分光光度法测定鸡蛋黄卵磷脂含量Word文件下载.docx

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科学院家禽所青年基金项目（S⁃017

作者简介:

朱云芬（1981⁃,女,江苏扬州人,硕士,助理研究员,主要

　　摘要:

　建立鸡蛋黄卵磷脂含量快速测定的分光光度检测方法㊂将鸡蛋黄用95%的乙醇溶液处理,分离蛋黄脂质㊂粗提的蛋黄脂肪经高氯酸⁃硝酸消化液消化后与钒钼酸铵反应,于分光光度计400nm处进行比色测定磷含量,再乘以系数25即为卵磷脂含量㊂在0.5g空白样品中分别添加50μg㊁100μg和200μg3个不同量的磷标准溶液,测定回收率㊂磷标准曲线在0~25μg/ml浓度内呈线性相关,相关系数（r为0.994㊂回收率为84.3%~93.4%,精密度为1.93%~2.90%㊂该方法符合食品卫生分析要求,可用于鸡蛋黄卵磷脂含量分析㊂

关键词:

　鸡蛋黄;

卵磷脂;

分光光度法

中图分类号:

　X836　　　文献标识码:

　A　　　文章编号:

　1000⁃4440（201004⁃0853⁃04

SpectrophotometricDeterminationofEgg⁃yolkLecithinContent

ZHUYun⁃fen,　CHENKuan⁃wei,　GEQing⁃lian,　HANWei,　SHIZu⁃hao,　GONGJian⁃sen

（PoultryIinstitute,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Yangzhou225003,China

　　Abstract:

　Thepurposeofthisstudywastosetuparapiddeterminationmethodofyolklecithincontentwithspec⁃

precisionrangedfrom1.93%to2.90%.

Keywords:

　egg⁃yolk;

lecithin;

spectrophotometricdetermination

　　卵磷脂（Lecithin是一种含磷的类脂化合物,广泛存在于动植物体内,具有重要的生理功能和独特的乳化性能㊂它是构成人体生物膜的重要组成成分,也是人体必需的胆碱和必需脂肪酸的重要来

源[1⁃2]㊂根据不同来源磷脂分为蛋黄磷脂和大豆磷脂,两者所含磷脂组分不同㊂蛋黄中卵磷脂含量很高,达干物质总质量的8%~10%[3],其主要由磷脂酰胆碱（Pc㊁磷脂酰乙醇胺（PE㊁磷脂酰肌醇（PI㊁磷脂酰丝氨酸（Ps等组成,且对人体有益的磷脂酰胆碱含量远远高于大豆磷脂,达到70%~

80%;

蛋黄磷脂和大豆磷脂配位的脂肪酸也不同:

蛋黄磷脂的脂肪酸组分大多为棕榈酸㊁油酸,其次为硬脂酸㊁亚油酸,并且还含有微量花生四烯酸和二十二碳六烯酸等近年来备受关注的多不饱和脂肪酸及奇3

58

数碳脂肪酸（如十七烷酸等,而大豆磷脂中亚油酸约占50%,几乎不含C20以上的脂肪酸[4]㊂

目前,磷脂的分析检测方法主要有薄层色谱及薄层扫描色谱法[5⁃6]㊁高效液相色谱法[7]㊁紫外⁃可见吸收光谱分析法[8]㊁红外光谱分析法[9]以及核磁共振光谱分析法[10]等㊂近年来,对蛋黄卵磷脂分离提纯的研究报道较多,但对于分析测试方法,国内研究报道较少㊂考虑到以往的检测方法步骤繁琐㊁检测仪器要求高㊁价格昂贵,本试验利用卵磷脂中磷元素含量与卵磷脂含量之间存在固定换算关系,摸索出更为简便的样品前处理条件,并借鉴‘食品中磷的测定“[11]中样品消化方法,制定鸡蛋蛋黄卵磷脂含量快速测定的分光光度检测方法㊂

1　材料与方法

1.1　药品与试剂

无水乙醇,上海南翔试剂有限公司产品;

浓硫酸,相对密度1.84,无锡吴越化工有限公司产品;

高氯酸,江苏金城试剂有限公司产品;

硝酸,江苏金城试剂有限公司产品;

偏钒酸铵,上海绿源精细化工厂产品;

钼酸铵,上海绿源精细化工厂产品;

磷酸二氢钾,上海绿源精细化工厂产品㊂

95%乙醇溶液:

取95ml无水乙醇,加水至100ml;

高氯酸⁃硝酸消化液:

高氯酸㊁硝酸按1∶4（体积比混合;

钒钼酸铵显色剂:

称取偏钒酸铵1.25g,加水200ml,加热溶解,冷却后再加入250ml硝酸,另称取钼酸铵25g,加水400ml,加热溶解,冷却后,将2种溶液混合,用水定溶至1000ml,避光保存,若生成沉淀,则不能继续使用;

磷标准液:

精确称取105℃下干燥的磷酸二氢钾（优级纯0.2195g溶解于水中,定量转入1000ml容量瓶中,加硝酸3ml,用水稀释至刻度,摇匀,即为50μg/ml的磷标准液㊂1.2　仪器

主要仪器有电子分析天平㊁高速离心机和可见分光光度计（721/722型㊂

1.3　方法

100ml㊂此溶液为试样测定液㊂取与消化试样同量的硫酸㊁高氯酸⁃硝酸消化液,按上述方法进行消化,作为空白溶液㊂

2.0㊁4.0㊁6.0㊁8.0㊁10.0ml,分别置于20ml具塞试管中,加入10ml钒钼酸铵显色剂,摇匀,加水至20ml（即磷浓度分别为0㊁2.5㊁5.0㊁10.0㊁15.0㊁20.0㊁25.0μg/ml,混匀,25℃环境下静置10~15min,以水为参比,用1cm比色皿,在可见分光光度计400nm波长下测各溶液的吸光度㊂以测出的吸光度对磷含量做标准回归方程㊂

