高效液相色谱基线地各种问的题目.docx

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高效液相色谱基线地各种问的题目

高效液相色谱基线的各种问题

L、基线漂移

原因解决方法

1、柱温波动。

（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。

通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。

）

1、控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器图

2、流动相不均匀。

（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。

）

2、使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。

流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。

3、流通池被污染或有气体

3、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。

如有需要，可以用1N的硝酸。

（不要用盐酸）

4、检测器出口阻塞。

（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线）

4、取出阻塞物或更换管子。

参考检测器手册更换流通池窗。

5、流动相配比不当或流速变化

5、更改配比或流速。

为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。

6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时

6、用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。

7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成

7、检查流动相的组成。

使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂

8、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。

8、使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。

9、使用循环溶剂，但检测器未调整。

9、重新设定基线。

当检测器动力学范围发生变化时，使用新的流动相。

10、检测器没有设定在最大吸收波长处。

10、将波长调整至最大吸收波长处

M、基线噪音（规则的）

原因解决方法

1、在流动相、检测器或泵中有空气

1、流动相脱气。

冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。

2、漏液图2、见第三部分。

检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。

如有必要，更换泵密封。

3、流动相混合不完全3、用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂

4、温度影响（柱温过高，检测器未加热）

4、减少差异或加上热交换器

5、在同一条线上有其他电子设备

5、断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。

6、泵振动6、在系统中加入脉冲阻尼器

N、基线噪音（不规则的）

原因解决方法

1、漏液图1、见第三部分。

检查接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。

如有必要，更换密封。

检查流通池是否漏液。

2、流动相污染、变质或由低质溶剂配成

2、检查流动相的组成。

3、流动相各溶剂不相溶3、选择互溶的流动相

4、检测器/记录仪电子元件的问题

4、断开检测器和记录仪的电源，检查并更正。

5、系统内有气泡5、用强极性溶液清洗系统

6、检测器内有气泡6、清洗检测器，在检测器后面安装背景压力调节器

7、流通池污染（即使是极少的污染物也会产生噪音。

）

7、用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池

8、检测器灯能量不足8、更换灯

9、色谱柱填料流失或阻塞9、更换色谱柱

10、流动相混合不均匀或混合器工作不正常

10、维修或更换混合器，在流动相不走梯度时，建议不使用泵的混合装置

O、宽峰

原因解决方法

1、流动相组成变化1、重新制备新的流动相

2、流动相流速太低2、调节流速

3、漏液（特别是在柱子和检测器之间）

3、见section3。

检查接头是否松动、泵是否漏液、是否有盐析出以及不正常的噪音。

如果必要更换密封。

4、检测器设定不正确4、调整设定

5、柱外效应影响

a、柱子过载

b、检测器对反应时间或池体积响应过大

c、柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大

d、记录仪响应时间太长

5、a、小体积进样（例如：

10ul而不是100ul）以1：

10或1：

100的比例稀释样品

b、减少响应时间或使用更小的流通池

c、使用内径为0.007-0.01的短管路

d、减少响应时间

6、缓冲液浓度太低6、增加浓度

7、保护柱污染或失效7、更换保护柱

8、更换同样类型的色谱柱。

如果新柱子可以提供对称的色谱峰，则用强溶剂冲洗旧柱子。

9、柱入口塌陷9、打开柱入口，填补塌陷或更换柱子

10、呈现两个或多个未被完全分离的物质的峰

10、选择其它类型的色谱柱以改善分离效果

11、柱温过低11、提高柱温。

除非特殊情况，温度不宜超过75℃

12、检测器时间常数太大12、使用较小的时间常数

P、分离度降低

原因解决方法

1、流动相污染或变质（引起保留时间变化）

1、重新配置流动相

2、保护柱或分析柱阻塞图

2、去掉保护柱进行分析。

如果必要则更换保护柱。

如果分析柱阻塞，可进行反冲。

如果问题仍然存在色谱柱可能被强保留的污染物损坏，建议使用恰当的再生程序。

如果问题仍然存在，进口可能阻塞了，更换入口处的筛板或更换色谱柱。

Q、所有的峰面积都太小

原因解决方法

1、检测器衰减设定过高1、减少衰减的设定

2、检测器时间常数设定太大

2、设定较小的时间常数

3、进样量太少3、增大进样量

4、记录仪连接不当4、使用正确的连接

R、所有的峰面积都太大

原因解决方法

1、检测器衰减设定过低1、采取较大的衰减

2、进样过多2、减少进样量

3、记录仪连接不正确3、正确连接记录仪

HPLC日常维护办法之四：

进样阀的问题

以下问题在使用进样阀过程中有可能发生。

A、手动进样阀，转动不灵

原因解决方法

1、转子密封损坏1、更换或调整转子密封

2、转子太紧2、调整转子的松紧度

B、手动进样阀，载样困难

原因解决方法

1、进样阀安装不当1、重新安装

2、定量环阻塞2、清洗或更换定量环

3、进样器污染3、清洗或更换进样器

4、管路阻塞4、清洗或更换管路

C、自动进样阀，不能转动

原因解决方法

1、无压力（或电源）1、提供恰当的压力（电源）

2、转子太紧2、调整转子的松紧度

3、进样阀安装不当3、重新安装

D、自动进样阀，其它问题

原因解决方法

1、阻塞1、清洗或更换阻塞部件

2、机械故障2、见随机维修手册

3、控制器故障3、维修或更换控制器

液相色谱基线有很多的毛刺，但总体上还是水平的，问这是什么原因导致的？

悬赏分：

5-解决时间：

2006-7-2021:

