高效液相色谱知识文档格式.docx
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色谱扫盲班
（一）、开机：
1、打开计算机,进入WindowsNT（或Windows2000）画面,并运行BootpServer程序。
2、打开1100LC各模块电源。
3、待各模块自检完成后，双击Instrument1Online图标，化学工作站自动与1100LC通讯，进入的工作站画面。
4、从“View”菜单中选择“MethodandRuncontrol”画面,单击”View”菜单中的“ShowTopToolbar”，“Showstatustoolbar”，“Systemdiagram”,”Samplingdiagram”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。
5、把流动相放入溶剂瓶中。
6、打开Purge阀。
7、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setuppump选项，进入泵编辑画面。
8、设Flow：
5ml/min，单击OK。
9、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pumpcontrol选项，选中On，单击OK，则系统开始Purge，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续Purge，直到所有要用通道无气泡为止。
10、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击PumpControl选项，选中Off，单击Ok关泵，关闭Purge
valve。
11、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setuppump选项，进入Pump编辑画面，设Flow：
1.0ml/min。
12、单击泵下面的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积。
也可输入停泵的体积。
单击Ok。
（二）数据采集方法编辑：
1、开始编辑完整方法：
●从“Method”菜单中选择“Editentiremethod”项，如上图所示选中除“Data
analysis”外的三项，单击Ok，进入下一画面。
2、方法信息：
●在“MethodComments”中加入方法的信息（如：
方法的用途等）。
●单击Ok进入下一画面。
3、泵参数设定：
（以二元泵为例）
●在“Flow”处输入流量,如1ml/min，在“SolventB”处输入70.0,（A=100-B）,也可Insert一行”Timetable”,编辑梯度。
在“PressureLimitsMax”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。
●
单击Ok进入下一画面。
4、自动进样器参数设定:
●选择合适的进样方式,进样体积1.0ul,洗瓶位置为6号。
“StandardInjection”----只能输入进样体积，此方式无洗针功能。
“InjectionwithNeedleWash”----可以输入进样体积和洗瓶位置，此方式针从样品瓶抽完样品后，会在洗瓶中洗针。
“Useinjectorprogram”---可以点击Edit键进行进样程序编辑。
●点击Ok进入下一画面。
5、柱温箱参数设定:
●在”Temperature”下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击”more>
>
”键,如图所示,选中”Sameasleft”---使柱温箱的温度左右一致。
●点击ok进入下一画面。
6、VWD检测器参数设定:
●在”Wavelength”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm,
在”Peakwidth（Responsetime）”下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间,如>
0.1min
（2s）。
●在Timetable中可以“Insert”一行，输入随时间切换的波长，如1min
，波长=300nm。
点击ok进入下一画面。
7、DAD检测器参数设定:
●检测波长:
254nm,BW=30nm,
参比波长=350nm,BW=100nm;
●检测波长：
一般选择最大吸收处的波长。
样品带宽BW：
一般选择最大吸收值一半处的整个宽度。
参比波长：
一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域。
参比带宽BW：
至少要与样品信号的带宽相等，许多情况下用100nm作为缺省值。
Peakwidth（Responsetime）：
其值尽可能接近要测的窄峰峰宽。
Slit—狭缝窄，光谱分辨率高；
宽时，噪音低。
同时可以输入采集光谱方式，步长，范围，阈值。
选中所用的灯。
8、RID检测器参数设定:
●色谱条件:
进样体积:
20ul。
光学单元温度:
Off。
极性:
正。
峰宽（响应时间）:
4s
。
●“OpticalUnitTemperature”---若环境温度控制在±
2℃,设定为Off,
若环境温度不稳定,则设定光学单元温度为高于环境温度5度,以防样品在池中沉淀。
“Peakwidth”---大多数分析设为4S，只有在高速分析下设为更短。
“Automaticrecyclingafteranalysis”---在不进行分析时可以让流动相循环，节省流动相，检测器连续运行，可随时投入使用。
●点击RID图标，选择RID
Control：
Heater设为On，若要循环流动相，必须将“RecyclingValve”设为ON。
手动purge参比池，将其设为On，并输入Purge时间。
9、FLD检测器参数设定:
色谱条件：
样品：
P/N01018-68704
用甲醇稀释为1:
10。
进样体积：
5ul。
柱温箱:
30℃。
EX=246nm,EM=317nm,PMT=10。
●
响应时间=4s.