2　结果

2.1　标准回归方程

依据磷标准液吸光度与磷含量值,采用SPSS统计软件进行回归分析,得到回归方程,即Y=297.699x-16.433,r=0.994㊂曲线拟合结果显示:

磷含量在0~25.0μg/ml时与吸光度呈良好的线性关系㊂

2.2　显色时间

准确吸取磷标准液0ml㊁1.0ml㊁2.0ml㊁4.0ml㊁6.0ml㊁8.0ml㊁10.0ml进行显色反应,分别显色5min㊁10min㊁15min㊁20min㊁25min㊁30min,在可见分光光度计400nm波长处测定吸光值㊂由图1可见,显色时间10min以前吸光值不稳定,测试溶液还处于颜色加深阶段,10~30min颜色比较稳定,无明显变化,因此显色时间在10~30min比较合适,本试验显色10~15min进行比色测定㊂

458江苏农业学报　2010年第26卷第4期

图1　显色时间与吸光度的关系

Fig.1　Therelationshipbetweendevelopingtimeandabsorbency2.3　乙醇浓度

分别采用无水乙醇㊁95%㊁90%和85%4种浓度的乙醇溶液萃取卵磷脂并比较萃取效果㊂由图2可知,当乙醇溶液浓度低于95%时,卵磷脂含量随乙醇溶液浓度的增加而增加,在95%时萃取效果最佳,原因可能是此时萃取剂的性质与卵磷脂的性质最接近,使卵磷脂在其中的溶解度达到最大;

但当用无水乙醇时,卵磷脂含量反而下降,可能是提取剂的极性过强,造成卵磷脂溶解度降低[12],因此,本试验采用95%的乙醇溶液作为卵磷脂的萃取剂

㊂

图2　不同浓度乙醇溶液的萃取效果

Fig.2　Theextractioneffectsofleithinextractedwithdifferentconcentrationofethanol

2.4　萃取方式

取新鲜鸡蛋2枚,去除蛋清,蛋黄混合搅拌均匀,取4份样品,固定其他试验条件不变,分别在离心管中分1次㊁2次㊁3次㊁4次加入乙醇共90ml萃取脂肪,进行比较试验㊂分2次加入90ml乙醇即先加入45ml,充分搅拌,离心10min,倾出上层液体于100ml容量瓶中,沉淀物中再加入45ml乙醇,充分振荡搅拌㊁离心,倾出上层液体于同一容量瓶中,定容至100ml㊂分3次或4次加入90ml乙醇即分别为每次加入30ml或22.5ml,处理方法同上㊂在相同条件下测定卵磷脂的含量㊂由图3可见,分次加入乙醇抽提,有利于蛋黄脂肪的提取,随着抽提次数的增加,卵磷脂含量也逐渐增加,但增加量不断减少,当抽提次数超过3次,卵磷脂含量增加趋势不明显,因而,本试验采用分3次加入90ml乙醇提取蛋黄脂肪

图3　抽提次数对卵磷脂含量的影响

Fig.3　Theeffectofextractiontimesonegg⁃yolklecithincon⁃tent

2.5　精密度

取2份新鲜蛋黄样品,重复测定6次,考察精密度,以相对标准偏差表示㊂测定结果（表2显示,卵磷脂含量分别为10.42%和10.71%,比Luz等[13]利用高效液相色谱⁃蒸发光散射器测定的鲜鸡蛋黄卵磷脂含量11.2%略低,可能是由于不同饲养条件下或不同品种的鸡生产的鸡蛋卵磷脂含量不同[14⁃15]㊂本方法的精密度为1.93%~2.90%,小于10%,符合卫生分析的要求㊂

表2　蛋黄卵磷脂含量测定的精密度（n=6

Table2　Precisionofdeterminationofegg⁃yolklecithin（n=6

样品号

样品重

（g吸光度磷含量

（μg卵磷脂含量

（%相对标准偏差

RSD（%

22.90

32.6　回收率

取2份空白蛋黄样品,分别添加50μg㊁100μg㊁200μg3个不同量的磷标准溶液于10ml蛋黄脂肪乙醇溶液中,每种浓度分别测定3次,结果见表3㊂由表3可见加标回收率分别为84.3%~91.2%和88.5%~93.4%,均符合卫生分析的要求㊂

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朱云芬等:

表3　加标回收试验结果（n=3

Table3　Theexperimentalresultsofstandardadditionrecovery（n=3

样品号磷本底含量

（μg添加量

（μg测定量

（μg回收率

（%

本研究以95%乙醇为萃取剂,分3次萃取蛋黄卵磷脂,经高氯酸⁃硝酸消化液消化,钒钼酸铵显色剂显色10~15min,于分光光度计400nm波长下比色测定磷含量,再乘以系数25即为卵磷脂含量㊂精密度为1.93%~2.90%,加标回收率为84.3%~93.4%,符合卫生分析的要求㊂该方法前处理简单,测定周期短,具有较好的精密度和较高的准确度,可用于鸡蛋蛋黄卵磷脂含量的测定㊂在实际测定过程中还应注意以下两点:

（1当取样量较大或脂肪提取效果不理想时,可适当增加乙醇的用量,延长搅拌和振荡时间以及增加提取次数,最大限度地提取蛋黄脂肪㊂（2显色时注意温度的控制㊂由于钒钼酸铵显色易受温度影响,因此在实际操作过程中应尽量保持室温在20℃以上㊂当室温过低时可利用水浴加热㊂参考文献:

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高等教育出版社,

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[4]　蔡秋声.蛋黄磷脂[J].粮食与油脂,1999（3:

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