14

液相色谱基线有很多的毛刺，但总体上还是水平的，问这是什么原因导致的？

问题补充：

我所用的是液相色谱，配紫外检测器，色谱柱是新的，仪器也没有振动。

毛刺是因信号频率的波动而引起，是比色谱峰的有效值频率更高的基线扰动。

毛刺的存在并不影响色谱峰的分辨，但对检测限有一定影响。

规则的毛刺还算是正常,你把基线放宽,就相当于灵敏度变高。

先给仪器充分的稳定时间再看看。

如果真的是色谱系统出了问题，一般是这几个方面的（不管是气相还是液相都有用）：

1.氢气，空气，载气纯度不高会影响。

2.玻璃衬管是否脏

3.色谱柱是否脏，处理一下或换一个新的试一试

4.检测器清洗一下，可能有未燃烧完的杂质

5.是否漏气

6.进样口是否该换一个垫子

7.仪器是否产生较大振动

8.信号接收器是否已怀或者接触不良

甚至还有过因为工作站出问题导致的毛刺……

小弟初次使用液相色谱，基线波动非常厉害怎么回事

小弟科室一台电化学液相色谱闲置两年没人用过，今天小弟初次使用时调节流速为0.5mL•min工作电压设为+700mV,滤波0。

1Hz,增益5nA

发现基线抖得很厉害，很有规律，就是每当泵“笃”一声时就出现一个波峰，大概0.8nA高，也不出现基线向上向下漂移，很影响测量，请问是怎么回事，谢谢

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可能是色谱柱进了气泡，又或者色谱柱还未被流动相跑平衡

（如果是柱子进气泡的话，会出现一组很有规律的峰）

其实基线的波动是难免的，只要波动在允许的范围之内的话，就不会影响测量

你问题说的很详细，但是你还是没说：

你的柱子有没有恒温箱。

首先我怀疑柱温波动。

（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。

通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。

）解决方法：

控制好柱子和流动相的温度。

其次，我怀疑是流动相，流动相有气泡。

流动相条件变化引起的基线波动大于温度导致的波动。

解决方法：

使用HPLC级的溶剂流动相在使用前进行脱气，有条件可以在线脱气。

如果你的泵压也波动的话，检查系统是否漏液，如果不漏液，就基本上是确定是有气泡了。

其他原因解决方法

1、在流动相、检测器或泵中有空气1、流动相脱气。

冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。

2、漏液图2、检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。

如有必要，更换泵密封。

3、流动相混合不完全3、用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂

4、温度影响（柱温过高，检测器未加热）4、减少差异或加上热交换器

5、在同一条线上有其他电子设备5、断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。

6、泵振动6、在系统中加入脉冲阻尼器

二

最近在论坛里发现很多虫友在HPLC试验中经常受到基线波动或基线漂移的困扰，下面就我本人在实验中积累的或从别处了解到的一些经验总结如下，欢迎大家指正。

1.液相系统没有平衡好，柱子里的流动相一直在变化，在检测器里面的吸收就会一直变化，导致基线波动的发生；梯度时如果其实比例的流动相平衡时间过短也会造成基线波动；

2.实验室环境不稳定（比如温度忽高忽低，气流不断变化等），这对于没有柱温箱或只有单向温度变化的HPLC仪器的影响尤其明显；即使有比较好的柱温箱时，也要注意别让空调的出风口一直对照仪器吹，那样基线也可能会波动；此外实验室有电磁干扰时，也有可能会导致此问题的发生；

3.检测器的流通池被污染，造成吸收的不恒定，此时需要清洗流通池；

4.检测器灯能量不足时，吸收会变得不稳定，这时基线一般也不稳定，特别是在低波长处尤为明显；

5.当使用低波长检测时，有时流动相会使用两相或以上的等度，这时混合器的很小的混合比例的误差都会被放大，很有可能会使基线发生波动，这时将流动相按比例混合到一个通道里时，一般都会使情况改善很多；

6.流动相里的有机相的截止波长最好要大于检测波长20nm以上，这一点切记，比如甲醇的截止波长是210nm，乙腈是190nm。

当使用230nm以下的检测波长时，如果条件允许，最好使用乙腈，可以避免基线波动，其余类推；

7.仪器出现问题也会造成基线波动，比如

（1）流动相过滤头堵塞、入口主动阀滤芯污染、单向阀被污染物堵塞、泵头有气泡、比例阀出故障、系统流路漏液，比如管路裂开、peek接头没完全连上色谱柱而导致的泄露等；

8.没有脱气机的仪器，当流动相未脱气或脱气未彻底时，基线也会波动；有脱气机的每次使用前都要检查一下是否正常工作；

9.当大家使用梯度作为组分洗脱方式的时候，有条件的最好使用超纯水，磷酸盐、三乙胺等固体液体