药物含量测定方法Word文件下载.docx

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取本品约0.5g，精密称定，加乙醇20ml溶解后，加麝香草酚酞指示剂6滴，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定，并将测定结果用空白试验校正，即得。

每1ml氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于22.63mg的C11H18N2O3。

本法操作简便，但终点较难判断，采用空白对照可帮助终点的确定。

由于操作过程中易吸收空气中的二氧化碳，而使终点的淡蓝色褪去，采用空白对照亦难以取得满意的结果，因此可采用电位法指示终点。

3、紫外分光光度法

巴比妥类药物在酸性介质中几乎不电离，无明显的紫外吸收，但在碱性介质中电离为具有紫外吸收特征的结构，因此可采用紫外分光光度法测定其含量。

本法专属性强、灵敏度高，被广泛用于巴比妥类药物及其制剂的测定，以及固体制剂的溶出度和含量均匀度的检查，也常用于体内巴比妥类药物的检测。

直接测定的紫外分光光度法：

本法是将供试品溶解后，根据供试品溶液的pH值，选用其相应的λmax处，直接测定对照品溶液和供试品溶液的吸光度，在计算药物的含量。

测定方法：

取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取适量（约相当于硫喷妥钠0.25g），置500ml量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取适量，用0.4%氢氧化钠溶液并定量稀释成每1ml中约含5μg的溶液；

另取硫酸苯妥对照品，精密称定，用0.4%氢氧化钠溶液并定量稀释制成每1ml中约含有5μg的溶液。

照分光光度法，在304nm的波长处测定吸光度。

根据每支的平均装量计算。

每1mg硫喷妥相当于1.091mg的C11H17N2NaS。

供试品中硫喷妥钠的量按下式计算：

硫喷妥钠（mg）=1.091*Cs*Au/As*D*10-3

硫喷妥钠标示量（%）=硫喷妥钠的量（mg）*平均装量/供试品量*100%

二、芳酸及其酯类药物

以ASA及其制剂为例苯甲酸　pKa4.20水杨酸　pKa2.98　酸性较强

羧酸邻位-OH，吸电子基团，使酸性增加；

并有氢键，更增加了其极性，因此，可采取直接滴定法

（一）酸碱滴定法

1、直接滴定法

pKa3~6的药物溶于中性醇,可直接用NaOH滴定

pKa6~9的药物要用非水溶液滴定法

乙醇作用：

溶解ASA；

防止ASA在水溶液中滴定过程易水解

中性乙醇：

对指示剂（酚酞）而言为中性，可消除滴定误差

滴定方法：

取本品约0.4g，精密称定，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20ml溶解后，加酚酞指示液3滴，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定。

每1ml的氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于18.02mg的C9H8O4。

丙磺舒（Ch.P.BP.JP等）苯甲酸（Ch.P等）均采用本法

2、水解后剩余滴定法

USP23方法：

取本品约1.5g，精密称定，准确加NaOH液（0.5mol/L）50.0ml，水浴上煮沸15min，放冷，以酚酞为指示剂，用H2SO4液（0.25mol/L）滴定剩余的NaOH，并将滴定结果用空白试验校正。

每1ml的NaOH液（0.5ml/L）相当于45.04mg的C9H9O4

3、两步滴定法

用于Aspirin片测定，片剂中有稳定剂

水解产物

水杨酸SA

HAc

为了避免这些酸类的干扰，采用两步滴定法

第一步：

NaOH滴定所有的酸：

ASA，CA，TA，SA，HAc

第二步

（二）双相滴定法

Ch.P2005用于苯甲酸钠的测定苯甲酸钠为芳酸碱金属盐，易溶于水；

苯甲酸不溶于水，不利于终点的正确判断。

因此，利用苯甲酸能溶于有机溶剂的性质，采用双相滴定法。

取本品约1.5g，精密称定，置分液漏斗中，加水25ml、乙醚50ml及甲基橙指示液2滴，用盐酸滴定液（0.5mol/L）滴定，边滴边振摇，至水层显橙红色；

分取水层，置具塞锥形瓶中，乙醚层用水5ml洗涤，洗液并入锥形瓶中，加乙醚20ml，继续用盐酸滴定液（0.5mol/L）滴定边滴边振摇，至水层显持续的橙红色。

每1ml盐酸滴定液（0.5mol/L）相当于72.06mg的C7H5NaO2。

（三）柱分配色谱-紫外分光光度法

ASAcapsule等制剂除用上述两步滴定法外，最好用色谱法，可以分离酸性杂质和辅料以及稳定剂等，经分离后同时测定ASA与SA

如USP用柱分配色谱-UV测定ASACapsule

（四）HPLC

阿司匹林

取装量差异项下内容物，研细，精密称取适量（约相当于阿司匹林0.1g），置100ml量瓶中，用1%冰醋酸无水甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml,置100ml量瓶中，用1%冰醋酸无水甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取20μl,注入液相色谱仪，记录色谱图；

另取阿司匹林对照适量，用1%冰醋酸无水甲醇溶液溶解并定量稀释成每1ml中约含50μg的溶液，同法测定。

三、芳香胺类药物

1、亚硝酸钠滴定法

原理：

条件：

（1）加入适量溴化钾加快反应

（2）加入过量盐酸1:

