旋光法测定淀粉含量实验报告文档格式.docx

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　　为1.30（20℃），再用1.6％醋酸调整ph为2.3～2.5，过滤后备用。

　　氯化锡溶液：

溶解2.5gsncl4·

5h2o于75ml上述氯化钙溶液中。

　　2.仪器—

　　自动指示旋光计（附钠光灯），wZZ—T1型

　　容量瓶100ml

　　烧瓶100ml

　　四、操作方法

　　1.把样品研磨并通过40目以上的标准筛，称取2g样品，置于250ml烧杯中。

　　2.加水10m1，搅拌使样品湿润，加入70ml氯化钙溶液，盖上表面皿，在5min内加热至沸并继续加热15min。

加热时随时搅拌以防样品附在烧杯壁上。

如泡沫过多可加1～2滴辛醇消泡。

　　3.迅速冷却后，移入l00ml容量瓶中，用氯化钙溶液洗涤烧杯上附着的样品，洗液并入容量瓶中。

　　4.加5mI氯化锡镕液，用氯化钙溶液定容到刻度，混匀，过滤，弃去初滤液，收集滤液装入旋光管中，并于旋光计中测定样品溶液旋光度。

　　五、计算

　　淀粉（%）?

?

100L?

203?

m?

100

　　式中：

α——旋光度读数，度；

　　L——观测管长度，dm；

　　m——样品质量，g

　　203——淀粉的比旋光度，度

　　六、说明

　　1.氯化钙溶液可以作为淀粉的提取剂，是因为钙能与淀粉分子上的羧基形成络合物，使淀粉与水有较高的亲合力而易溶于水中。

　　2.淀粉溶液加热后，必须迅速冷却，以防止淀粉老化，形成高度晶化的不溶性淀粉分子微束。

　　3.氯化锡溶液的作用是沉淀蛋白质，因为蛋白质也具有旋光性（左旋性）。

蛋白质含量较高的样品，如高蛋白营养米粉，用旋光法测定时结果偏低，误差较大。

　　篇二：

植物组织中淀粉含量的测定

　　植物组织中淀粉含量的测定

　　20XX-01-1208:

55

　　Ⅰ蒽酮硫酸法

　　一、原理

　　淀粉是由葡萄糖残基组成的多糖，在酸性条件下加热使其水解成葡萄糖，然后在浓硫酸的作用下，使单糖脱水生成糠醛类化合物，利用蒽酮试剂与糠醛化合物的显色反应，即可进行比色测定。

　　二、实验材料、试剂与仪器设备

（一）实验材料

　　任何植物材料。

（二）试剂

　　浓硫酸（比重1.84）。

　　9.2mol/Lhclo4。

　　2%蒽酮试剂，同实验24。

　　（三）仪器设备

　　电子天平，容量瓶：

100mL4个、50mL2个，漏斗，小试管若干支，电炉，刻度吸管0.5mL1支、2.0mL3支、5mL4支，分光光度计，记号笔。

　　三、实验步骤

　　1.标准曲线制作

　　取小试管11支从0～10编号，按表24-3加入溶液和蒸馏水。

　　以下步骤按苯酚法或蒽酮法均可，见方法一或方法二，绘制相应的标准曲线。

　　表24-3各试管加入标准液和蒸馏水量

　　管号

　　1～2

　　3～4

　　5～6

　　7～8

　　9～10

　　淀粉标准液（ml）

　　0.4

　　0.8

　　1.2

　　1.6

　　2.0

　　蒸馏水（ml）

　　淀粉含量（mg）

　　40

　　80

　　120

　　160

　　200

　　2.样品提取称取50～100mg粉碎过100目筛的烘干样品，置于15mL刻度试管中，加入6～7mL80％乙醇，在80℃水浴中提取30min，取出离心

　　（3000rpm）5min，收集上清液。

重复提取两次（各10min）同样离心，收集三次上清液合并于烧杯，置于85℃恒温水浴，使乙醇蒸发至2～3mL，转移至50mL容量瓶，以蒸馏水定容，供可溶性糖的测定。