停止时间：
出峰完毕。
ExcitationA:
激发波长:
200-700nm,步长为1nm,或ZeroOrder。
Emission:
发射波长:
280-900nm,步长为1nm,或ZeroOrder。
PMT:
大多数应用适当的设定值为10,若高浓度样品峰被切平头,则减少PMT值。
“Peakwidth”：
大多数应用设为4s，只有快速分析采用小的设定值。
MultiEx：
多波长及光谱（激发）。
MultiEm：
多波长及光谱（发射）。
同时可以输入范围Range、步长step、采集光谱。
10、在“Runtimechecklist”中选中“Dataacquisition”，单击Ok。
11、单击“Method”菜单，选中“Savemethodas”，输入一方法名，如“test”，单击Ok。
12、从菜单“View”中选中”Onlinesignal”,选中Windows1,然后单击Change钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点击Ok.（如同时检测二个信号,则重复12,选中Windows2）。
13、从“Run
control”菜单中选择“Sampleinfo”选项，如上图所示，输入操作者名称，在“Datafile”中选择“Manual”或“Prefix”。
区别:
Manual--每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖。
Prefix—在Prefix框中输入前缀，在Counter框中输入计数器的起始位，仪器会自动命名，如vwd0001，vwd0002……。
14、从Instrument菜单选择Systemon。
15、等仪器Ready，基线平稳，从Method菜单中选择“Runmethod”，进样。
（三）、数据分析方法编辑:
1、从“View”菜单中，单击“Dataanalysis”进入数据分析画面。
2、从“File”菜单选择“Loadsignal”，选中您的数据文件名，如下图所示。
3、做谱图优化,从“Graphics”菜单中选择“Signaloptions”选项，。
从Ranges中选择Autoscale及合适的显示时间，单击ok,或选择”UseRanges”调整。
反复进行，直到图的比例合适为止。
4、积分:
（1）、从“Integration”中选择“Autointegrate”,如积分结果不理想,再从菜单中选择“Integration
Events”选项，选择合适的Slopesensitivity，Peakwidth，Areareject，Heightreject。
（2）、从“Integration”菜单中选择“Integrate”选项，则数据被积分。
（3）、如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。
（4）、单击左边“√”图标，将积分参数存入方法。
5、打印报告:
（1）、从“Report”菜单中选择“Specifyreport”选项，进入如上画面。
（2）、单击“Quantitative
Results”框中Calculate右侧的黑三角，选中Percent（面积百分比），其它选项不变。
（3）、单击Ok.
（4）、从“Report”菜单中选择“Printreport”，则报告结果将打印到屏幕上，如想输出到打印机上，则单击Report底部的“Print”钮。
（四）、关机:
关机前，用100%的水冲洗系统20分钟，然后用有机溶剂冲洗系统10分钟（如ACN），然后关泵，（适于反相色谱柱）。
[正相色谱柱用适当的溶剂冲洗]
退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机（用shutdown关）。
关掉Agilent1100电源开关。
1、色谱柱长时间不用，存放时，柱内应充满溶剂，两端封死（如ACN适于反相色谱柱，正相色谱柱用相应的有机相）
2、对于手动进样器，当使用缓冲溶液时，要用水冲洗进样口，同时搬动进样阀数次，每次数毫升。
3、流动相使用前必须过滤，不要使用多日存放的蒸馏水（易长菌）。
4、带seal-wash的1100，要配制90
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