刘士东主任讲解分子技术在肿瘤靶向药物治疗的应用PPT资料.ppt
《刘士东主任讲解分子技术在肿瘤靶向药物治疗的应用PPT资料.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《刘士东主任讲解分子技术在肿瘤靶向药物治疗的应用PPT资料.ppt（66页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。
由于DNA分子在染分子在染色体上是沿着染色体纵轴色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列，因而可以探呈线性排列，因而可以探针直接与染色体进行杂交针直接与染色体进行杂交从而将特定的基因在染色从而将特定的基因在染色体上定位体上定位荧光标记探针探针变性样本DNA变性杂交工作原理工作原理FISH检测染色体易位（检测染色体易位（Translocation）在在淋巴瘤分型中的应用淋巴瘤分型中的应用FISHFISH技术在淋巴造血系技术在淋巴造血系统肿瘤中的应用统肿瘤中的应用检测技术特点检测技术特点不同类型的淋巴瘤染色体易位类型不同优点l适用于形态学上难以诊断且IHC结果不理想的标本；
l适用于细胞数量少，形态不典型的活检及穿刺组织。
必须结合组织形态学和免疫组化结果作最后诊断！
FISH基因检测在淋巴瘤的应基因检测在淋巴瘤的应用用淋巴瘤淋巴瘤FISHFISH检测基因检测基因临床应用临床应用套细胞淋巴瘤套细胞淋巴瘤IGH/CCND1IGH/CCND1融合基因融合基因辅助诊断滤泡性淋巴瘤滤泡性淋巴瘤BCL2/IGHBCL2/IGH融合基因融合基因辅助诊断、判断预后弥漫性大弥漫性大BB细胞淋细胞淋巴瘤巴瘤BCL6BCL6基因断裂基因断裂重组重组辅助诊断、判断预后伯基特淋巴瘤伯基特淋巴瘤C-MYCC-MYC基因断裂重组基因断裂重组辅助诊断粘膜相关淋巴组粘膜相关淋巴组织淋巴瘤织淋巴瘤MALTIMALTI基因断裂基因断裂辅助诊断胃胃粘膜相关淋巴粘膜相关淋巴组织淋巴瘤组织淋巴瘤API2-MALTIAPI2-MALTI融合基因融合基因指导治疗弥漫大弥漫大BB细胞淋巴瘤（细胞淋巴瘤（DLBCLDLBCL）按免疫组化亚型分为按免疫组化亚型分为CD5阳性阳性DLBCL生发中心生发中心B细胞样变型细胞样变型（GCB）、非生发中心非生发中心B细胞样变型细胞样变型（non-GCB）3类类可根据可根据CD10、BCL6、MUM1的表达区分生发的表达区分生发中心中心B细胞样变型细胞样变型、非生发中心非生发中心B细胞样变型。
细胞样变型。
30%瘤细胞表达瘤细胞表达CD10或或CD10（-）、BCL-6（+）、MUM-1（-）诊断为诊断为GCB;
其他病例则为其他病例则为non-GCB。
BCL6BCL6基因断裂基因断裂-辅助诊断弥漫性大辅助诊断弥漫性大BB细胞淋巴瘤细胞淋巴瘤BCL6BCL6基因断裂重排基因断裂重排-判断预后判断预后目前研究确定至少目前研究确定至少40%40%的的DLBCLDLBCL涉及涉及BCL6BCL6基因重排。
基因重排。
一项针对一项针对102102名名DLBCLDLBCL患者的患者的BCL6BCL6重排情况及其与预后关系的重排情况及其与预后关系的研究显示，研究显示，BCL6BCL6阳性患者诊断治疗阳性患者诊断治疗3636个月后，疾病停止发展个月后，疾病停止发展的比率为的比率为82%82%，携带有，携带有BCL6BCL6重排的病例重排的病例预后较好预后较好。