　　向沉淀中加蒸馏水3mL，搅拌均匀，放入沸水浴中糊化15min。

冷却后，加入2mL冷的9.2mol/L高氯酸，不时搅拌，提取15min后加蒸馏水至10mL，混匀，离心10min，上清液倾入50mL容量瓶。

再向沉淀中加入2mL4.6mol/L高氯酸，搅拌提取15min后加水至10mL，混匀后离心10min，收集上清于容量瓶。

然后用水洗沉淀1～2次，离心，合并离心液于50mL容量瓶用蒸馏水定容供测淀粉用。

　　3.测定取待测样品提取液1.0mL于试管中，再加蒽酮试剂5mL，快速摇匀，然后在沸水浴中煮10min，取出冷却，在620nm波长下，用空白调零测定光密度，从标准曲线查出淀粉含量（mg）。

　　四、结果计算：

含量（%）=100*c*VT/V1*1000*w

c——从标准曲线查得淀粉量，mg。

　　VT——样品提取液总体积,mL。

　　V1——显色时取样品液量，mL。

　　w——样品重，g。

　　0.9——由葡萄糖换算为淀粉的系数。

　　Ⅱ碘-淀粉比色法

　　对于淀粉含量较少的植株样品，也可采用碘–淀粉比色法。

淀粉在加热情况下能溶于硝酸钙溶液中，当碘化钾和硝酸钙共存时，碘能以碘–淀粉蓝色化合物沉淀全部淀粉。

将此沉淀溶于碱液，并在酸性条件下与碘作用形成蓝色溶液进行比色。

　　1．80％硝酸钙溶液。

　　2．0.5％碘液：

称5.00g结晶碘和10.00g碘化钾，放入研钵混合干研，然后加10mL蒸馏水研至全部碘溶解，将溶液全部转入1000mL容量瓶定容后，贮于磨口试剂瓶。

　　3．5％含碘硝酸钙溶液：

取10mL80％的硝酸钙溶液，加入160mL水再加入3mL0.5％的碘液混匀，现用现配。

　　4．标准淀粉溶液：

称取纯淀粉50mg于研钵中，加3mL80％硝酸钙溶液，研细并转移到100mL的三角瓶中，用15mL80％的硝酸钙溶液冲洗研钵，无损地收

　　集于三角瓶中。

将三角瓶置于沸水浴中煮沸5min，冷却后全部转入50mL容量瓶中并定容。

此液为1mg/mL的淀粉标准液。

　　5．0.1mol/Lnaoh。

　　6．0.1mol/Lhcl。

　　分析天平，研钵，容量瓶，量筒，三角瓶，水浴，小漏斗，电炉，离心机，离心管，试剂瓶。

　　1．称取1～3g叶片，剪碎放入研钵，加5mL80％的硝酸钙溶液，研磨成糊状移入100mL的三角瓶中，用10mL80％的硝酸钙冲洗研钵，无损地收集于三角瓶中，瓶口盖上小漏斗，在沸水浴上煮沸3～5min（叶片含淀粉少的3min，含淀粉多的5min），使样品中淀粉转变为胶体溶液。

　　2．给三角瓶中加20mL蒸馏水，混合液转入离心管中离心

　　（2000～3000rpm）2～3min，将离心后的淀粉胶体浑浊液移入100mL容量瓶（淀粉含量少时，可移入50mL容量瓶），三角瓶及离心沉淀物

　　用5～10mL热蒸馏水冲洗并同样离心，离心液并入容量瓶中（共洗2～3次）定容，即为淀粉提取液。

　　3．取5～10mL淀粉待测液，加入到盛有2mL0.5％碘液的离心管中，混匀静置15min后离心（3000rpm）5min，弃上清液。

沉淀用5％的含碘硝酸钙溶液冲洗两次，向冲洗后的沉淀中加入10mL0.1mol/L的naoh混匀，将离心管浸入沸水内5min，使沉淀溶解。

将溶液转入50mL容量瓶中，加入0.3mL0.5％碘液，用30mL左右的水冲洗并入容量瓶，加入2mL1mol/L的盐酸，用水定容并显色，在590nm波长处测定光密度。

