指余辉衰减曲线的测试时间,即横坐标的扫描时间段;
时间模式可选自动或手动;
时间单位默认为秒。
参数设置完成后,点击“OK”。
余辉衰减曲线测试点击屏幕右下角“Start”按钮,开始余辉衰减曲线的测试。
测试完成后,数据转换、数据处理的操作与发射光谱及激发光谱的操作相类似。