水质五日生化需氧量BOD5的测定.docx

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水质五日生化需氧量BOD5的测定

水质-五日生化需氧量（BOD5）的测定

中华人民共和国国家环境保护标准

HJ505—2009

代替GB/T7488-1987

水质五日生化需氧量（BOD5）的测定

稀释与接种法

警告：

丙烯基硫脲属于有毒化合物，操作时应按规定要求佩带防护器具，避免接触皮肤和衣服；

标准溶液的配制应在通风柜内进行操作；检测后的残渣残液应做妥善的安全处理。

1适用范围

本标准规定了测定水中五日生化需氧量（BOD5）的稀释与接种的方法。

本标准适用于地表水、工业废水和生活污水中五日生化需氧量（BOD5）的测定。

方法的检出限为0.5mg/L，方法的测定下限为2mg/L，非稀释法和非稀释接种法的测定上限

为6mg/L，稀释与稀释接种法的测定上限为6000mg/L。

2规范性引用文件

本标准内容引用了下列文件中的条款。

凡是不注日期的引用文件，其有效版本适用于本标准。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T7489水质溶解氧的测定碘量法

GB/T11913水质溶解氧的测定电化学探头法

HJ/T91地表水和污水监测技术规范

3方法原理

生化需氧量是指在规定的条件下，微生物分解水中的某些可氧化的物质，特别是分解有机物

的生物化学过程消耗的溶解氧。

通常情况下是指水样充满完全密闭的溶解氧瓶中，在（20±1）

℃的暗处培养5d±4h或（2+5）d±4h（先在0～4℃的暗处培养2d，接着在（20±1）℃的暗处培养5d，

即培养（2+5）d），分别测定培养前后水样中溶解氧的质量浓度，由培养前后溶解氧的质量浓度之差，

计算每升样品消耗的溶解氧量，以BOD5形式表示。

若样品中的有机物含量较多，BOD5的质量浓度大于6mg/L，样品需适当稀释后测定；对不

含或含微生物少的工业废水，如酸性废水、碱性废水、高温废水、冷冻保存的废水或经过氯化处

理等的废水，在测定BOD5时应进行接种，以引进能分解废水中有机物的微生物。

当废水中存在

0.25g六水合氯化铁（FeCl3·6H2O）溶于水中，稀释

至1000ml，此溶液在0～4℃可稳定保存6个月，若发现任何沉淀或微生物生长应弃去。

4.4稀释水：

在5～20L的玻璃瓶中加入一定量的水，控制水温在（20±1）℃，用曝气装置（5.9）

至少曝气1小时，使稀释水中的溶解氧达到8mg/L以上。

使用前每升水中加入上述四种盐溶液

（4.3）各1.0ml，混匀，20℃保存。

在曝气的过程中防止污染，特别是防止带入有机物、金属、

氧化物或还原物。

2

稀释水中氧的浓度不能过饱和，使用前需开口放置1小时，且应在24小时内使用。

剩余的

稀释水应弃去。

4.5接种稀释水：

根据接种液的来源不同，每升稀释水（4.4）中加入适量接种液（4.2）：

城市生

活污水和污水处理厂出水加1～10ml，河水或湖水加10～100ml，将接种稀释水存放在（20±1）

℃的环境中，当天配制当天使用。

接种的稀释水pH值为7.2，BOD5应小于1.5mg/L。

4.6盐酸溶液，c（HCl）=0.5mol/L：

将40ml浓盐酸（HCl）溶于水中，稀释至1000ml。

4.7氢氧化钠溶液，c（NaOH）=0.5mol/L：

将20g氢氧化钠溶于水中，稀释至1000ml。

4.8亚硫酸钠溶液，c（Na2SO3）=0.025mol/L：

将1.575g亚硫酸钠（Na2SO3）溶于水中，稀释至

1000ml。

此溶液不稳定，需现用现配。

4.9葡萄糖-谷氨酸标准溶液：

将葡萄糖（C6H12O6，优级纯）和谷氨酸

（HOOC-CH2-CH2-CHNH2-COOH，优级纯）在130℃干燥1小时，各称取150mg溶于水中，在