　　4．绘制标准曲线取标准淀粉溶液

　　（1mg/mL）0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL于6个离心管中，用80％硝酸钙溶液将各管的体积补足至5mL，再向各管加入2mL0.5％碘液，混匀静置15min后离心，其他操作同样品测定步骤，显色后在590nm波长下测定光密度。

此系列溶液的淀粉含量分别

　　为0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mg，然后以光密度为横坐标，以淀粉含量为纵坐标绘制标准曲线。

　　w——样品重（g）。

　　III旋光法（谷物淀粉含量的测定）

　　一、原理：

酸性氯化钙溶液与磨细的含淀粉样品共煮，可使淀粉轻度水解。

同时钙离子与淀粉分子上的羟基络合，这就使得淀粉分子充分地分散到溶液中，成为淀

　　粉溶液。

淀粉分子具有不对称碳原子，因而具有旋光性，可以利用旋光仪测定淀粉溶胶的旋光度（α），旋光度的大小与淀粉的浓度成正比，据此可以求出淀粉含量。

溶提淀粉溶胶所用的酸性氯化钙溶液的ph值必须保持2.30，密度须为1.30，加时间的长短也要控制在一定范围。

因为只有在这些条件下，各种不同来源的淀粉溶液的比旋度［α］才都是203°

，恒定不变。

样品中其他旋光性物质（如糖分）须预先除去。

　　二、材料、仪器设备及试剂：

（一）材料：

面粉或其他风干样品

（二）仪器设备：

1.植物样品粉碎机；

2.离心机；

3.分析天平；

4.粗天平；

5.旋光仪及附件；

6.三角瓶；

7.分样筛（100目）；

　　8.布氏漏斗、抽滤瓶及真空泵；

9.离心管；

10.小电炉。

（三）试剂：

　　三、实验步骤：

　　1.样品准备：

（1）称取样品：

将样品风干、研磨、通过100目筛，精确称取约

　　2.5g样品细粉（要求含淀粉约2g，请参考附注估计），置于离心管内。

（2）脱脂：

加乙醚数ml到离心管内，用细玻棒充分搅拌，然后离心。

倾出上清液并收集以备回收乙醚。

重复脱脂数次，以去除大部分油脂、色素等（因油脂的的存在会使以后淀粉溶液的过滤困难）。

大多数谷物样品含脂肪较少，可免去这个脱脂手续。

　　（3）抑制酶活性：

加含有氯化高汞的乙醇溶液10ml到离心管内，充分搅拌，然后离心，倾去上清液，得到残余物。

（4）脱糖：

加80％乙醇10ml到离心管中，充分搅拌以洗涤残余物（每次都用同一玻棒），离心，倾去下清液。

重复洗涤数次以去除可溶性糖分。

　　2.溶提淀粉：

（1）加醋酸－氯化钙：

先用醋酸氯化钙溶液约10ml加到离心管中，搅拌后全部倾入25　　

0ml三角瓶内，再用醋酸氯化钙溶液50ml分数次洗涤离心管，洗涤液并入三角瓶内，搅拌玻棒也转移到三角瓶内。

（2）煮沸溶解：

先用蜡笔标记液面高度，直接置于加有石棉网的小电炉上，在4min～5min内迅速煮沸，保持沸腾15min～17min，立即将三角瓶取下，置流水中冷却。

煮沸过程中要时加搅拌，勿令烧焦；

要调节温度，勿使泡沫涌出瓶外；

常用玻璃将瓶侧的细粒擦下；

并加水保持液面高度。

　　3.沉淀杂质和定容：

（1）加沉淀剂：

将三角瓶内的水解液转入100ml容量瓶，用醋酸氯化钙溶液充分洗涤三角瓶瓶，并入容量内，加30％Znso41ml混合后，再加15％K4Fe（cn）61ml，用水稀释至接近刻度时，加95％乙醇一滴以破坏泡沫，然后稀释到刻度，充分混合，静置，以使蛋白充分沉淀。

（2）滤清：

用布氏漏斗（加一层滤纸）吸气过滤。

先倾清溶液约10ml于此滤纸上，使其完全湿润，让溶液流干，弃去滤液，再倾清溶液进行过滤，用干燥的容器接受此滤液，收集约50ml，即可供测定之用。

　　4.测定旋光度：

用旋光测定管装