2.5~6

（3）室温10℃～30℃（4）滴定管尖端插入液面下滴定

终点指示方法：

（1）永停法

（2）外指示剂法（碘化钾－淀粉）

2、非水溶液滴定法

注：

滴定前滴加醋酸汞溶液，以除去氢卤酸的干扰

盐酸丁卡因－加醋酐以突出终点；

例：

盐酸利多卡因的非水滴定反应过程：

3、分光光度法

对乙酰氨基酚在257nm波长处有最大吸收，中国药典2005版采用百分吸收系数（）法，测定对乙酰氨基酚的含量。

对乙酰氨基酚、片剂、咀嚼片、注射液、栓剂、胶囊、颗粒剂

【含量测定】取本品约40mg，精密称定，置250ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液50ml溶解后，加水至刻度，摇匀，精密量取5ml，至100ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液10ml，加水至刻度，摇匀，照紫外－可见分光广度法（药典Chp2005版附录ⅣA），在257nm的波长处测定吸光度，按C8H9NO2的吸收系数（）为715计算，即得。

4、比色法

芳伯氨基的重氮化－偶合反应生成有色偶氮染料，专属性差

盐酸普鲁卡因与1,2-萘醌-4-磺酸钠溶液反应生成棕红色化合物，适用于盐酸普鲁卡因及其制剂的常规分析

5、快速荧光测定

盐酸普鲁卡因胺结构中的芳伯氨基与荧胺反应，生成荧光物，可在λ400nm、λ485nm波长处测定荧光强度，较重氮化法灵敏、简便，适用于普鲁卡因胺制剂的测定。

6、高效液相色谱法（HPLC）

以苯甲酸为内标，可以同时测定盐酸普鲁卡因注射液中的普鲁卡因及其降解产物对氨基苯甲酸（PABA），不需分离提取，准确简便。

色谱条件（色谱柱、流动相、检测器）

测定方法（供试品溶液、对照品溶液的制备，进样量，计算方法）

应用示例：

对乙酰氨基酚急性中毒的血药浓度测定

色谱条件：

Nova-PackC18柱（4μm,150mm×

3.9mm），Nova-PackC18预柱

柱温：

25℃，流动相为甲醇－水（50:

50）流速：

0.8ml/min

二极管阵列检测器，检测波长254nm

血浆样品制备：

取静脉血3～4ml，置含肝素抗凝剂的离心管中，离心分离5min（3000rpm），上清液为待测血浆。

吸取上述血浆1ml，加饱和硫酸锌溶液1ml，沉淀蛋白后，加入乙醚5ml涡旋混合1min，离心20min（3000rpm）。

精密吸取乙醚液3.0ml于50℃氮气流吹干，冷至室温，以蒸馏水500μl溶解残渣，取10μl进样。

对照品溶液的制备：

配制对乙酰氨基酚甲醇溶液（10mg/ml），并用甲醇逐级稀释成浓度为0.01mg/ml～5mg/ml的对照品溶液，4℃冰箱存放备用。

四、苯乙胺类药物

1、非水溶液滴定法－弱碱性

冰醋酸为溶剂、醋酸汞消除氢卤酸的干扰、结晶紫为指示剂（盐酸甲氧明的指示剂为萘酚苯甲醇，也可电位法指示终点）、若碱性较弱则加醋酐使突跃明显。

2、溴量法

基本原理：

取本品约0.1g，精密称定，置碘瓶中，加水20ml使溶解，精密加溴滴定液（0.1mol/L）50ml，再加盐酸5ml,立即密塞，放置15分钟并时时振摇，注意微开瓶塞，加碘化钾试液10ml，立即密塞，振摇后，用硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。

每1ml溴滴定液（0.1mol/L）相当于3.395mg的C9H13NO2·

HCl。

3、比色法

注意：

由于偶合剂（N-（1-萘基）-乙二胺）与亚硝酸也能显色干扰测定，所以在重氮化后，应加入氨基磺酸铵分解剩余的亚硝酸。

4、提取酸碱滴定法

原理：

溶解性－盐酸盐或硫酸盐可溶于水，游离碱不溶于水，溶于有机溶剂。

方法：

供试品溶于水或矿酸，加入适量碱性试剂使药物游离，用适当的有机溶剂提取，将提取液蒸干，残渣中加中性乙醇溶解，用标准酸滴定液直接滴定（或在提取液中加定量过量的标准酸滴定液，蒸去有机溶剂后，再用标准碱滴定液回滴定）。

例：

硫酸苯丙胺→加水溶解→加氢氧化钠试液8ml→加氯化钠使饱和→乙醚多次提取→合并乙醚液→精密加硫酸滴定液（0.05mol/L）25ml振摇→低温蒸去乙醚→放冷至室温→加甲基红指示液2滴→用氢氧化钠（0.1mol/L）滴定。

每1ml硫酸滴定液（0.05mol/L）相当于18.42mg的C18H26N2.H2SO4。

5、荧光分光光度法

基本原理：

肾上腺素含有的邻苯二酚结构，被弱氧化剂氧化，生成肾上腺素红，发生转位为N-甲基-3,5,6-三羟基吲哚（THI）。

（Tri-Hydroxyl-Indole-）

本法还可用于测定微量儿茶酚胺类药物。

6、高效液相色谱法

高效分离，高灵敏度和高选择性－可用于制剂常规分析，临床药物监测和体内药物动力学研究。

例1：

重酒石酸去甲肾上腺素注射液分析

色谱柱：

ODS

流动相：

0.14%庚烷基磺酸钠溶液－甲醇（65:

35），用磷酸调pH至3.0±

0.1，流速：

1.0ml/min

检测波长：

280nm

精密量取本品适量（约相当于重酒石酸去甲肾上腺素4mg），置25ml量瓶中，加醋酸溶液（1→25）稀释至刻度，摇匀，取2μl注入液相色谱仪，记录色谱图；

另取重酒石酸去甲肾腺素对照品适量，精密称定，加醋酸溶液（1→25）制成每1ml中含0.16mg的溶液，同法测定。

按外标法以峰面积计算，即得。

7、衍生化气相色谱法

盐酸芬氟拉明（fenfluraminehydrochlor