1000ml容量瓶中稀释至标线。

此溶液的BOD5为210±20mg/L，现用现配。

该溶液也可少量冷冻

保存，融化后立刻使用。

4.10丙烯基硫脲硝化抑制剂，ρ（C4H8N2S）=1.0g/L：

溶解0.20g丙烯基硫脲（C4H8N2S）于200ml

水中混合，4℃保存，此溶液可稳定保存14d。

4.11乙酸溶液,1+1。

4.12碘化钾溶液,ρ（KI）=100g/L：

将10g碘化钾（KI）溶于水中，稀释至100ml。

4.13淀粉溶液,ρ=5g/L：

将0.50g淀粉溶于水中，稀释至100ml。

5仪器和设备

本标准除非另有说明，分析时均使用符合国家A级标准的玻璃量器。

本标准使用的玻璃仪器

须清洁、无毒性和可生化降解的物质。

5.1滤膜：

孔径为1.6μm。

5.2溶解氧瓶：

带水封装置，容积250～300ml。

5.3稀释容器：

1000～2000ml的量筒或容量瓶。

5.4虹吸管：

供分取水样或添加稀释水。

5.5溶解氧测定仪。

5.6冷藏箱：

0～4℃。

5.7冰箱：

有冷冻和冷藏功能。

5.8带风扇的恒温培养箱：

（20±1）℃。

6样品

6.1采集与保存

样品采集按照《地表水和污水监测技术规范》（HJ/T91）的相关规定执行。

采集的样品应充满并密封于棕色玻璃瓶中，样品量不小于1000ml，在0～4℃的暗处运输和

保存，并于24h内尽快分析。

24h内不能分析，可冷冻保存（冷冻保存时避免样品瓶破裂），冷

冻样品分析前需解冻、均质化和接种。

6.2样品的前处理

6.2.1pH值调节

若样品或稀释后样品pH值不在6～8范围内，应用盐酸溶液（4.6）或氢氧化钠溶液（4.7）

调节其pH值至6～8。

6.2.2余氯和结合氯的去除

若样品中含有少量余氯，一般在采样后放置1～2h，游离氯即可消失。

对在短时间内不能消

失的余氯，可加入适量亚硫酸钠溶液去除样品中存在的余氯和结合氯，加入的亚硫酸钠溶液的量

由下述方法确定。

取已中和好的水样100ml，加入乙酸溶液（4.11）10ml、碘化钾溶液（4.12）1ml，混匀，暗

处静置5min。

用亚硫酸钠溶液滴定析出的碘至淡黄色，加入1ml淀粉溶液（4.13）呈蓝色。

再继

续滴定至蓝色刚刚褪去，即为终点，记录所用亚硫酸钠溶液体积，由亚硫酸钠溶液消耗的体积，

计算出水样中应加亚硫酸钠溶液的体积。

6.2.3样品均质化

含有大量颗粒物、需要较大稀释倍数的样品或经冷冻保存的样品，测定前均需将样品搅拌均

匀。

6.2.4样品中有藻类

若样品中有大量藻类存在，BOD5的测定结果会偏高。

当分析结果精度要求较高时，测定前

应用滤孔为1.6μm的滤膜（5.1）过滤，检测报告中注明滤膜滤孔的大小。

6.2.5含盐量低的样品

4

若样品含盐量低，非稀释样品的电导率小于125μS/cm时，需加入适量相同体积的四种盐溶

液（4.3），使样品的电导率大于125μS/cm。

每升样品中至少需加入各种盐的体积V按公式

（1）

计算：

V=（ΔK−12.8）/113.6

（1）

式中：

V——需加入各种盐的体积，ml；

ΔK——样品需要提高的电导率值，μS/cm。

7分析步骤

7.1非稀释法

非稀释法分为二种情况：

非稀释法和非稀释接种法。

如样品中的有机物含量较少，BOD5的质量浓度不大于6mg/L，且样品中有足够的微生物，

用非稀释法测定。

若样品中的有机物含量较少，BOD5的质量浓度不大于6mg/L，但样品中无足

够的微生物，如酸性废水、碱性废水、高温废水、冷冻保存的废水或经过氯化处理等的废水，采

用非稀释接种法测定。

7.1.1试样的准备

7.1.1.1待测试样

测定前待测试样的温度达到（20±2）℃，若样品中溶解氧浓度低，需要用曝气装置（5.9）