BCL6BCL6基因断裂与弥漫性大基因断裂与弥漫性大BB细胞淋巴瘤细胞淋巴瘤Offit,K.NEnglJMed,1994.331
（2）:
p.74-80.结果判读结果判读IGH/CCND1融合基因可见于95%的套细胞淋巴瘤，是套细胞淋巴瘤与其他淋巴瘤鉴别的重要指标。
uIGH/CCND1IGH/CCND1融合基因融合基因-辅助诊断套细胞淋巴瘤。
辅助诊断套细胞淋巴瘤。
IGH/CCND1IGH/CCND1融合基因与套细胞淋巴瘤融合基因与套细胞淋巴瘤ll正常细胞：
两个红色信号，两个绿色信号。
正常细胞：
ll异常细胞：
一个红色信号，一个绿色信号，异常细胞：
一个红色信号，一个绿色信号，两个融合信号。
两个融合信号。
API2/MALT1API2/MALT1基因检测试剂盒基因检测试剂盒探针：
探针：
GLPAPI2/GLPMALT1GLPAPI2/GLPMALT1凋亡抑制因子凋亡抑制因子22基因（基因（apoptosisinhibitor-2,apoptosisinhibitor-2,API2API2）,位于位于1111号染色体号染色体;
粘膜相关淋巴组织基因（粘膜相关淋巴组织基因（Mucosa-associatedlymphoidtissue1,MALT1Mucosa-associatedlymphoidtissue1,MALT1），位于），位于1818号染色体。
号染色体。
API2基因与MALT1基因的融合导致凋亡抑制的增加，引起细胞不依赖于抗原刺激的生存优势。
uAPI2/MALT1API2/MALT1融合基因的检测可以指导抗融合基因的检测可以指导抗HPHP治疗治疗胃胃MALTMALT淋巴瘤与幽门螺旋杆菌（淋巴瘤与幽门螺旋杆菌（HPHP）感染）感染导致的慢性胃炎有关，导致的慢性胃炎有关，MALT1/API2MALT1/API2融合基因阴融合基因阴性的患者抗性的患者抗HPHP治疗有效，阳性患者抗治疗有效，阳性患者抗HPHP治疗无治疗无效。
效。
API2/MALT1API2/MALT1融合基因检测意义融合基因检测意义ll正常细胞：
BCL2/IGHBCL2/IGH重排发生在约重排发生在约80%-85%80%-85%的的FLFL患者中，检测患者中，检测BCL2/IGHBCL2/IGH基因重排可以辅助诊断基因重排可以辅助诊断FLFL。
BCL2/IGHBCL2/IGH阴性的阴性的FLFL患者患者33年生存率为年生存率为100%100%，而阳，而阳性者只有性者只有54%54%；
阴性者阴性者33年疾病无进展为年疾病无进展为87.5%87.5%，而阳性者只有，而阳性者只有13%13%。
BCL2/IGHBCL2/IGH融合基因与滤泡性淋巴瘤融合基因与滤泡性淋巴瘤nBCL2/IGH融合基因融合基因-辅助诊断滤泡性淋巴瘤辅助诊断滤泡性淋巴瘤nBCL2/IGH融合基因融合基因-判断预后判断预后ll正常细胞：
结果判读结果判读-阳性结果阳性结果结果判读结果判读-阳性结果阳性结果约约80%80%的伯基特淋巴瘤病例发生的伯基特淋巴瘤病例发生t（8t（8；
14）14）（q24;
q32q24;
q32）；
约约15%15%的伯基特淋巴瘤病例发生的伯基特淋巴瘤病例发生t（2t（2；
8）（p11;
q24）8）（p11;
q24）；
约约5%5%发生发生t（8t（8；
22）22）（q24;
q11q24;
q11）。
染色体染色体易位导致易位导致C-MYCC-MYC基因断裂重组基因断裂重组可能是伯基特可能是伯基特淋巴瘤的一个标志，可以应用于临床上伯基特淋巴瘤淋巴瘤的一个标志，可以应用于临床上伯基特淋巴瘤的辅助诊断。
的辅助诊断。
