日本血吸虫感染对饮食诱导的c57bl6j脂肪肝小鼠肝组织tnf-α, nf-kb及ym-1 mrna表达的影响..docx

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安徽医科大学硕士学位论文

中英文缩写对照表

缩写

中文名称

英文名称

ALT

谷丙转氨酶

alanineaminotransferase

Arg-1

FBG

增强精氨酸酶-1空腹血糖

arginase-1

fastingbloodglucose

52

FINS

Fizz1FFAHF

HSj

HIVIL-1IL-4IL-6IL-10IL-12IL-13IRKC

MCP-1M1M2

NAFLDNC

NF-kB

空腹血浆胰岛素

类抵抗素α游离脂肪酸高脂组

高脂复合日本血吸虫感染组

人类免疫缺陷病毒白细胞介素-1

白细胞介素-4

白细胞介素-6白细胞介素-10白细胞介素-12白细胞介素-13胰岛素抵抗库普弗细胞

单核细胞趋化蛋白-l经典活化型巨噬细胞选择活化型巨噬细胞非酒精性脂肪肝病正常对照组

核因子-kappaB

fastingplasmainsulinresistin-like-α

freefattyacidshigh-fatgroup

high-fatwithschistosomajaponicuminfectedgroup

HumanImmunodeficiencyVirus

Interleukin-1Interleukin-4Interleukin-6Interleukin-10Interleukin-12Interleukin-13insulinresistanceKupffercells

monocytechemoattractantprotein-1classicallyactivatedmacrophagesalternativelyactivatedmacrophagesnon-alcoholicfattyliverdiseasenormalcontrolgroup

nuclearfactorkappaB

安徽医科大学硕士学位论文

RT-RCR

逆转录-聚合酶链反应

reversetranscription-polymerase

chainreaction

SJ

日本血吸虫

schistosomajaponicum

TG

甘油三酯

triglyceride

TC

胆固醇

cholesterol

TNF-α

肿瘤坏死因子-α

tumornecrosisfactor-α

STZ

链脲佐菌素

Streptozotocin

ThI

I型辅助T细胞

ThelpercellsI

ThII

II型辅助T细胞

ThelpercellsII

T1DM

1型糖尿病

type1diabetesmellitus

T2DM

2型糖尿病

type2diabetesmellitus

Ym1

类几丁质酶3样分子

chitinase3-like3

日本血吸虫感染对饮食诱导的C57BL/6J脂肪肝小鼠肝组织TNF-α,NF-kB及Ym-1mRNA表达的影响

中文摘要

目的观察日本血吸虫感染对高脂饮食诱导的C57BL/6J脂肪肝小鼠肝脏组织结构与功能、肿瘤坏死因子-α（tumornecrosisfactor-α,TNF-α）、核因子-kB（nuclearfactorkappaB,NF-kB）及巨噬细胞选择性活化标志物Ym-1mRNA水平在肝脏组织中表达的影响，探讨血吸虫感染后巨噬细胞选择性活化对肥胖小鼠肝脏及胰岛素抵抗的影响及可能机制。

方法36只雄性C57BL/6J小鼠,随机分为正常对照（NC,n=12）组、高脂饮食（HF,

n=12）组及高脂饮食复合日本血吸虫感染（HSj，n=12）组。

HF组经高脂饮食建立肥胖模型，HSj组经高脂饮食及日本血吸虫感染建立肥胖复合血吸虫感染模型。

分别于高脂喂养第6周末及12周末时检测空腹血糖（fastingperipheralblood

glucose，FBG）、空腹血浆胰岛素（fastingplasmainsulin，FINS）水平，并计算胰岛素抵抗指数（insulinresistanceindex，HOMA-IR），检测肝组织匀浆谷丙转氨酶（alanineaminotransferase，ALT）、甘油三酯（triglyceride，TG）及胆固醇

（cholesterol，TC）水平；HE染色观察肝组织病理改变，逆转录-聚合酶链反应

（reversetranscriptionpolymerasechainreaction，RT-RCR）检测肝脏组织TNF-α和NF-kB及M2型巨噬细胞的特异性标志物Ym-1mRNA表达情况。

结果

1.高脂喂养第6周末时，HF组及HSj组小鼠体重均较NC组增加>20%，肥胖模型造模成功。

第12周末时，HF组体重较NC组增加，具有统计学意义（P<0.05），HSj组体重与NC组比较无统计学意义，但低于HF组（P<0.05）。

2.第6周末时HF组FINS、HOMA-IR较NC组升高，具有统计学意义（P<0.05），HF组FBG较NC组升高差异无统计学意义，HSj组HOMA-IR较HF组显著下降