曝气15min，充分振摇赶走样品中残留的空气泡；若样品中氧过饱和，将容器2/3体积充满样品，

用力振荡赶出过饱和氧，然后根据试样中微生物含量情况确定测定方法。

非稀释法可直接取样测

定；非稀释接种法，每升试样中加入适量的接种液（4.2），待测定。

若试样中含有硝化细菌，有可

能发生硝化反应，需在每升试样中加入2ml丙烯基硫脲硝化抑制剂（4.10）。

7.1.1.2空白试样

非稀释接种法，每升稀释水中加入与试样中相同量的接种液（4.2）作为空白试样，需要时每升

试样中加入2ml丙烯基硫脲硝化抑制剂（4.10）。

7.1.2试样的测定

7.1.2.1碘量法测定试样中的溶解氧

将试样（7.1.1.1）充满二个溶解氧瓶（5.2）中，使试样少量溢出，防止试样中的溶解氧质量

浓度改变，使瓶中存在的气泡靠瓶壁排除。

将一瓶盖上瓶盖，加上水封，在瓶盖外罩上一个密封

5

罩，防止培养期间水封水蒸发干，在恒温培养箱（5.8）中培养5d±4h或（2+5）d±4h后测定试

样中溶解氧的质量浓度。

另一瓶15min后测定试样在培养前溶解氧的质量浓度。

溶解氧的测定按GB/T7489进行操作。

7.1.2.2电化学探头法测定试样中的溶解氧

将试样（7.1.1.1）充满一个溶解氧瓶（5.2）中，使试样少量溢出，防止试样中的溶解氧质量

浓度改变，使瓶中存在的气泡靠瓶壁排除。

测定培养前试样中的溶解氧的质量浓度。

盖上瓶盖，防止样品中残留气泡，加上水封，在瓶盖外罩上一个密封罩，防止培养期间水封

水蒸发干。

将试样瓶放入恒温培养箱（5.8）中培养5d±4h或（2+5）d±4h。

测定培养后试样中

溶解氧的质量浓度。

溶解氧的测定按GB/T11913进行操作。

空白试样的测定方法同7.1.2.1或7.1.2.2。

7.2稀释与接种法

稀释与接种法分为二种情况：

稀释法和稀释接种法。

若试样中的有机物含量较多，BOD5的质量浓度大于6mg/L，且样品中有足够的微生物，采

用稀释法测定；若试样中的有机物含量较多，BOD5的质量浓度大于6mg/L，但试样中无足够的

微生物，采用稀释接种法测定。

7.2.1试样的准备

7.2.1.1待测试样

待测试样的温度达到（20±2）℃，若试样中溶解氧浓度低，需要用曝气装置（5.9）曝气15min，

充分振摇赶走样品中残留的气泡；若样品中氧过饱和，将容器的2/3体积充满样品，用力振荡赶

出过饱和氧，然后根据试样中微生物含量情况确定测定方法。

稀释法测定，稀释倍数按表1和表

2方法确定，然后用稀释水（4.4）稀释。

稀释接种法测定，用接种稀释水（4.5）稀释样品。

若样

品中含有硝化细菌，有可能发生硝化反应，需在每升试样培养液中加入2ml丙烯基硫脲硝化抑

制剂（4.10）。

稀释倍数的确定：

样品稀释的程度应使消耗的溶解氧质量浓度不小于2mg/L，培养后样品中

剩余溶解氧质量浓度不小于2mg/L，且试样中剩余的溶解氧的质量浓度为开始浓度的1/3～2/3为最佳。

稀释倍数可根据样品的总有机碳（TOC）、高锰酸盐指数（IMn）或化学需氧量（CODCr）的

测定值，按照表1列出的BOD5与总有机碳（TOC）、高锰酸盐指数（IMn）或化学需氧量（CODcr）

的比值R估计BOD5的期望值（R与样品的类型有关），再根据表2确定稀释因子。

按照确定的稀释倍数，将一定体积的试样或处理后的试样用虹吸管（5.4）加入已加部分稀释

水或接种稀释水的稀释容器中（5.3），加稀释水或接种稀释水至刻度，轻轻混合避免残留气泡，

待测定。

若稀释倍数超过100倍，可进行两步或多步稀释。

若试样中有微生物毒性物质，应配制几个不同稀释倍数的试样，选择与稀释倍数无关的结果，

并取其平均值。

试样测定结果与稀释倍数的关系确定如下：

当分析结果精度要求较高或存在微生物毒性物质时，一个试样要做2个以上不同的稀释倍数，

每个试样每个稀释倍数做平行双样同时进行培养。