细胞样品收集注意事项_精品文档Word格式文档下载.doc

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以T75培养瓶为例

1.把培养上清彻底转移至50或15ml离心管中，用PBS洗涤1-2次（PBS需彻底吸干，洗液时把板倾斜），每次洗涤时，均需把PBS转移到同一个50或15ml离心管，每培养瓶细胞准备一个离心管，切勿混淆；

2.每培养瓶加入300ulRIPA裂解液（加入裂解液时，一定用放平，是细胞与裂解液充分接触）,把上述离心管离心（水平转角离心机，1000RPM,8min）,彻底移除上清，加入300ulRIPA裂解液，吹打12下后，把裂解液转移至同一培养瓶中，则培养瓶中合并有200ul，盖好盖子，用封口膜封口后置于-80℃保存；

注意做好标记！

（如果用PBS洗涤后，细胞未飘起，则把600ulRIPA裂解液直接加入培养瓶）

备注：

给你提供的RIPA裂解液用EP管装，每管990ul，同时提供PMSF,使用时每管加入10ulPMSF,混匀再使用。

操作要快，做好一瓶，放好一瓶！

强烈建议一瓶一瓶的做。

表一

培养器皿

RIPA裂解液用量

备注

6孔板

150-300ul

根据细胞的密度适当调整用量，Trizol的最少用量为1ml

35mm培养皿

60mm培养皿

300-600ul

100mm培养皿

600-1200ul

T25培养瓶

T75培养瓶

600-1000ul