（P<0.05），而HSj组FBG、FINS与HF组比较差异无统计学意义。

第12周末时

HF组FBG、FINS、HOMA-IR均进一步升高且明显高于同期NC组（P<0.05），

HSj组FBG、FINS、HOMA-IR均较同期HF组下降（P<0.05）。

3.第6周末HF组小鼠肝匀浆TG较NC组升高有统计学意义（P<0.05）,TC及ALT含量与NC组比较无统计学差异。

HSj组TC、TG水平较HF组下降（P<0.05），ALT变化不明显。

12周末时HF组肝匀浆TC、TG、ALT进一步较NC组升高（P<0.05），

HSj组TC、TG较同期HF组下降有统计学意义（P<0.05），但ALT升高（P<0.05）。

4.肉眼观，在第6周末时，NC组小鼠肝脏红润，HF组小鼠肝脏边缘变钝、微黄色，可见黄色脂肪斑，HSj组小鼠肝脏呈红褐色，体积较HF组肝脏小，可见颗粒状结节；第12周末时，NC组小鼠肝脏外观无明显异常，HF组及HSj组小鼠肝脏上述表现更加明显。

5.光学显微镜下，在第6周末和第12周末NC组小鼠肝组织HE染色均未见明显异常。

第6周末时HF组小鼠肝细胞内可见大小不等的脂滴空泡，第12周末肝细胞内脂滴空泡更加明显，可见气球样变及纤维化，HSj组小鼠第6周末可见少量大小不等的脂滴空泡及肝细胞坏死，第12周末时肝细胞坏死和肝纤维化加重。

第

6周末及第12周末HF组肝小叶内及汇管区均可见炎性细胞浸润，较同期HSj组浸润增多。

6.RT-PCR在第6周和第12周末时检测HF组TNF-αmRNA及NF-kBmRNA表达均高于HSj组和NC组（P<0.05）。

第6周末时，HF组Ym-1mRNA的表达高于NC组和

HSj组（P<0.05），第12周末时HSj组Ym-1mRNA表达强度高于HF组和NC组

（P<0.05），且较6周时表达增强（P<0.05）。

7.HF组小鼠HOMA-IR与肝组织TNF-αmRNA光密度相对值呈正相关（P<0.05），与NF-kBmRNA光密度相对值无显著相关性（P>0.05）；HSj组小鼠HOMA-IR与肝组织Ym-1mRNA光密度相对值呈负相关（P<0.05）。

结论

1.高脂饮食可诱导C57BL/6J肥胖小鼠及脂肪肝模型的建立，该模型具有胰岛素抵抗的特征。

2.肥胖小鼠脂肪肝组织中炎症因子TNF-α及调控因子NF-kB的表达水平与胰岛素抵抗的形成有一定的关系。

3.日本血吸虫感染可以增强肥胖小鼠脂肪肝肝组织中M2型巨噬细胞选择性表达水平，降低脂肪肝组织中TNF-α及NF-kB水平的表达，减轻肝脏的脂肪变性及炎性细胞的浸润，改善胰岛素抵抗，其可能的机制与M2型巨噬细胞活化时抑制M1型巨噬细胞的促炎效应有关，但可能加重肝细胞坏死及肝纤维化。

关键词脂肪肝；炎症因子；胰岛素抵抗

EffectsofschistosomajaponicuminfectiononTNF-α,NF-kBandYm-1indiet-inducedfattyliverofC57BL/6Jmice

Abstract

ObjectiveToobservethepathologicalstructure,biochemicalindicators,andchangesoftumornecrosisfactor-α（TNF-α）,nuclearfactor-kappaB（NF-kB）andmacrophageM2marker,specificallyYm-1,andexploretherelationshipandmechanismof

macrophagepolarizationandinsulinresistanceindiet-inducedobeseandschistosomajaponicuminfectedC57BL/6Jmice．

Methods36maleC57BL/6Jmicewererandomlyassignedinto3groups:

normalcontrol（NC,n=12）group,high-fatdiet（HF,n=12）groupandhigh-fatdietwithschistosomajaponicuminfected（HSj,n=12）group.Theywerefedwithbasicdiet,high-fatdietgroup,respectively,andHSjgroupwereinfectedschistosomajaponicum.Specimenwascollected6and12weeksafterhigh-fatdiet,separately.Thelevelsoffastingbloodglucose（FBG）,fastingplasmainsulin（FINS）andinsulin（HOMA-IR）weredetectedandthecontentsofliverhomogenatealanineaminotransferase（ALT）,triglyceride（TG）andcholesterol（TC）weremeasured.ThepathologicalchangesofliverwereobservedbyHEstaining.TNF-α,NF-kBandYm-1mRNAweredetectedbysemi-quantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction（RT-PCR）.

Results

1.Whenhavingbeenfedfor6weeks,theweightofHFandHSjgroupincreased20%thantheNCgroup,andobesitymodelmicew