C-MYCC-MYC基因断裂与伯基特淋巴瘤基因断裂与伯基特淋巴瘤u辅助诊断伯基特淋巴瘤辅助诊断伯基特淋巴瘤结果判读结果判读-阳性结果阳性结果FISHFISH技术在乳腺癌靶向治疗应技术在乳腺癌靶向治疗应用用乳腺癌乳腺癌Her-2基基因因l致癌基因：
致癌基因：
Her-2Her-2基因；
基因；
l位点：
位点：
17q11.2-q1217q11.2-q12；
l编码蛋白：
跨膜蛋白（与编码蛋白：
跨膜蛋白（与表皮生长因子受体部分同源）；
表皮生长因子受体部分同源）；
l25-30%25-30%乳腺癌病人都有乳腺癌病人都有HER-2HER-2的扩的扩增；
增；
lHER-2HER-2基因扩增是决定基因扩增是决定HerceptinHerceptin治疗是否有效的关键性指标。
治疗是否有效的关键性指标。
lHER2HER2扩增的乳腺癌更具有侵袭性生扩增的乳腺癌更具有侵袭性生长能力。
长能力。
乳腺癌乳腺癌Her-2基因及蛋白检测基因及蛋白检测Cerb-B-2:
3+完全强膜阳性细胞完全强膜阳性细胞30%2+,1+,-FISH检测是否有基因扩增检测是否有基因扩增Her2基因基因检测流程检测流程石蜡组织标本石蜡组织标本IHC检测检测再用再用FISH方法检测方法检测1+3+2+Herceptin治疗治疗+再用再用FISH方法检测方法检测Herceptin治疗治疗FISH检测检测+再用再用FISH方法检测方法检测+A.无须计数的大簇团信无须计数的大簇团信号（高度扩增）号（高度扩增）B.颗粒状信号（颗粒状信号（R10，高度扩增）高度扩增）C.须计数的颗粒状信须计数的颗粒状信号（号（R=3.5，低度扩增）低度扩增）ACBHer-2基因扩增状况基因扩增状况30%的肿瘤细的肿瘤细胞全部的细胞胞全部的细胞膜高强度着色膜高强度着色免疫组化免疫组化（3+）与与FISH对比对比40100浸润性导管癌浸润性导管癌级级IHC：
+FISH：
呈呈簇团状高度扩增簇团状高度扩增100免疫组化免疫组化（）（）与与FISH扩增阳性扩增阳性浸润性导管癌浸润性导管癌级级IHC：
FISH：
呈簇状扩增呈簇状扩增肿瘤细胞不着色肿瘤细胞不着色40100基因突变检测方法基因突变检测方法1.RNA酶A切割（RnaseAcleavage）2.变性梯度凝胶电泳（DGGE）3.杂合双链分析法（HA）4.化学切割错配（CCM）5.碳化二亚胺检测（Carbodiimide,CDI）6.酶促切割错配（EnzymeMismatchCleavage,EMC）7.单链构象多态性（Single-StrandConformation）8.切割片段长度多态性9.DNA测序（Sequencing）10.双脱氧指纹图谱法（DideoxyFinger-printing,ddF）11.错配接合蛋白检测12.蛋白截短测试（proteintruncationtest）方法方法13.变性的高效液相色谱检测（DenaturingHighPerformanceLiguldChromatographyDHPLC）14.DNA芯片技术（DNAchip）15.等位基因特异性扩增16.等位基因特异性寡核苷酸片段分析（Allele-SpecificOligonucleotide,ASO）17.引物延伸检测（PrimerExtension,PEX）18.寡核苷酸连接检测（OligonucleotideLigationAssay,OLA）19.限制性片段分析（RestrictionFragmentAnalysis）20.突变体富集PCR法（mutant-enrichedPCR
升级会员 